非小细胞肺癌组织表达FOXM1与患者临床特征及术后辅助化疗疗效的关系研究

江峰　吕赛平　黄秀珍　彭晓　匡裕康　吴九发　王东升　黄建

【摘要】 目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织表达叉头框转录因子M1（FOXM1）与患者临床特征及术后辅助化疗疗效的关系。方法：选取2012年5月-2013年7月本院收治的115例NSCLC患者作为研究对象，所有患者均接受肺癌完全性切除术治疗。在手术过程中取肿瘤组织，并采用免疫组化法进行FOXM1表达检测。结果：FOXM1表达阳性组与FOXM1表达阴性组之间性别、年龄、病理类型、淋巴结转移、肿瘤细胞分化程度比较差异均无统计学意义（P>0.05）；FOXM1表达阳性组的临床分期显著高于FOXM1表达阴性组（P<0.05）。FOXM1表达阳性组的1年生存率显著低于阴性组（P<0.05）。结论：NSCLC组织表达FOXM1与临床分期有一定的关系，且与预后呈负相关。

【关键词】 非小细胞肺癌； 叉头框转录因子M1； 肺癌完全性切除术； 临床分期

术后辅助化疗是提高NSCLC患者远期疗效的主要手段之一，而肿瘤细胞对化疗药物的耐药性常给术后辅助化疗疗效带来一定的负性影响。目前研究认为，多种基因参与了肿瘤细胞的耐药机制。为提高NSCLC患者的生存率，节约医疗及社会成本，在化疗之前进行某些耐药基因检测是必要的，而探索相关基因亦成为NSCLC治疗的重要研究方向之一[1-2]。本研究即旨在探讨NSCLC组织表达FOXM1与患者临床特征及辅助化疗预后的关系，以期为临床治疗NSCLC提供新的思路，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年5月-2013年7月本院收治的115例NSCLC患者作为研究对象，其中男81例，女34例；年龄47～71岁，中位年龄62岁；病理类型鳞癌50例、腺癌43例、其他22例；淋巴结转移61例、无转移54例；肿瘤细胞分化程度低分化61例、中分化37例、高分化17例；临床分期Ⅰ期11例，Ⅱa期32例，Ⅱb期33例，Ⅲa期39例。将患者按FOXM1表达检测结果分为FOXM1表达阳性组和FOXM1表达阴性组。

1.2 纳入标准 （1）接受完全性切除术治疗（2005年国际肺癌研究会分期委员会的肺癌完全性切除定义）；（2）术前经相关检查排除远处转移；（3）术后病理证实为Ⅰb～Ⅲa期NSCLC；（4）术后2个月内开始接受辅助化疗；（5）术后化疗周期数≥3个。

1.3 排除标准 （1）术前曾行新辅助化疗或放疗；（2）行肺段切除术或楔形切除等达不到完全切除标准；（3）不能耐受辅助化疗的患者；（4）辅助化疗开始时间与手术时间之差>2个月的患者。

1.4 研究方法

1.4.1 FOXM1表达检测 石蜡切片脱蜡至水→抗原修复→磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤2～3次，5 min/次→3%过氧化氢溶液对内源性过氧化物酶进行封闭，室温静置10 min→PBS洗涤2～3次，5 min/次→正常血清封闭，室温静置20 min，甩去多余液体→PBS洗涤2～3次，5 min/次→滴加一抗50 μL，4 ℃过夜→

37 ℃复温45 min→PBS洗涤3次，2 min/次→滴加增强子→PBS洗涤3次，2 min/次→滴加酶标二抗

50 μL，37 ℃静置1 h→PBS洗涤3次，5 min/次→二氨基联苯胺（DAB）显色5～10 min→自来水冲洗10 min→苏木素复染2 min→梯度酒精脱水→自来水冲洗10～15 min→二甲苯透明→封片。

1.4.2 术后辅助化疗及随访 在手术后2个月内给予研究对象辅助化疗，化疗周期数≥3个，化疗结束后对所有研究对象进行随访，直至本研究结束。

1.5 FOXM1表达检测结果判断标准 每例标本选5个高倍视野，根据细胞质染色程度、阳性染色细胞百分比进行评分。细胞质染色程度评分：不着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕褐色为3分。阳性染色细胞百分比评分：阳性细胞<1%为0分，1%～10%为1分，11%～50%为2分，>50%为3分。染色程度评分与阳性染色细胞百分比评分的乘积≥4分为FOXM1阳性表达，0～3分为FOXM1阴性表达。

1.6 统计学处理 采用SPSS 15.0统计学软件对数据进行处理，组间性别、年龄、病理类型、淋巴结转移比较采用R×C表 字2检验，组间肿瘤细胞分化程度、临床分期比较采用秩和检验，组间1年生存率比较采用Log rank检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC组织表达FOXM1与患者临床特征的关系分析 FOXM1表达阳性组与FOXM1表达阴性组之间性别、年龄、病理类型、淋巴结转移、肿瘤细胞分化程度比较差异均无统计学意义（P>0.05）；FOXM1表达阳性组的临床分期显著高于FOXM1表达阴性组（P<0.05），见表1。

2.2 NSCLC组织表达FOXM1与术后辅助化疗疗效的关系分析 经12个月随访，FOXM1表达阳性组1年生存率为83.33%（35/42），低于FOXM1表达阴性组的97.26%（71/73），差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，世界卫生组织2002年对世界人口调查发现肺癌男性发病率为42.4/10万，死亡率为33.21/10万，女性肺癌发病率为19.0/10万，死亡率为13.45/10万。目前临床上常将肺癌分为NSCLC、小细胞肺癌（SCLC）两大类，其中以前者最为常见。与其他绝大多数恶性肿瘤一样，手术仍然是NSCLC最重要、最有效的治疗手段，但由于早期NSCLC无典型的临床症状，初诊时约2/3的NSCLC患者已属于局部晚期或发生远处转移而丧失了根治性手术治疗的机会[3]；尽管剩余1/3的NSCLC患者在初诊时可以行根治性手术切除，但即使是完全切除的Ⅰ期患者，术后2年的复发率或转移率高达40%左右[4]。因此NSCLC患者术后往往需要辅助化疗，以提高其远期疗效。值得注意的是，目前临床上主要依据临床经验或指南选定术后辅助化疗方案，并未参考肿瘤生物学特征、患者对化疗药物敏感性而选择适合个体的抗癌药物，从而使术后化疗疗效受到一定的影响[5-6]。因此在NSCLC患者接受术后化疗之前，有必要对他们进行某些基因的检测，从而使NSCLC化疗患者获得最佳的疗效。

FOXM1是叉头框转录因子家族中一种亚型，其表达与转录激活需要多因子、多细胞信号通路的共同参与，并依赖于细胞周期进程。FOXM1表达水平与正常细胞增殖、衰老及器官的形成过程密切相关，而FOXM1异常表达则通过影响基因组的稳定性以及有丝分裂过程等促进肿瘤的发生、发展、转移，且FOXM1在肿瘤干细胞的存在、维持干细胞多能性方面发挥重要作用，因此FOXM1表达水平将成为肿瘤诊断、评估、预后等提供一个重要指标[7-8]。基于上述原因，FOXM1与恶性肿瘤的关系成为近年来的研究热点之一。Chan等[9]报道FOXM1过度表达与宫颈癌的发生、发展密切相关。Ahmad等[10]报道下调FOXM1表达可以抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭。Li等[11]报道FOXM1在胃癌血管生成、进展过程中发挥着关键的作用。Wang等[12]报道下调FOXM1表达可以抑制前列腺癌细胞的生长，并诱导癌细胞凋亡。

在本研究中，笔者主要探讨NSCLC组织表达FOXM1与患者临床特征及术后辅助化疗疗效的关系，结果显示FOXM1表达阳性组与FOXM1表达阴性组之间性别、年龄、病理类型、淋巴结转移、肿瘤细胞分化程度相比差异无统计学意义（P>0.05），FOXM1表达阳性组的临床分期显著高于FOXM1表达阴性组（P<0.05）；FOXM1表达阳性组的1年生存率显著低于对照组（P<0.05）。目前国内外有关FOXM1与NSCLC的研究较少，现有的研究均认为NSCLC组织表达FOXM1与其预后成负相关。Liu等[13]报道FOXM1表达状况是影响NSCLC预后的独立危险因素。Xu等[14]报道FOXM1表达在NSCLC细胞体外实验对吉非替尼耐药过程中发挥着重要作用。Xu等[15]报道FOXM1表达通过促进肿瘤转移从而使NSCLC患者获得更差的预后。在此需要强调的是，有关FOXM1表达影响NSCLC预后的确切机制有待进一步研究。

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（收稿日期：2014-05-14） （本文编辑：蔡元元）

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（收稿日期：2014-05-14） （本文编辑：蔡元元）