豫南地区规模化猪场猪圆环病毒抗体水平的监测与分析

王 瑞，刘 涛，冯艳丽，曲哲会，赵 瑜，酒雅丽

（1.信阳农林学院动科系，河南 信阳 464000；2.驻马店正大动保中心，河南 驻马店 463000；3.信阳市畜产品质量检测中心，河南 信阳 464000）

自2010年以后，豫南地区养殖场使用的圆环疫苗既有国产亦有进口产品，为分析掌握猪圆环疫苗的免疫状况,我们与驻马店正大公司合作，自2011年10月-2012年12月利用武汉科前动物生物制品有限责任公司的猪圆环病毒抗体酶联免疫试验检测试剂盒,对位于河南南部的信阳与驻马店地区的规模化养殖场送检的血样进行猪圆环病毒抗体水平的检测,并按被检猪场免疫状况进行分类和比较。

1 材料与方法

1.1 试剂及设备 猪圆环抗体ELISA检测试剂盒,购自武汉科前动物生物制品有限责任公司。试剂盒内含有预包被板、酶结合物、洗涤液、样本稀释液、底物、显色剂、终止液、阴性对照品、阳性对照品。

DHG-9241A型电热恒温干燥箱：成都普龙科学仪器有限公司。

LDZX-50KBS型不锈钢全自动数显立式高压蒸汽灭菌器：上海申安医疗器械厂。

DG5031酶标仪：南京华东电子集团医疗装备有限责任公司。

Eppendorf单道可调移液器(10μL ，200μL)购自德国Eppendorf公司。

1.2 被检血清 来自信阳市浉河区、平桥区、罗山县、潢川县、息县和驻马店市驿城区、确山县、平舆县、正阳县、上蔡县、遂平县、西平县、汝南县、泌阳县、新蔡县。从2011年10月-2012年12月，其中信阳地区检测母猪73份，仔猪91份。驻马店地区母猪509份，仔猪229份，共计902份。

1.3 ELISA检测方法

1.3.1 操作步骤 用稀释好的洗涤液洗板2次（200 μL/孔）每次静置2 min后倒掉，再在干净吸水纸上拍干；取稀释好的待检样品100 μL加入到检测板中；阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100 μL；轻轻振匀孔中样品，置37℃温育30 min；甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板3次，200 μL/孔，每次静置3 min倒掉，再在干净吸水纸上拍干；每孔加羊抗猪酶标二抗100 μL，置37℃温育30 min；洗涤5次，方法同3。切记每次在干净吸水纸上拍干;每孔先加底物液A 1滴（50 μL）、再加底物液B 1滴（50 μL），混匀，室温（18℃～25℃）避光显色10 min。每孔加终止液1滴（50 μL），10 min内测定结果。

1.3.2 结果判定 在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于1.0，阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3。样品OD630值大于0.42，判为阳性；样品OD630值在0.38到0.42之间，判为可疑；样品OD630值小于0.38，判为阴性。

2 结果

见表1～4。

表1 免疫猪场阳性率

表2 未免疫猪场感染率

表3 免疫猪场抗体检测值分布

表4 未免疫猪场抗体检测值分布

3 分析与讨论

3.1 应用ELISA检测方法对河南省南部地区部分规模化猪场进行了流行病学调查，检测结果表明,在免疫过PCVⅡ疫苗的猪场：母猪阳性率为82.01%，保育仔猪阳性率为71.08%，总阳性率为78.74%。

3.2 未免疫过PCVⅡ疫苗的猪场：母猪感染率为83.65%，保育仔猪阳性率为81.90%，总感染率为82.73%。

3.3 从抗体检测值看，免疫过PCVⅡ疫苗的猪场内：后备母猪在中等抗体水平（0.42＜OD值＜1）占40%，在较高保护水平（OD值＞1）占27.5%；经产母猪在中等抗体水平者（0.42＜OD值＜1）占14.61%，在较高保护水平者（OD值＞1）占74.54%。保育仔猪在中等抗体水平者（0.42＜OD值＜1）占22.06%，在较高保护水平者（OD值＞1）占29.41%。

3.4 从抗体检测值看，未免疫过PCVⅡ疫苗的猪场内：后备母猪中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占46.15%，严重感染者（OD值＞1）占23.07%；经产母猪中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占27.47%，严重感染者（OD值＞1）占58.24%；保育仔猪中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占24.14%，严重感染者（OD值＞1）占57.76%.

从检测结果可知，当前在豫南地区规模化猪场如接种过PCVⅡ疫苗，经产母猪的抗体水平及保护率要明显高于后备母猪，这可能是市场上该疫苗品种主要是亚单位和灭活苗的原因，需要多次免疫，才能诱导产生高抗体水平。由于后备母猪的圆环病毒疫苗抗体水平较低，一胎仔猪圆环病毒感染风险较高。保育仔猪从此次调查结果看，免疫合格率较低，只有51.47%。

在未免疫圆环疫苗的猪场内，后备母猪和经产母猪的感染率均较高，尤其是经产母猪达到58.24%，说明在猪场内多胎母猪随着饲养时间延长，感染的机率也随之升高，应适时淘汰。保育仔猪的感染率高达81.9%。

总体来看，作为河南省重要的生猪养殖地区，驻马店和信阳两地规模化猪场圆环疫苗免疫场经产母猪抗体合格率较高，但在后备母猪和保育猪阶段猪群抗体合格率偏低。而不免疫圆环疫苗的猪场各阶段圆环病毒感染率较高。

现在市面上的所有PCVⅡ疫苗都能有效的降低PCVⅡ感染猪场中临床疾病的发生，提高猪群生产指数。虽然疫苗免疫接种并不能够完全防PCVⅡ的感染和传播，但是能够极大的降低毒血症、系统水平的病毒含量和病毒的外排，从而降低环境中的病毒含量。

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