高效液相色谱法测定硫酸沙丁胺醇

肖雪红

（宝鸡职业技术学院 化学工程系，陕西 宝鸡 721013）

硫酸沙丁胺醇是一种长效β2-受体激动剂，临床上用于缓解由支气管哮喘、急性支气管炎、喘息性支气管炎或肺气肿等气道阻塞性疾病引起的呼吸困难等症状.目前，硫酸沙丁胺醇的检测方法主要以采用紫外检测器或二极管阵列检测器的液相色谱法为主［1-7］.本文作者使用反相-高效液相色谱-电化学法检测（RPHPLC-ECD）测定了片剂中的硫酸沙丁胺醇的含量.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

安科TCL-16C离心机（上海兰科仪器有限公司）；HP-1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司），包括四元梯度泵（G1311A），二极管阵列检测器（G1315A）和电化学检测器（1049A），色谱数据通过HP工作站采集获得；DL-180型超声清洗器（象山县石浦海天电子仪器厂）；IX-501型pH计（北京大学化学系）；WG-2003台式干燥箱（重庆试验设备厂一分厂）；Milli-QG超纯水制备仪（美国Millipore公司）.

硫酸沙丁胺醇购自美国Sigma公司，纯度≥99%；甲醇为色谱纯；冰醋酸为分析纯；所用水为超纯水；硫酸沙丁胺醇片由江苏亚邦爱普森摇曳有限公司生产.

1.2 溶液制备

1.2.1 对照品溶液的制备

准确称取硫酸沙丁胺醇对照品适量，置于25mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，振荡均匀后得硫酸沙丁胺醇（3.70×102mg·L-1）的单一对照品储备液.其他不同浓度的各对照品溶液由单一储备液稀释得到.

1.2.2 供试品溶液的制备

称取适量散装硫酸沙丁胺醇药片，研细，取其粉末0.040 0g置于50mL锥形瓶中，准确加入甲醇25.00 mL，称定其重量.用频率为35%±5%kHz，功率为180W超声仪超声10min，取出，放至室温后再称定重量，然后用甲醇补足减失的重量，振荡均匀.取出3mL溶液于5mL离心试管中，3 000r·min-1下离心5 min，吸取上清液并用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液.

1.3 色谱条件

采用长度为150mm、外径为4.6mm和内径为5.0μm的Zorbax SB-C18色谱柱（美国Agilent公司）；流动相包括（A）甲醇、（B）水-冰醋酸（pH＝3.00）.采用梯度洗脱，其洗脱程序如下：0min时A-B（体积比10∶90），10min时A-B（体积比40∶60），流速为1.0mL·min-1；ECD的工作电位为1.0V，柱温为30℃.按上述条件获得的对照品（a）和样品（b）的色谱图见图1.硫酸沙丁胺醇的保留时间为4.41min.

图1 硫酸沙丁胺醇对照品（a）和样品（b）色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of salbutamol sulfate（a）and sample（b）

2 结果与讨论

2.1 线性关系考察

准确移取“1.2.1”项下所配制的一定体积的硫酸沙丁胺醇对照品储备液于10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制硫酸沙丁胺醇浓度分别为0.944，8.44，16.9，33.8mg·L-1的系列对照品溶液，用0.45μm的微孔滤膜过滤.取对照品溶液10.0μL，按所选色谱条件进样，平行测定3次，以平均峰面积积分值Y对质量浓度w（mg·L-1）进行线性回归，获得硫酸沙丁胺醇的回归方程.其相关参数、相关系数、线性范围见表1.结果表明：硫酸沙丁胺醇在0.944～33.8mg·L-1范围内，线性关系良好.

表1 硫酸沙丁胺醇的斜率、截距、相关系数、线性范围和检出限（n＝3）Table 1 Slope，intercept，linear ranges and limit of detection of salbutamol sulfate（n＝3）

2.2 加样回收率实验

准确称取已知含量的硫酸沙丁胺醇粉末9份，每份10mg，将其分别置于25mL容量瓶中，每3份为一组.向三组硫酸沙丁胺醇样品中分别准确加入浓度为2.7×102mg·L-1的硫酸沙丁胺醇对照品溶液0.6 mL，0.1mL和0.02mL.按照已选定好的方法制备溶液后，按照本实验中所描述的色谱条件进样，进样量为10.0μL，重复进样3次，采用外标法计算加入对照品后供试品溶液中硫酸沙丁胺醇的含量，三种不同浓度的样品加样回收率及相对标准偏差如表2所示.

表2 硫酸沙丁胺醇的加标回收率（n＝3）Table 2 Recoveries of salbutamol sulfate（n＝3）

2.3 精密度、重复性和稳定性实验

精密量取一定体积的“1.2.1”项下所配制的硫酸沙丁胺醇对照品储备液加入10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成对照品溶液，用0.45μm的微孔滤膜过滤.按照本实验中所描述的对照品溶液的制备方法和所选择的色谱条件进样，连续测定6次，每次10.0μL，计算硫酸沙丁胺醇的含量的RSD为4.6%.

准确称取硫酸沙丁胺醇片剂粉末（0.010 0g）5份，根据“1.2.2”项所述方法制备溶液后，依照“1.3”项色谱条件下进行分析，计算硫酸沙丁胺醇的含量的RSD为2.1%.

对供试品溶液在8h之内每隔1h进样10.0μL，记录色谱峰面积，测得硫酸沙丁胺醇的含量的RSD为1.2%；对供试品溶液在8d内每隔24h进样10.0μL，记录色谱峰面积，测得硫酸沙丁胺醇的峰面积积分值的RSD为3.5%.

2.4 样品分析

分别称取不同批号的药片三份，依照“1.2.2”项方法制备供试品溶液，移取10.0μL，按照选定好的色谱条件测定硫酸沙丁胺醇的峰面积，采用标准曲线法计算其含量，结果见表3.

表3 样品中硫酸沙丁胺醇含量测定结果Table 3 Determination results of salbutamol sulfate in sample /（mg·g-1，n＝3）

2.5 提取条件的选择

考察了水、25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇和甲醇作为提取溶剂对提取效率的影响.按照“1.2溶液制备”中“1.2.2”项所述操作进行提取，然后按照“1.3”项中的色谱条件测定.结果表明，随着甲醇浓度的增加，硫酸沙丁胺醇的峰面积逐渐增加.同时，考察了提取时间为10，20，30，40和50min时对被测物质提取效率的影响.结果表明，随着超声提取时间的增加，硫酸沙丁胺醇的峰面积并未明显增加.实验中，选择甲醇为提取溶剂，超声提取时间为10min.

2.6 醋酸水溶液pH的影响

实验中，考察了醋酸水溶液pH为2.62，3.00，3.50，4.00，5.02和7.00时，对硫酸沙丁胺醇色谱分离效果的影响.结果表明，随着pH的增加，容量因子几乎无任何变化，硫酸沙丁胺醇的保留时间也无明显变化.同时，考虑到色谱柱所能承受的最高酸度，实验中采用醋酸水溶液的pH为3.00.

2.7 工作电位的选择

吸取硫酸沙丁胺醇的对照品储备液500μL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按照“1.3”项所述色谱条件，分别进样10.0μL，考察电位范围为0.3～1.1 V时硫酸沙丁胺醇在电极上的响应情况，获得相应的电流电位曲线（见图2）.由图2可见，随着电位的增加，硫酸沙丁胺醇的电化学响应一直在增加.同时，考虑到电压过大，基线噪音增加，信噪比降低，实验中选择的工作电位为1.0V（相对于Ag/AgCl参比电极）.

图2 硫酸沙丁胺醇的电流电位曲线Fig.2 Curves of current versus potential for the oxidation salbutamol sulfate

3 结论

建立了市售片剂中硫酸沙丁胺醇的高效液相色谱-电化学测定新方法.与文献报道［2-3］的方法相比，本法具有线性范围宽的优点.

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典，二部［M］.北京：化学工业出版社，2005：734.

［2］刘 伟，刘 玲.高效液相色谱法测定沙丁胺醇胶囊的含量［J］.中国药业，2006，15（14）：26-26.

［3］苏 茜.HPLC测定复方硫酸沙丁胺醇双层片含量的研究［J］.现代食品与药品杂志，2006，16（4）：19-21.

［4］范 理，王 彤，田 静，等.固相萃取-GC-MS法测定饲料中的沙丁胺醇［J］.分析测试学报，2004，23（S1）：244-248.

［5］尚红霞，卢业玉，黄宝华，等.固相萃取-高效液相色谱法同时测定克伦特罗和沙丁胺醇［J］.分析科学学报，2003，19（2）：145-147.

［6］ZHANG J L，XU Y X，DI X，et al.Quantitation of salbutamol in human urine by liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry［J］.J Chromatogr B，2006，831（1/2）：328-332.

［7］DOL I，KNOCHEN M.Flow-injection spectrophotometric determination of salbutamol with 4-aminoantipyrine［J］.Talanta，2004，64（5）：1233-1236.