晚期非小细胞肺癌患者应用顺铂化疗后MRP和LRP基因的表达

温志军

（山东东营胜利油田中心医院 胸外科，山东 东营 257034）

晚期非小细胞肺癌患者应用顺铂化疗后MRP和LRP基因的表达

温志军

（山东东营胜利油田中心医院 胸外科，山东 东营 257034）

目的探讨多药耐药相关蛋白MRP（multidrug resistance associated protein，MRP）和肺耐药相关蛋白（lung resistance protein，LRP）在非小细胞肺癌中的基因表达及与顺铂耐药的关系。方法搜集化疗前后均有标本的非小细胞肺癌患者13例，应用RT-PCR法检测化疗前后MRP和LRP基因表达，Logistic回归分析法分析2种蛋白基因表达的相关性。结果 与顺铂化疗前相比，化疗后患者MRP基因和LRP基因表达均显著增高（P＜0.05）；Logistic回归分析显示，2种蛋白的基因表达不具有相关性（r=0.036，P＜0.05）。结论应用顺铂化疗后MRP和LRP基因表达增高，且2种蛋白的基因表达不具有相关性。

非小细胞肺癌；顺铂；多药耐药相关蛋白；肺耐药相关蛋白

作为恶性肿瘤之一的非小细胞肺癌目前在世界上的发病率和死亡率居高不下[1]，由于疾病初期的隐匿性，发现时常已为晚期，手术切除率低，以顺铂为主的标准化疗方案成为治疗的重要手段[2-3]。但是，铂类药物容易引起耐药，导致化疗失败，成为临床应用的重要障碍。造成铂类药物耐药的原因很多，目前认为同多药耐药机制有关[4-5]。本实验主要回顾了13例晚期非小细胞肺癌患者标本MRP和LRP基因表达以及以顺铂为基础的化疗方案的疗效，并用Logistic回归分析法分析了2种蛋白基因表达的相关性，结果如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集胸外科2013年1月～2014年1月收治的非小细胞肺癌患者13例，其中男性8例，女性5例，平均年龄（59±4.63）岁，患者经均经支气管镜下活检确诊，接受2周期以上常规化疗方案。本研究通过伦理委员会批准。

1.2 主要实验试剂与仪器 TrizolTM试剂盒购于北京鼎国生物技术有限公司，荧光定量PCR仪（ABI公司，型号：9700），微量分析仪（Quwell公司，型号：Q-5000）。

1.3 RT-PCR法检测MRP和LRP基因表达 搜集化疗前后均有标本的非小细胞肺癌患者标本，按照试剂盒说明书采用Trizol一步法提取总RNA，逆转录成cDNA。引物序列见表1：25 μL反应体系，预变性 94℃ 1 min，退火 60℃ 1 min，延伸72℃2 min，循环35次。余按试剂盒说明进行操作，用反应产物的吸光度与内参的比值表示该基因表达强度。

表1 RT-PCR引物序列Tab.1 RT-PCR primer sequences

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件，正态计量资料用“±s”表示，组间比较采用单因素方差分析。计算药物泵MRP和LRP相关系数r，进行相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RT-PCR法检测MRP和LRP基因表达 与顺铂化疗前相比，化疗后患者MRP表达显著增高（P＜0.05），与化疗前相比化疗后患者LRP表达比增高（P＜0.05，见图1）。

图1 化疗前后MRP和LRP基因表达变化*P＜0.05，与化疗前相比Fig.1 The expression of MRP and LRP mRNA*P＜0.05，compared with the prior to chemotherapy

2.2 MRP与LRP基因表达相关性的研究 Logistic回归分析显示，2种蛋白的基因表达不具有相关性（r=0.036，P＜0.05）。

3 结论

目前对肿瘤多药耐药(multi-drug resistance，MDR)的研究中[6-7]，最为广泛的是一类耐药相关蛋白，这些蛋白的过度表达可降低细胞内药物浓度，导致应用铂类药物化疗失败。MRP与LRP属于新型耐药相关基因[8-10]，在细胞内和细胞外改变药物浓度分布比例介导耐药。MRP最早于1992年由科学家Cole发现[11]，此后该蛋白同肺癌耐药的相关性成为热点研究对象。有国外文献报道，该蛋白表达情况同肺癌预后情况关系密切，与生物学恶性表型有关，可以作为预后指标。LRP缺乏MRP特有的ABC转运蛋白的ATP结合位点[12]，引起耐药机制没有统一结论，其中一种假说是LRP具有调节核质同囊泡的药物转运功能[13-14]，大量药物存储于囊泡中，药物核/质比值减少引起耐药。本文主要搜集化疗前后均有标本的非小细胞肺癌患者13例应用RT-PCR法检测化疗前后MRP和LRP基因表达，并用

Logistic回归分析法分析2种蛋白基因表达相关性。结果显示：与顺铂化疗前相比，化疗后患者MRP表达比增高（P＜0.05），与顺铂化疗前相比化疗后患者LRP表达比增高（P＜0.05）；Logistic回归分析显示，2种蛋白的基因表达不具有相关性（r=0.036，P＜0.05）。虽然应用顺铂化疗后，MRP和LRP基因表达增高，但是2种蛋白的基因表达却不具有相关性，说明作为原发耐药的指标，有可能作为靶点优化临床化疗方案，改善疗效。虽然有报道称MRP与LRP具相关性，与二者同位于16号染色体短臂有关[15]，本文结论与之不同，可能同样本数较少有关，MRP和LRP基因表达同顺铂耐药关系的具体机制还需进一步研究。

[1] 罗扬，冯奉仪，要洁，等.1231例非小细胞肺癌术后生存和预后分析[J].中国肿瘤临床，2005，32（2）：982-941.

[2] 于清清，王明玉.洛铂或顺铂联合依托泊苷治疗初治小细胞肺癌临床疗效的观察[J].肿瘤药学，2013，3（2）：107-110.

[3] 林晓雯，张艳华.铂类抗肿瘤药的进展与临床评价[J].中国医院用药评价与分析,2011，11(1)：4-6.

[4] Plaat BE,Molenaar WM,Sagrudny J,et al.The 16 p 11 breakpoint in myxoid liposar comas might affect the expression of the LRP gene on 16 p 11.2 encoding the multidrug resistance associated major vault protein[J].EurJ Clin Invest,2000,30(5):447-453.

[5] Scheffer GL,Wijingaard PL,Lzquierdo MA,et al.The drug resistance related protein LRP is the human major vault protein[J].Nat Med,1995,1(6):578-582.

[6] 揭惠，酉明巧，刘辉，等.肿瘤多药耐药的发生机制及逆转策略[J].中西医结合学报，2013，31（7）：1686-1690.

[7] Bentres AM.NF－Kappa B transcription factor induces drug resistance through MDR 1 expression in cancer cells[J].Oncogene,2013,22(1):90-97．

[8] Cangir AK,Kutlay H,Akal M,et al.Prognostic value of tumor size in nonsmall cell lung cancer larger than five centimeters indiameter[J].Lung Cancer,2004,46(3):325-331.

[9] Denaro N,Nigro CL,Russi EG.The role of chemotherapy and latest emerging target therapies in anaplastic thyroid cancer[J].Onco Targets Ther.2013,9(1):1231-1241.

[10] Loe DW,Deeley RG,Cole SPC.Biology of the multidrug resistanc eassociated protein,MRP[J].Eur J Cancer,2006(32):945-957.

[11] OcBren ML,Tew KD.Glutathione and related enzymes in multidrug resistance[J].Eur J Cancer,2012(32):967-978.

[12] Lzquierdo MA,Scheffer GL,Flens MJ,et al.Major vault protein LRP related multidrug resistance[J].Eur J Cancer,2012,8(9):979-984.

[13] Rybarova S,HodorovaI,Hajdukova M,et al.Expression of MDR proteins in breast cancer and itscor relation with some clinical and pathological parameters[J].Neoplasma,2006,53(2):128-135.

[14] Paredes LA,Blanco GC,Elizondo EM,et al.Expression of Proteins Associated With Multidrug Resistanceand Resistance to Chemotherapy in Lung Cancer[J].Arch Bronc oneumol,2012,43(9):479-484.

[15] Slovak ML,Hop J,Cole PC,et al.The LRP gene encoding a major vault protein associated with drug resistance maps proximal to MRP on chromosome 16:evidance that chromosome breakage plays a key role in MRP or LRP gene amplification[J].Cancer Res,2011,55(1):4214-4219.

Clinical study of MRP and LRP mRNA expression in peple with human non-small cell lung cancer after cisplatin chemotherapy

WEN Zhi-jun
（Department of Cardiothoracic Surgery, Shengli Oilfield Central Hospital, Dongying 257034, China）

ObjectiveTo investigate the mRNA expression of the multidrug resistance associated protein and lung resistance protein in human non-small cell lung cancer tissues and their relationship with cis-platinum.Methods13 samples were collected from patients with non small cell lung cancer before and after chemotherapy, the mRNA expression of MRP and LRP were detected using RT-PCR method, correlation between two genes were studied by Logistic regression analysis.ResultsCompared with before cisplatin chemotherapy, MRP and LRP expression of patients were increased after chemotherapy(P＜0.05).Logistic regression analysis showed that there is no correlation between the two genes(r=0.036，P＜0.05).ConclusionCisplatin chemotherapy can increase the mRNA expression of MRP and LRP, and there is no correlation between the two genes.

non small-cell lung cancer;cis-platinum complexes;multidrug resistance associated protein;lung resistance protein

R 734.2

A

1005-1678(2014)02-0118-02

山东省高校科技计划（J 11 LF 75）

温志军，男，硕士，主治医师，研究方向：胸外科肿瘤，E-mail：3262407372@163.com。