顶空气相色谱法测定盐酸倍他洛尔中6种有机溶剂残留量

黄宇玫，罗文艳（.南昌大学科学技术学院，南昌 33009；.南昌大学第四附属医院药剂科，南昌 330003）

盐酸倍他洛尔属于心脏选择性β1－受体阻滞剂，无内在拟交感活性及膜稳定作用，临床主要用于中度高血压、心绞痛［1－2］，另外还可用于治疗眼内压增高和开角型青光眼［3－5］。盐酸倍他洛尔在合成与制备工艺中使用了第二类溶剂乙腈、甲苯和二甲基甲酰胺，第三类溶剂丙酮、乙酸乙酯、异丙醇等，在成品中可能会有一定量的残留，为了控制有机溶剂，提高药品的安全性和可靠性，本文建立了气相色谱法测定盐酸倍他洛尔中6种残留溶剂。该方法简便灵敏，准确可靠。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 6890N型气相色谱仪。氢火焰离子化检测器（FID，南京科捷分析仪器有限公司）；Sartorius BP211D精密电子天平（Sartorius Corporation）。

1.2 试药 盐酸倍他洛尔原料（山东海山药业有限公司）；丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、乙腈、甲苯和二甲基甲酰胺均为色谱纯（上海德正化工有限公司）；其余为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［6］色谱柱：DB－WAX石英毛细管柱（30m×0.53mm×1.0μm）；柱温：50℃保持5min，以15℃·min－1的升温速率升至200℃，保持6min；进样口温度：250℃，检测器温度：280℃；FID检测器；载气为N2；恒流流速：1.0mL·min－1；H2：30mL·min－1；Air：400mL·min－1；分流比10∶1，进样体积1.0μL。

2.2 溶液的配制 精密称取丙酮50mg、乙酸乙酯50mg、异丙醇50mg、乙腈4.1mg、甲苯8.9mg、N，N－二甲基甲酰胺8.8mg，置于50mL量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，作为对照品储备溶液；精密量取对照品储备液5mL，置于100mL量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品约0.1g，精密称定，置于10mL量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适用性实验 取对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样，测定理论板数及分离度。结果丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺色谱峰的理论板数均大于5 000，峰之间的分离度均大于3.0，空白溶剂二甲基亚砜对测定无干扰，如图1所示。

图1 气相色谱图A.对照品；B.样品1.丙酮；2.乙酸乙酯；3.异丙醇；4.乙腈；5.甲苯；6.N，N－二甲基甲酰胺Fig.1 GC chromatogramsA.reference substance solution；B.sample solution；1.acetone；2.ethyl acetate；3.iso－propanol；4.acetonitrile；5.toluene；6.N，N－dimethylformamide

2.3.2 线性关系及检测限 精密量取对照品储备液0.5，1.0，2.5，5，10和25mL，分别置于50mL量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度。按2.1项下色谱条件测定，以各自测得的峰面积Y为纵坐标、相应质量浓度X为横坐标进行线性回归，取对照品溶液，采用逐步稀释法，按上述色谱条件测定，检测限以S／N＝3计算。结果如表1所示。

表1 线性关系与检测限Tab.1 Linear ranges and limits of detection （n＝6）

2.3.3 精密度实验 取对照品溶液，重复进样6次，计算相对标准偏差（RSD）。结果丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺的RSD在0.21%～0.76%之间。

2.3.4 稳定性实验 取对照品溶液，经0，3，6，12和24h分别进样，按外标法以峰面积计算，6种残留有机溶剂的RSD在0.23%～1.14%之间。结果表明，24h内上述6种残留溶剂稳定性良好。

2.3.5 加样回收率实验 取盐酸倍他洛尔原料9份，每份约0.1g，精密称定，置于10mL量瓶中，分为3组，各3份。每组分别精密加入对照品溶液4，5和6mL，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，进行回收率测定。结果丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺的平均回收率（n＝9）分别为100.5%，99.8%，98.2%，99.1%，99.2%和99.13%；RSD分别为0.43%，0.52%，0.78%，0.64%，1.28%和1.03%。

2.4 样品测定 取对照品溶液及供试品溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图，以外标法按峰面积计算，结果：盐酸倍他洛尔原料中检出乙醚和乙酸乙酯，含量分别为0.08%和0.02%，其余有机溶剂均未检出。

3 讨论

3.1 色谱柱选择 本品控制的丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺6种残留溶剂均为极性溶剂，按照相似相溶的原理，考察了DB－624、DB－WAX、DB－1、DB－1701不同极性毛细管柱，结果DB－WAX毛细管柱对这6种有机溶剂峰形和分离效果最佳。

3.2 柱温选择 通过对升温程序的比较发现，本实验采用程序升温时，对丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺6种有机溶剂分离度与峰形均较好。

3.3 残留溶剂限度 丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺均为盐酸倍他洛尔在合成和制备过程中引入的有机溶剂。根据“药品注册的国际技术要求（ICH）［7］”和《中国药典》（2010年版二部）［8］关于药品中有机溶剂残留量指导原则的规定，其中丙酮、乙酸乙酯、异丙醇为第二类应该限制使用的溶剂，乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺为第三类药品GMP或其他质量要求限制使用的溶剂，应按药品生产质量管理规范（GMP）或其他质量要求加以限制使用，即指导原则规定，乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺限度分别为0.041%，0.089%和0.088%，其余均为0.5%。本次研究的样品中，检出了部分残留溶剂，但所测结果均在药典规定的范围内。

本实验方法简便、快捷，结果准确，灵敏度高，适用于盐酸倍他洛尔中6种有机溶剂残留量的检测。

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［5］吴彤，张红，刘丽娟.倍他洛尔对缺氧视网膜神经节细胞钙通道的作用［J］.中国老年学杂志，2006，26（3）：353－356.

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［7］周海钧.药品注册的国际技术要求：质量部分［M］.北京：人民卫生出版社，2001：343.

［8］国家药典委员会.中国药典2010年版［S］.二部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录63.