HPLC法同时测定川芎药材中阿魏酸、咖啡酸的含量

张锦霞??杜晓霞??曹凤秋??李国峰??赵宁民

[摘要] 目的 建立HPLC法同时测定川芎药材中阿魏酸和咖啡酸含量的方法。 方法 采用Kromasil -ODS（250mm×4.6mm，5?m）色谱柱，流动相为甲醇-0.5%醋酸水（35：65）；流速：1.0mL/min；检测波长：323nm。 结果 阿魏酸和咖啡酸的线性范围分别为：13.62～257.4mg/mL （r=0.9996）和29.40～515.7mg/mL （r=0.9995）；平均回收率（n=6）分别为阿魏酸96.6%（RSD=0.8%）和咖啡酸95.6%（RSD=0.5%）。 结论 该法操作简单，结果准确，重现性好，为全面评价不同产地川芎药材的质量提供方法。

[关键词] HPLC；阿魏酸；咖啡酸；川芎

[中图分类号] R917 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2014）21-102-03

川芎（Rhizoma Chuanxiong）为伞形科植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根茎，其所含主要有效成分有酚酸类、内酯类、生物碱和挥发油等[1]，广泛应用于临床治疗。目前，对川芎中成分的含量测定多集中在阿魏酸、藁本内酯和川芎嗪等的测定[2-4]。本研究将川芎药材中阿魏酸和咖啡酸两组分含量同时测定，并对不同产地的药材进行含量比较，以完善川芎的质量控制。

1 试剂与方法

1.1 仪器

Agilent-1100型高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器（DAD）、四元梯度泵、在线真空脱气机和柱温箱。超声波清洗器（DS3120 DC），RE-52型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

1.2 试剂

甲醇为色谱级，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

1.3 试验用药

阿魏酸、咖啡酸对照品（自制，经HPLC检测质量分数均>99.0%）。川芎购自四川等10产地，经鉴定均为正品。

1.4 方法

1.4.1 溶液制备

1.4.1.1 对照品储备液的制备 分别取阿魏酸和咖啡酸对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度分别为0.5008mg/mL和1.000mg/mL的对照品溶液。

1.4.1.2 供试品溶液的制备 选取不同产地的川芎药材，粉碎过筛后，分别精密称定粉末约1.0g，置锥形瓶中，然后加入0.5mol/L NaOH溶液50mL，超声提取20min，共提取3次，冷却，静置，离心，取上清液，用稀HCl调pH=2，然后用乙酸乙酯等量萃取3次，合并萃取液，使用旋转蒸发仪蒸干，用甲醇复溶并稀释至25mL量瓶中，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

1.4.2 色谱条件 色谱柱：Kromasil -ODS（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.5%醋酸水（35：65）；检测波长：320nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃。

2 结果

2.1 系统适用性试验

按照上述样品处理方法和色谱条件进行测定，两峰之间的分离度大于1.5；理论塔板数大于30 000；拖尾因子在0.95～1.05之间，均满足定量要求。色谱图见图1。

（B）

1.咖啡酸；2.阿魏酸

2.2 线性关系的考察

分别精密量取阿魏酸和咖啡酸对照品溶液适量，配成混合对照品系列溶液，按照上述色谱条件，进样分析，以各自的浓度X（μg/mL）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到阿魏酸和咖啡酸回归方程分别为：Y=5.339×104X+230.8，r=0.9996；Y=4.588×104X+470.2，r=0.9995。线性范围分别为：13.62～57.40μg/mL和29.40～515.7μg/mL。

2.3 精密度试验

取阿魏酸和咖啡酸的中浓度混合对照品溶液，按照1.4.2色谱条件，连续进样6次。分别测得阿魏酸和咖啡酸的峰面积，计算两组分峰面积的RSD分别为0.3%和0.5%，精密度良好。

2.4 重复性试验

取6份同一产地川芎药材粉末，精密称定，按照1.4.1项下处理，按1.4.2色谱条件，进样分析。阿魏酸和咖啡酸含量的RSD分别为0.2%和0.2%。

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12h，按照2.1项下处理，按2.2色谱条件，进样分析。阿魏酸和咖啡酸峰面积的RSD分别为0.7%和0.3%。结果表明供试品溶液在12h内稳定。

2.6 加样回收率试验

取同一产地已知含量的川芎药材粉末6份，加入已知浓度的混合标准品溶液适量，再加入0.5mol/L NaOH溶液至50mL，按照按2.2色谱条件进样分析并计算其加样回收率。阿魏酸和咖啡酸的平均回收率分别为96.6%和95.6%，RSD分别为0.9%和0.5%。见表1。

2.7 样品测定

取不同产地的川芎药材粉末精密称定1.00g，按照2.1项下处理，按2.2色谱条件，进行分析，分别计算阿魏酸和咖啡酸的含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 提取条件的优化

本实验通过考察不同酚酸类成分的提取方法[5-8]，比较了甲醇、甲醇-水、甲醇-5%甲酸水、0.5mol/L NaOH溶液这4种不同的提取溶剂，氯仿、乙酸乙酯等2种不同的萃取溶液，对样品进行提取分析后进样分析，通过考察阿魏酸和咖啡酸的含量，从而选择了最佳的提取条件。

3.2 色谱条件的优化

本实验考察了3根不同的色谱柱，分别为Waters-C18（150mm×3.9mm，4μm）；Venusil XBP C18（L）（250mm×4.6 mm，5μm）和Kromasil -ODS （250mm×4.6mm，5μm），综合考虑选择Kromasil色谱柱。参考药典[9]选择检测波长为320nm，此波长可避免杂质干扰且可较好的检测该两组分。endprint

川芎道地药材的形成模式为道地产区独特的生态环境与先进的栽培种植技术相结合的双因素关联决定型，川芎有效成分之间、土壤营养值之间均存在一定的相关关系，不同产地药材质量差别巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作为川芎质量的评价指标。本研究采用HPLC法分析不同产地的川芎样品，结果表明各产地药材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明显差别，最大可相差2倍，与其他文献研究一致[12-13]。对不同产地的川芎进行质量评价，可以完善川芎的质控体系，具有重要意义。

[参考文献]

[1] 舒冰，周重建.中药川芎中有效成分的药理作用研究进展[J].中国药理学通报，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，张晖芬.HPLC法同时测定川芎药材中3种有效成分的含量[J].药物分析杂志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 张慧，裴志东.HPLC法测定川芎及制剂中阿魏酸的含量[J].辽宁中医学院学报，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干国平.气相色谱法测定川芎油中阿魏酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 张囡，杜丽丽.中药酚酸类的研究进展[J].中国现代中药，2006，8（2）：25-28.

[6] 许海棠，徐远金.HPLC/MS测定蒲公英颗粒中绿原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化学通报，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，刘世霆.高效液相色谱法同时测定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中国现代应用药学杂志，2006，23（3）：229-231.

[8] 刘江云，杨学东.天然酚酸类化合物的反相高效液相色谱分析[J].色谱，2002，20（3）：245-248.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2010：38.

[10] 陈林，彭成，刘友平，等.川芎道地药材形成模式的探讨[J].中国中药杂志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 银玲，彭月，陈鸿平，等.川芎有效成分与土壤营养值相关性研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（24）：121-125.

[12] 银玲，彭月，陈鸿平，等.新老产地川芎中酚酸类成分的含量比较及川芎等级划分内涵研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，张了云，等.不同产地川芎对家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流变性的品质评价研究[J].中药药理与临床，2014，30（2）：110-112.

（收稿日期：2014-08-06）endprint

川芎道地药材的形成模式为道地产区独特的生态环境与先进的栽培种植技术相结合的双因素关联决定型，川芎有效成分之间、土壤营养值之间均存在一定的相关关系，不同产地药材质量差别巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作为川芎质量的评价指标。本研究采用HPLC法分析不同产地的川芎样品，结果表明各产地药材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明显差别，最大可相差2倍，与其他文献研究一致[12-13]。对不同产地的川芎进行质量评价，可以完善川芎的质控体系，具有重要意义。

[参考文献]

[1] 舒冰，周重建.中药川芎中有效成分的药理作用研究进展[J].中国药理学通报，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，张晖芬.HPLC法同时测定川芎药材中3种有效成分的含量[J].药物分析杂志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 张慧，裴志东.HPLC法测定川芎及制剂中阿魏酸的含量[J].辽宁中医学院学报，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干国平.气相色谱法测定川芎油中阿魏酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 张囡，杜丽丽.中药酚酸类的研究进展[J].中国现代中药，2006，8（2）：25-28.

[6] 许海棠，徐远金.HPLC/MS测定蒲公英颗粒中绿原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化学通报，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，刘世霆.高效液相色谱法同时测定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中国现代应用药学杂志，2006，23（3）：229-231.

[8] 刘江云，杨学东.天然酚酸类化合物的反相高效液相色谱分析[J].色谱，2002，20（3）：245-248.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2010：38.

[10] 陈林，彭成，刘友平，等.川芎道地药材形成模式的探讨[J].中国中药杂志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 银玲，彭月，陈鸿平，等.川芎有效成分与土壤营养值相关性研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（24）：121-125.

[12] 银玲，彭月，陈鸿平，等.新老产地川芎中酚酸类成分的含量比较及川芎等级划分内涵研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，张了云，等.不同产地川芎对家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流变性的品质评价研究[J].中药药理与临床，2014，30（2）：110-112.

（收稿日期：2014-08-06）endprint

川芎道地药材的形成模式为道地产区独特的生态环境与先进的栽培种植技术相结合的双因素关联决定型，川芎有效成分之间、土壤营养值之间均存在一定的相关关系，不同产地药材质量差别巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作为川芎质量的评价指标。本研究采用HPLC法分析不同产地的川芎样品，结果表明各产地药材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明显差别，最大可相差2倍，与其他文献研究一致[12-13]。对不同产地的川芎进行质量评价，可以完善川芎的质控体系，具有重要意义。

[参考文献]

[1] 舒冰，周重建.中药川芎中有效成分的药理作用研究进展[J].中国药理学通报，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，张晖芬.HPLC法同时测定川芎药材中3种有效成分的含量[J].药物分析杂志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 张慧，裴志东.HPLC法测定川芎及制剂中阿魏酸的含量[J].辽宁中医学院学报，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干国平.气相色谱法测定川芎油中阿魏酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 张囡，杜丽丽.中药酚酸类的研究进展[J].中国现代中药，2006，8（2）：25-28.

[6] 许海棠，徐远金.HPLC/MS测定蒲公英颗粒中绿原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化学通报，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，刘世霆.高效液相色谱法同时测定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中国现代应用药学杂志，2006，23（3）：229-231.

[8] 刘江云，杨学东.天然酚酸类化合物的反相高效液相色谱分析[J].色谱，2002，20（3）：245-248.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2010：38.

[10] 陈林，彭成，刘友平，等.川芎道地药材形成模式的探讨[J].中国中药杂志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 银玲，彭月，陈鸿平，等.川芎有效成分与土壤营养值相关性研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（24）：121-125.

[12] 银玲，彭月，陈鸿平，等.新老产地川芎中酚酸类成分的含量比较及川芎等级划分内涵研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，张了云，等.不同产地川芎对家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流变性的品质评价研究[J].中药药理与临床，2014，30（2）：110-112.

（收稿日期：2014-08-06）endprint