湖南绥宁青钱柳中槲皮素、山柰素含量测定

陈丹++史蕾喆++李柯++李若存

摘 要：目的：建立绥宁青钱柳中槲皮素和山柰素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），检测波长360 nm。结果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范围呈良好的线性关系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范围呈良好的线性关系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD为1.15%；山柰素99.51%，RSD为2.05%。结论：该方法可靠、便捷，可以作为控制青钱柳药材质量的方法。

关键词：青钱柳 槲皮素 山柰素 高效液相色谱法

中图分类号： R282 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青钱柳为胡桃科青钱柳属植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我国独有的单种属植物，是国家重点保护的濒危植物之一，属三类保护植物。青钱柳广泛分布于江西、浙江、江苏、安徽、福建、台湾、湖北、四川、贵州、云南等地海拔420～2500 m的山区、溪谷或石灰岩山地。后经调研发现，我省绥宁县[1]亦有分布。研究表明青钱柳叶中富含黄酮、三萜、甾体类化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度约为蔗糖的250倍。这些化合物成分能有效降低甘三脂和胆固醇，使其具有降血压、降血糖、降血脂的功能，同时对增强人体免疫力、抗氧化、抗衰老有独特作用。本文采用高效液相色谱法对绥宁产青钱柳中黄酮类化合物进行了含量测定[4-7]，为进一步开发和利用青钱柳提供依据。

1 仪器、试剂与药材

1.1 仪器

高效液相色谱仪（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色谱柱（大连依利特分析仪器有限公司）；EC2006色谱数据处理系统（大连依利特分析仪器有限公司）。槲皮素（批号100081-200907），供含量测定用；山柰素（批号110861-201209），供含量测定用，均购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯（均为湖南汇虹试剂有限公司提供），水为重蒸馏水。药材采自湖南绥宁县，经湖南省中医药研究院中药研究所生药研究室鉴定为青钱柳叶。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）为流动相；检测波长为360 nm。理论塔板数按槲皮素峰计应不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备

取槲皮素对照品、山柰素对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，精密加入盐酸5 mL，置90 ℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。对照品与供试品色谱图分别见图1、图2。

2.4 线性关系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL进样，测定其峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，槲皮素回归方程为：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回归方程为：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999结果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范围内具有良好的线性关系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范围内具有良好的线性关系。数据见表1，表2；标准曲线图见图3、图4。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定其峰面积积分值，其结果见表3，表4。

2.6 稳定性试验

分别精密吸取供试品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h进样，测定其峰面积积分值，结果见表5，表6。

2.7 重复性试验

取同一批号药材共6份，按上述方法测定其峰面积积分值，结果见表7，表8。

2.8 回收率试验

精密称取槲皮素含量为1.27 mg/g、山柰素含量为2.22 mg/g药材约0.75 g，共6份，分别精密加入槲皮素对照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素对照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述测定法项下的方法测定含量，结果见表9、表10。

2.9 不同采收时间青钱柳药材含量测定

分别取不同采收时间青钱柳叶粉末（过三号筛）约1.5 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，精密加入盐酸5 mL，置90 ℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，结果见表11。

3 讨论

我们对湖南省绥宁县产青钱柳叶不同采收期的含量结果表明，槲皮素与山柰素在药材中的总量以6月份含量最高，依据二种成分的综合含量，结合青钱柳的生长期、采收量及产地的气候因素等，青钱柳的采收期以6月为宜。

参考文献

[1] 曾跃辉，刘新华，郑红发，等.青钱柳资源利用与开发研究[J].湖南农业科学，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青钱柳化学成分研究[J].中国中药杂志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黄锡山，陆园园，等.青钱柳化学成分的研究[J].中成药，2008，30（2）：238-240.

[4] 郦宏岩，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC测定青钱柳中槲皮素和山柰素的含量[J].药学与临床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鹏，刘韶，李新中，等.HPLC测定地锦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中药材，2005，28（8）：666-667.

[6] 杨燕飞.HPLC测定金胆片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成药，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 郑瑁，孙兰香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素总含量的HPLC法测定[J].中国新药杂志，2005，14（5）：592-594.endprint

摘 要：目的：建立绥宁青钱柳中槲皮素和山柰素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），检测波长360 nm。结果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范围呈良好的线性关系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范围呈良好的线性关系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD为1.15%；山柰素99.51%，RSD为2.05%。结论：该方法可靠、便捷，可以作为控制青钱柳药材质量的方法。

关键词：青钱柳 槲皮素 山柰素 高效液相色谱法

中图分类号： R282 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青钱柳为胡桃科青钱柳属植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我国独有的单种属植物，是国家重点保护的濒危植物之一，属三类保护植物。青钱柳广泛分布于江西、浙江、江苏、安徽、福建、台湾、湖北、四川、贵州、云南等地海拔420～2500 m的山区、溪谷或石灰岩山地。后经调研发现，我省绥宁县[1]亦有分布。研究表明青钱柳叶中富含黄酮、三萜、甾体类化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度约为蔗糖的250倍。这些化合物成分能有效降低甘三脂和胆固醇，使其具有降血压、降血糖、降血脂的功能，同时对增强人体免疫力、抗氧化、抗衰老有独特作用。本文采用高效液相色谱法对绥宁产青钱柳中黄酮类化合物进行了含量测定[4-7]，为进一步开发和利用青钱柳提供依据。

1 仪器、试剂与药材

1.1 仪器

高效液相色谱仪（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色谱柱（大连依利特分析仪器有限公司）；EC2006色谱数据处理系统（大连依利特分析仪器有限公司）。槲皮素（批号100081-200907），供含量测定用；山柰素（批号110861-201209），供含量测定用，均购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯（均为湖南汇虹试剂有限公司提供），水为重蒸馏水。药材采自湖南绥宁县，经湖南省中医药研究院中药研究所生药研究室鉴定为青钱柳叶。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）为流动相；检测波长为360 nm。理论塔板数按槲皮素峰计应不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备

取槲皮素对照品、山柰素对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，精密加入盐酸5 mL，置90 ℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。对照品与供试品色谱图分别见图1、图2。

2.4 线性关系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL进样，测定其峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，槲皮素回归方程为：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回归方程为：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999结果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范围内具有良好的线性关系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范围内具有良好的线性关系。数据见表1，表2；标准曲线图见图3、图4。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定其峰面积积分值，其结果见表3，表4。

2.6 稳定性试验

分别精密吸取供试品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h进样，测定其峰面积积分值，结果见表5，表6。

2.7 重复性试验

取同一批号药材共6份，按上述方法测定其峰面积积分值，结果见表7，表8。

2.8 回收率试验

精密称取槲皮素含量为1.27 mg/g、山柰素含量为2.22 mg/g药材约0.75 g，共6份，分别精密加入槲皮素对照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素对照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述测定法项下的方法测定含量，结果见表9、表10。

2.9 不同采收时间青钱柳药材含量测定

分别取不同采收时间青钱柳叶粉末（过三号筛）约1.5 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，精密加入盐酸5 mL，置90 ℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，结果见表11。

3 讨论

我们对湖南省绥宁县产青钱柳叶不同采收期的含量结果表明，槲皮素与山柰素在药材中的总量以6月份含量最高，依据二种成分的综合含量，结合青钱柳的生长期、采收量及产地的气候因素等，青钱柳的采收期以6月为宜。

参考文献

[1] 曾跃辉，刘新华，郑红发，等.青钱柳资源利用与开发研究[J].湖南农业科学，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青钱柳化学成分研究[J].中国中药杂志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黄锡山，陆园园，等.青钱柳化学成分的研究[J].中成药，2008，30（2）：238-240.

[4] 郦宏岩，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC测定青钱柳中槲皮素和山柰素的含量[J].药学与临床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鹏，刘韶，李新中，等.HPLC测定地锦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中药材，2005，28（8）：666-667.

[6] 杨燕飞.HPLC测定金胆片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成药，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 郑瑁，孙兰香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素总含量的HPLC法测定[J].中国新药杂志，2005，14（5）：592-594.endprint

摘 要：目的：建立绥宁青钱柳中槲皮素和山柰素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），检测波长360 nm。结果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范围呈良好的线性关系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范围呈良好的线性关系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD为1.15%；山柰素99.51%，RSD为2.05%。结论：该方法可靠、便捷，可以作为控制青钱柳药材质量的方法。

关键词：青钱柳 槲皮素 山柰素 高效液相色谱法

中图分类号： R282 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青钱柳为胡桃科青钱柳属植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我国独有的单种属植物，是国家重点保护的濒危植物之一，属三类保护植物。青钱柳广泛分布于江西、浙江、江苏、安徽、福建、台湾、湖北、四川、贵州、云南等地海拔420～2500 m的山区、溪谷或石灰岩山地。后经调研发现，我省绥宁县[1]亦有分布。研究表明青钱柳叶中富含黄酮、三萜、甾体类化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度约为蔗糖的250倍。这些化合物成分能有效降低甘三脂和胆固醇，使其具有降血压、降血糖、降血脂的功能，同时对增强人体免疫力、抗氧化、抗衰老有独特作用。本文采用高效液相色谱法对绥宁产青钱柳中黄酮类化合物进行了含量测定[4-7]，为进一步开发和利用青钱柳提供依据。

1 仪器、试剂与药材

1.1 仪器

高效液相色谱仪（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色谱柱（大连依利特分析仪器有限公司）；EC2006色谱数据处理系统（大连依利特分析仪器有限公司）。槲皮素（批号100081-200907），供含量测定用；山柰素（批号110861-201209），供含量测定用，均购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯（均为湖南汇虹试剂有限公司提供），水为重蒸馏水。药材采自湖南绥宁县，经湖南省中医药研究院中药研究所生药研究室鉴定为青钱柳叶。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）为流动相；检测波长为360 nm。理论塔板数按槲皮素峰计应不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备

取槲皮素对照品、山柰素对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，精密加入盐酸5 mL，置90 ℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。对照品与供试品色谱图分别见图1、图2。

2.4 线性关系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL进样，测定其峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，槲皮素回归方程为：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回归方程为：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999结果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范围内具有良好的线性关系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范围内具有良好的线性关系。数据见表1，表2；标准曲线图见图3、图4。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定其峰面积积分值，其结果见表3，表4。

2.6 稳定性试验

分别精密吸取供试品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h进样，测定其峰面积积分值，结果见表5，表6。

2.7 重复性试验

取同一批号药材共6份，按上述方法测定其峰面积积分值，结果见表7，表8。

2.8 回收率试验

精密称取槲皮素含量为1.27 mg/g、山柰素含量为2.22 mg/g药材约0.75 g，共6份，分别精密加入槲皮素对照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素对照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述测定法项下的方法测定含量，结果见表9、表10。

2.9 不同采收时间青钱柳药材含量测定

分别取不同采收时间青钱柳叶粉末（过三号筛）约1.5 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，精密加入盐酸5 mL，置90 ℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，结果见表11。

3 讨论

我们对湖南省绥宁县产青钱柳叶不同采收期的含量结果表明，槲皮素与山柰素在药材中的总量以6月份含量最高，依据二种成分的综合含量，结合青钱柳的生长期、采收量及产地的气候因素等，青钱柳的采收期以6月为宜。

参考文献

[1] 曾跃辉，刘新华，郑红发，等.青钱柳资源利用与开发研究[J].湖南农业科学，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青钱柳化学成分研究[J].中国中药杂志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黄锡山，陆园园，等.青钱柳化学成分的研究[J].中成药，2008，30（2）：238-240.

[4] 郦宏岩，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC测定青钱柳中槲皮素和山柰素的含量[J].药学与临床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鹏，刘韶，李新中，等.HPLC测定地锦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中药材，2005，28（8）：666-667.

[6] 杨燕飞.HPLC测定金胆片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成药，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 郑瑁，孙兰香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素总含量的HPLC法测定[J].中国新药杂志，2005，14（5）：592-594.endprint