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鼻炎胶囊质量标准研究

2014-03-03王连芝曹玲

中国当代医药 2014年2期
关键词:白芷川芎质量标准

王连芝 曹玲

[摘要] 目的 建立鼻炎胶囊的定性鉴别和含量测定的方法。 方法 用TLC法定性鉴别鼻炎胶囊中白芷、川芎;用HPLC法测定细辛中马兜铃酸A含量;Kromasil C18色谱柱;甲醇-1%冰乙酸(60∶40)流动相洗脱;检测波长250 nm。 结果 薄层鉴别荧光斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰;马兜铃酸A进样量在0.044~0.22 μg范围内峰面积线性关系良好(r=0.9999);对两批细辛药材进行检测,其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g,并对3批样品进行检测,未检出马兜铃酸A。 结论 所建立的定性、限量测定分析方法可用于鼻炎胶囊的质量控制。

[关键词] 鼻炎胶囊;质量标准;马兜铃酸A;细辛;白芷;川芎

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2014)01(b)-0008-03

鼻炎胶囊由苍耳子、白芷、川芎、菊花、细辛等九味药材组成,经提取制成的中药复方制剂,具有祛风宣肺、清热解毒等功效,用于治疗急慢性鼻炎。为了有效监测该制剂的产品质量,本实验采用TLC法对制剂中的川芎和白芷进行定性鉴别;另细辛为本方的主要成分之一,为了控制其毒副作用,本文采用HPLC法对制剂中马兜铃酸A的含量进行检查,为该制剂的质量控制提供理论依据。

1 仪器与试药

Waters2695-2998型高效液相色谱仪;马兜铃酸A对照品、川芎对照药材和白芷对照药材,均购自中国药品生物制品检定所,批号分别为110746-200305, 120918-200608和120945-200406,甲醇为色谱纯,水为重蒸水;硅胶G购自青岛海洋化工有限公司。

2 方法与结果

2.1 川芎的薄层鉴别

取本品适量,倾倒出内容物,称取约8 g,置烧瓶中,加入乙醚约50 ml,水浴加热回流提取,时间约为1 h,提取液滤过,回收滤液至干,残渣加乙醚2 ml使溶解,作为供试品溶液。另制备缺川芎阴性样品,取缺川芎阴性样品5 g,同法制成缺川芎阴性对照溶液。再取川芎对照药材1 g,同法制成川芎对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各6 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30~60℃)-二氯甲烷(1∶9)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与川芎对照药材色谱相同的位置上,显相同颜色的荧光斑点,与缺川芎阴性样品相比较,阴性无干扰(图1)。

2.2 白芷的薄层鉴别

取本品适量,倾倒出内容物,称取约5 g,置三角烧瓶中,加入乙醚30 ml,密塞,轻轻振摇,放置1 h,提取液滤过,回收滤液至干,残渣加乙酸乙酯2 ml使之溶解,作为供试品溶液。另制备缺白芷阴性样品,取缺白芷阴性样品5 g,同法制成缺白芷阴性对照溶液。再取白芷对照药材0.5 g,同法制成白芷对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30~60℃)-乙醚(3∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与白芷对照药材色谱相同的位置上,显相同颜色的荧光斑点,与缺白芷阴性样品相比较,阴性无干扰(图2)。

2.3 马兜铃酸A含量检查

2.3.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm);以甲醇-1%冰乙酸(60∶40)为流动相;流速为1.0 ml/min;检测波长250 nm;柱温30℃,理论塔板数按马兜铃酸A峰计算,不低于2000。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品适量,倾倒出内容物,精密称取5 g,置烧瓶中,加入甲醇80 ml,水浴加热回流提取,提取时间为2 h,提取液滤过,接取滤液,回收滤液至干,残渣加10%氨水20 ml溶解,用乙醚提取3次,每次20 ml,弃去乙醚层,水层滴加稀盐酸,至pH 3~4,再加入乙醚20 ml,分取乙醚层,共提取3次,合并乙醚液,回收乙醚至干,残渣加甲醇1 ml使之溶解,即为供试品溶液。

2.3.3 对照品溶液的制备 取马兜铃酸A对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 毫升中含马兜铃酸A 0.022 mg的溶液。

2.3.4 标准曲线的绘制及线性范围的考察 取上述马兜铃酸A对照品溶液,精密量取2、4、6、8、10 ml,分别置10 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为0.0044、0.0088、0.0132、0.0176、0.022 mg/ml的溶液,吸取上述系列浓度的对照品溶液10 μl,注入高效色谱仪,按上述色谱条件进行测定。以测得的色谱峰积分面积为纵坐标,以对照品的浓度含量为横坐标,绘制标准工作曲线,得线性回归方程Y=2.3183×104X+0.9281×103(r=0.9999),测得马兜铃酸A对照品线性范围为0.044~0.22 μg。

2.3.5 精密度试验 取上述马兜铃酸A对照品溶液(浓度为0.022 mg/ml),精密吸取5 μl,注入高效色谱仪,按上述色谱条件进行测定,重复测定6次,以所得色谱峰峰面积计算RSD为0.23%,表明仪器的精密度良好。

2.3.6 稳定性试验 取上述马兜铃酸A对照品溶液(浓度为0.022 mg/ml),精密吸取5 μl,分别于0、2、4、6、8、10、12 h注入高效色谱仪,进行测定,按上述色谱条件进行测定,以所得色谱峰峰面积计算RSD为1.52%,表明样品中的马兜铃酸A在12 h内测定,含量稳定。

2.3.7 最低检出限 取上述马兜铃酸A对照品溶液(浓度为0.022 mg/ml),精密吸取1 ml,置25 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密吸取20 μl,注入高效色谱仪,进行测定。从20 μl起依次递减进样量,并记录各色谱图,结果表明当进样量达2 μl时,色谱图信噪比为3∶1,确定最低检出量为2 μl,即含马兜铃酸A对照品为1.76 ng。

2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的方法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备:取细辛药材,精密称取0.2 g,置烧瓶中,加入甲醇20 ml,水浴加热回流提取,提取时间为2 h,提取液滤过,接取滤液,回收滤液至干,残渣加10%氨水10 ml溶解,用乙醚提取3次,每次10 ml,弃去乙醚层,水层滴加稀盐酸,至pH 3~4,再加入乙醚15 ml,分取乙醚层,共提取3次,合并乙醚液,回收乙醚至干,残渣加甲醇1 ml使溶解,即得。分别精密吸取马兜铃酸A对照品溶液(浓度为0.022 mg/ml) 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml,注入液相色谱仪,测定色谱图见图3~5。对两批细辛药材进行检测,其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g,并对三批样品进行检测,未检出马兜铃酸A(表1)。

3 讨论

本研究对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性鉴别,通过试验,确定了川芎、白芷的薄层鉴别方法。该方法专属性强,阴性对照无干扰,可以作为该制剂的鉴别方法。川芎鉴别实验参考药典[1]进行鉴别,实验过程中发现阴性对照有干扰。因此,参照文献[2-4]进行了反复实验,最后确定展开剂为石油醚(30~60℃)-二氯甲烷(1∶9),展开效果最好。白芷薄层鉴别参照药典[1]进行实验,展开效果好,斑点清晰。

马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物,主要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾损害的报道不断出现,“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛关注[7-8]。研究表明,马兜铃酸作用部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞,其毒性机制主要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡, 加速肾间质纤维化进程,降低肾小球滤过率,引起肾衰竭等[9-11]。为有效控制马兜铃酸的肾毒性,有学者采用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14],参照上述文献方法,本文采用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量,来控制制剂的安全性。测定结果表明,细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微,约为34.29 μg/g,含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2010:38,97.

[2] 张村,李丽,耿立冬,等.川芎药材有效成分鉴别及其含量标准研究[J].北京中医药大学学报,200,528(2):66-69.

[3] 郭丽蓉,刘宏伟,周莉玲.跌打止痛微乳喷雾剂质量标准的研究[J].时珍国医国药,2011,22(5):1045-1048.

[4] 冯树倩,李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层鉴别[J].中医药导报,2010,7(1):60-61.

[5] 胡志祥,王永红,彭崇胜,等.近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研究进展[J].中草药,2010,41(2):318-320.

[6] 黄永芬.关注马兜铃酸对人民健康的危害[J].中国药业,2002,11(8):16.

[7] 关小彬.警惕含马兜铃酸的中药引起的肾损害[J].新医学,2004,35(5):305-306.

[8] 史文慧,郭蓉,罗朝利,等.59例马兜铃酸肾病的报道[J].药物流行病学杂志,2008,17(2):101-103.

[9] 熊静悦,谭正怀.马兜铃酸的主要毒性作用及其相关机制[J].四川中医,2011,29(9):39-42.

[10] 崔晓红,张兰桐,杨秀岭.马兜铃酸毒性的研究新进展[J].中草药,2003,34(5):附7-9.

[11] 王典仁,张中文,陆彦,等.马兜铃酸肾纤维化毒性研究进展[J].中国兽药杂志,2008,42(1): 37-40.

[12] 李庆杰,刘永强,常艳茹,等.清脑止痛胶囊中马兜铃酸A限量测定[J].特产研究,2009,(4):61-64.

[13] 刘新,林於.细辛中马兜铃酸的HPLC限量测定方法探讨[J].中成药,2008,30(6):896-899.

[14] 苏健,王宝琴,马滕,等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定方法研究概述[J]. 中国中医药信息杂志,2005, 12(11):53-55.

(收稿日期:2013-11-15 本文编辑:魏玉坡)

2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的方法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备:取细辛药材,精密称取0.2 g,置烧瓶中,加入甲醇20 ml,水浴加热回流提取,提取时间为2 h,提取液滤过,接取滤液,回收滤液至干,残渣加10%氨水10 ml溶解,用乙醚提取3次,每次10 ml,弃去乙醚层,水层滴加稀盐酸,至pH 3~4,再加入乙醚15 ml,分取乙醚层,共提取3次,合并乙醚液,回收乙醚至干,残渣加甲醇1 ml使溶解,即得。分别精密吸取马兜铃酸A对照品溶液(浓度为0.022 mg/ml) 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml,注入液相色谱仪,测定色谱图见图3~5。对两批细辛药材进行检测,其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g,并对三批样品进行检测,未检出马兜铃酸A(表1)。

3 讨论

本研究对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性鉴别,通过试验,确定了川芎、白芷的薄层鉴别方法。该方法专属性强,阴性对照无干扰,可以作为该制剂的鉴别方法。川芎鉴别实验参考药典[1]进行鉴别,实验过程中发现阴性对照有干扰。因此,参照文献[2-4]进行了反复实验,最后确定展开剂为石油醚(30~60℃)-二氯甲烷(1∶9),展开效果最好。白芷薄层鉴别参照药典[1]进行实验,展开效果好,斑点清晰。

马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物,主要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾损害的报道不断出现,“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛关注[7-8]。研究表明,马兜铃酸作用部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞,其毒性机制主要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡, 加速肾间质纤维化进程,降低肾小球滤过率,引起肾衰竭等[9-11]。为有效控制马兜铃酸的肾毒性,有学者采用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14],参照上述文献方法,本文采用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量,来控制制剂的安全性。测定结果表明,细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微,约为34.29 μg/g,含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2010:38,97.

[2] 张村,李丽,耿立冬,等.川芎药材有效成分鉴别及其含量标准研究[J].北京中医药大学学报,200,528(2):66-69.

[3] 郭丽蓉,刘宏伟,周莉玲.跌打止痛微乳喷雾剂质量标准的研究[J].时珍国医国药,2011,22(5):1045-1048.

[4] 冯树倩,李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层鉴别[J].中医药导报,2010,7(1):60-61.

[5] 胡志祥,王永红,彭崇胜,等.近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研究进展[J].中草药,2010,41(2):318-320.

[6] 黄永芬.关注马兜铃酸对人民健康的危害[J].中国药业,2002,11(8):16.

[7] 关小彬.警惕含马兜铃酸的中药引起的肾损害[J].新医学,2004,35(5):305-306.

[8] 史文慧,郭蓉,罗朝利,等.59例马兜铃酸肾病的报道[J].药物流行病学杂志,2008,17(2):101-103.

[9] 熊静悦,谭正怀.马兜铃酸的主要毒性作用及其相关机制[J].四川中医,2011,29(9):39-42.

[10] 崔晓红,张兰桐,杨秀岭.马兜铃酸毒性的研究新进展[J].中草药,2003,34(5):附7-9.

[11] 王典仁,张中文,陆彦,等.马兜铃酸肾纤维化毒性研究进展[J].中国兽药杂志,2008,42(1): 37-40.

[12] 李庆杰,刘永强,常艳茹,等.清脑止痛胶囊中马兜铃酸A限量测定[J].特产研究,2009,(4):61-64.

[13] 刘新,林於.细辛中马兜铃酸的HPLC限量测定方法探讨[J].中成药,2008,30(6):896-899.

[14] 苏健,王宝琴,马滕,等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定方法研究概述[J]. 中国中医药信息杂志,2005, 12(11):53-55.

(收稿日期:2013-11-15 本文编辑:魏玉坡)

2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的方法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备:取细辛药材,精密称取0.2 g,置烧瓶中,加入甲醇20 ml,水浴加热回流提取,提取时间为2 h,提取液滤过,接取滤液,回收滤液至干,残渣加10%氨水10 ml溶解,用乙醚提取3次,每次10 ml,弃去乙醚层,水层滴加稀盐酸,至pH 3~4,再加入乙醚15 ml,分取乙醚层,共提取3次,合并乙醚液,回收乙醚至干,残渣加甲醇1 ml使溶解,即得。分别精密吸取马兜铃酸A对照品溶液(浓度为0.022 mg/ml) 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml,注入液相色谱仪,测定色谱图见图3~5。对两批细辛药材进行检测,其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g,并对三批样品进行检测,未检出马兜铃酸A(表1)。

3 讨论

本研究对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性鉴别,通过试验,确定了川芎、白芷的薄层鉴别方法。该方法专属性强,阴性对照无干扰,可以作为该制剂的鉴别方法。川芎鉴别实验参考药典[1]进行鉴别,实验过程中发现阴性对照有干扰。因此,参照文献[2-4]进行了反复实验,最后确定展开剂为石油醚(30~60℃)-二氯甲烷(1∶9),展开效果最好。白芷薄层鉴别参照药典[1]进行实验,展开效果好,斑点清晰。

马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物,主要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾损害的报道不断出现,“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛关注[7-8]。研究表明,马兜铃酸作用部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞,其毒性机制主要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡, 加速肾间质纤维化进程,降低肾小球滤过率,引起肾衰竭等[9-11]。为有效控制马兜铃酸的肾毒性,有学者采用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14],参照上述文献方法,本文采用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量,来控制制剂的安全性。测定结果表明,细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微,约为34.29 μg/g,含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2010:38,97.

[2] 张村,李丽,耿立冬,等.川芎药材有效成分鉴别及其含量标准研究[J].北京中医药大学学报,200,528(2):66-69.

[3] 郭丽蓉,刘宏伟,周莉玲.跌打止痛微乳喷雾剂质量标准的研究[J].时珍国医国药,2011,22(5):1045-1048.

[4] 冯树倩,李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层鉴别[J].中医药导报,2010,7(1):60-61.

[5] 胡志祥,王永红,彭崇胜,等.近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研究进展[J].中草药,2010,41(2):318-320.

[6] 黄永芬.关注马兜铃酸对人民健康的危害[J].中国药业,2002,11(8):16.

[7] 关小彬.警惕含马兜铃酸的中药引起的肾损害[J].新医学,2004,35(5):305-306.

[8] 史文慧,郭蓉,罗朝利,等.59例马兜铃酸肾病的报道[J].药物流行病学杂志,2008,17(2):101-103.

[9] 熊静悦,谭正怀.马兜铃酸的主要毒性作用及其相关机制[J].四川中医,2011,29(9):39-42.

[10] 崔晓红,张兰桐,杨秀岭.马兜铃酸毒性的研究新进展[J].中草药,2003,34(5):附7-9.

[11] 王典仁,张中文,陆彦,等.马兜铃酸肾纤维化毒性研究进展[J].中国兽药杂志,2008,42(1): 37-40.

[12] 李庆杰,刘永强,常艳茹,等.清脑止痛胶囊中马兜铃酸A限量测定[J].特产研究,2009,(4):61-64.

[13] 刘新,林於.细辛中马兜铃酸的HPLC限量测定方法探讨[J].中成药,2008,30(6):896-899.

[14] 苏健,王宝琴,马滕,等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定方法研究概述[J]. 中国中医药信息杂志,2005, 12(11):53-55.

(收稿日期:2013-11-15 本文编辑:魏玉坡)

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