支原体肺炎患儿D-二聚体、免疫功能变化及其意义

郝丽，郑成中

（1.安徽医科大学解放军306医院临床学院 儿科，北京 100101；2.解放军306医院 儿科，北京 100101）

支原体肺炎患儿D-二聚体、免疫功能变化及其意义

郝丽1，郑成中2Δ

（1.安徽医科大学解放军306医院临床学院 儿科，北京 100101；2.解放军306医院 儿科，北京 100101）

目的探讨肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumonia，MPP）患儿T淋巴细胞亚群、D-二聚体和免疫球蛋白的变化及其临床意义。方法应用流式细胞仪检测技术测定肺炎支原体肺炎患儿（MPP组，n＝50）和健康儿童（正常对照组，n＝50）CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋的水平；免疫比浊法检测2组中D-二聚体水平；免疫透射比浊法检测2组的血清免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）水平。结果T淋巴细胞亚群检测结果：与正常对照组比较，MPP组外周血CD3＋和CD4＋细胞降低差异显著（P＜0.001）、CD8＋细胞升高无显著差异、CD4＋／CD8＋比值降低无显著差异。D-二聚体水平检测结果：与正常对照组比较，MPP组D-二聚体水平升高差异显著（P＜0.001）。免疫球蛋白检测结果：MPP组血清IgA、IgM较正常对照组相比，差异显著（P＜0.05），MPP组血清IgG与正常对照组比较差异无统计学意义。结论肺炎支原体肺炎患儿体内免疫功能紊乱，受到不同程度抑制，凝血功能异常，故支原体肺炎患儿除了常规抗肺炎支原体治疗外，需根据不同的临床症状和疾病发展情况，监测D-二聚体水平的表达，并加强对免疫系统的调节和治疗。

支原体肺炎；T淋巴细胞亚群；D2聚体；免疫球蛋白

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象 收集解放军306医院2013年9月～2014年1月住院的MPP患儿50例，年龄为6个月～14岁，平均年龄（7.25±3.43）岁，其中男30例，女20例，所有患儿均符合诸福棠《实用儿科学》肺炎的诊断标准［7］：①发热，多表现为弛张热或不规则热，可伴咳嗽、气促等症状；②肺部听诊可闻及双肺呼吸音粗，或可闻及干、湿啰音，或胸部X线片显示肺部有实变体征；③胸片可表现为大叶性肺炎、小叶性肺炎、肺间质X线征或肺门X线征；④通过被动凝集法检测血清MP-IgM滴度≥1∶80。收集的病例均为急性期，即病程1周以内，有呼吸系统症状或体征，无其他混合感染，并排除其他细菌、病毒、衣原体感染。所有患儿近期均无使用过免疫抑制剂及免疫调节剂治疗。同期收集解放军306医院门诊健康查体的50例健康儿童作为正常对照组，年龄为6个月～13岁，平均年龄（6.59±3.12）岁，其中男28例，女22例，既往无免疫系统疾病史和慢性感染性疾病史，近3个月内无感染、发热及咳嗽等病史。2组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义，有可比性。

1.1.2 主要试剂 SmultestMK-Lymphocyte试剂盒（340503，50 T），均购自美国 BD公司；D-二聚体试剂盒（D-Dimer HS-0020007700），购自挪威AXIS-SHIELD PoCAS公司；IgA、IgM、IgG单试剂免疫透射比浊测定试剂盒（YZB／GER 1783-2012），购自上海明华体外诊断试剂有限公司；质控血清，购自卫生部临检中心；流式细胞仪（Flow cytometer，FACSCalibur），购自美国 BD公司；半自动生化分析仪（HITACHI），购自日本。

1.2 方法

1.2.1 T淋巴细胞亚群检测 分别抽取正常对照组及MPP组清晨空腹外周静脉血1mL，于EDTA抗凝管中－30℃保存。T淋巴细胞亚群检测：取两个专用试管分别标A、B，取待检测样本100μL的全血分别加入 A管、B管，加入对应的 A剂、B剂20μL，混匀，室温避光20min。再于A管、B管分别加入事先配置好的配置溶血素1000μL，混匀，室温避光10 min。在室温下离心1 500 rmp／min，5min，弃上清，在试管底留下约50μL残留液。再在每管中加入洗涤液2 mL，混匀后，离心1 500 rmp／min，5min，弃上清，在试管底留下约50μL残留液。在每管中加入鞘液400μL，混匀后，上机。

1.2.2 D-二聚体检测 分别抽取正常对照组及MPP组清晨空腹外周静脉血3mL，置于加入比例为9∶1（血：抗凝剂）的129mmol／L柠檬酸钠的抗凝管中，2000 r／min离心分离血浆置于－30℃冰箱保存待检。D-二聚体检测采用Latex乳胶凝集法（严格按照说明书进行操作）。

1.2.3 免疫球蛋白IgA、IgM、IgG测定 分别抽取正常对照组及MPP组清晨空腹外周静脉血2 mL，于EDTA抗凝管中，2 000 r／min离心置于－30℃冰箱保存待检。采用免疫透射比浊法进行检测（按照说明书的操作步骤严格进行）。

1.3 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行统计分析；计量资料采用“x±s”描述；两组间比较采用完全随机设计的t检验；检验水准P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 T淋巴细胞亚群检测情况 MPP组CD＋3细胞百分率（59.88±5.21）较正常对照组CD＋3细胞百分率（69.58±4.61）低，2组间比较差异有统计学意义（P＜0.001）；MPP组CD＋4细胞百分率（36.37±3.86）较正常对照组CD＋4细胞百分率（39.64±4.49）低，2组间比较差异有统计学意义（P＜0.001）；MPP组CD＋8细胞百分率（24.64±3.55）与正常对照组CD＋8细胞百分率（23.59±3.46）比较，差异无统计学意义；MPP组CD＋4／CD＋8比值（1.57±0.28）与正常对照组CD＋4CD＋8比值（1.64±0.33）比较，无统计学差异。结果见表1。

表1 MPP组与正常对照组外周血T淋巴细胞亚群的比较Tab.1 MPP group and normal control group comparison of peripheral blood in T lymphocyte subsets

2.2 D-二聚体检测情况 MPP组D-二聚体表达水平（0.70±0.05）与正常对照组D-二聚体表达水平（0.39±0.05）比较，差异有统计学意义（P＜0.001）。

2.3 血清免疫球蛋白检测情况 MPP组与正常对照组比较，血清免疫球蛋白IgA增高，差异有统计学意义（P＜0.001）；MPP组与正常对照组比较，血清免疫球蛋白IgM增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；MPP组血清免疫球蛋白IgG与正常对照组比较，差异无统计学意义（见表2）。

表2 MPP组免疫球蛋白水平与正常对照组的比较（g／L）Tab.2 MPP group and normal control group comparison of peripheral blood in IgA、IgM、IgG（g／L）

3 讨论

肺炎支原体（MP）是人类支原体肺炎的病原体，易引起儿童及青少年社区获得性肺炎，由MP引起的肺炎支原体肺炎（MPP）曾称原发性非典型性肺炎，是常见的呼吸道疾病［8-10］。MP感染机体后不仅可以通过释放有毒的代谢产物损伤宿主，还可以通过刺激免疫细胞B细胞产生自身抗体或引起宿主细胞抗原结构改变，从而导致病理免疫反应［11-14］。有学者表明，引起MPP的发病主要有MP的直接侵入、呼吸道上皮细胞的吸附作用和免疫系统功能紊乱等，但目前倾向于免疫紊乱学说［15］。

本研究MPP组与正常对照组比较，CD3＋细胞百分率明显下降，结果显示患儿感染MP早期抑制了机体T淋巴细胞的活化功能，从而导致机体免疫功能降低。有研究表明，CD3＋细胞是鉴定T细胞的重要标记，反映了全部T淋巴细胞的活化比例［16-18］。CD4＋细胞分布于T细胞的辅助细胞诱导亚群和抑制细胞诱导亚群表面，主要是辅助性T细胞。CD4＋细胞不仅可以介导细胞免疫应答和迟发性超敏反应，还可介导体液免疫应答，辅助B细胞产生免疫球蛋白抗体。本研究MPP组患儿CD4＋细胞较正常对照组明显下降，结果显示免疫应答反应紊乱。CD8＋细胞是细胞毒性T细胞，具有杀伤靶细胞的功能，可以对产生特殊抗原反映的目标细胞进行杀灭，CD8＋细胞发生变化可导致机体免疫系统的免疫反应发生多种异常。CD4＋、CD8＋是区分成熟T细胞亚群的主要表面标志。本研究MPP组患儿CD8＋细胞百分比升高，结果显示MPP患儿受到MP感染后机体正常免疫应答反应受到抑制。CD4＋／CD8＋是1对相互制约的细胞，机体中各种免疫细胞之间相互协作、相互制约，既可以清除机体异物抗原，还可以保护机体组织不受损伤。当机体受到感染后，免疫细胞产生免疫应答，维持机体正常的免疫功能状态。正常情况下，T淋巴细胞及其亚群数目在周围组织中相对稳定［19］，CD4＋／CD8＋的比值是反映机体免疫状况的主要指标，用以监测机体的细胞免疫功能，其值改变说明机体免疫功能发生了紊乱。本研究MPP组患儿CD4＋／CD8＋的比值下降，结果显示患儿机体免疫系统受到损害。通过对T淋巴细胞亚群的检测，结果显示患儿被MP感染后，CD4＋和CD8＋之间相互作用、相互抑制、相互调节的动态平衡状态被打乱，维持机体的正常免疫功能下降，从而引起机体组织损伤。

本研究显示MPP组患儿D-二聚体水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义，预示MPP患儿可能有急性肺栓塞的危险。机体血液中存在着凝血和抗凝血两系统（即纤维蛋白溶解系统）［20］：在正常的生理状态下，血液中凝血因子通过有限的不断的被激活，从而产生凝血酶，进而形成微量的沉着于心血管内膜上的纤维蛋白，然而不断被激活的纤维蛋白溶解系统又将形成的纤维蛋白溶解，且单核巨噬细胞不断的吞噬被激活的凝血因子。上述凝血系统和纤维蛋白溶解系统两系统的动态平衡，既保证了机体血液存在的潜在可凝固性，又保证了机体血液不断的流动状态，若在某些诱发凝血过程的因素作用下，上述的动态平衡被打破，触发了凝血过程，便可形成血栓。血栓形成后激活纤溶系统，产生D-二聚体等。即血浆D-二聚体是交联纤维蛋白特异性降解产物之一，是继发性纤溶的增强的特有代谢物，在高凝状态和血栓形成的时明显升高，能够特异性地反应体内纤维蛋白降解的频繁程度。其含量的升高反映血液系统纤溶活性的增强，被公认是纤维蛋白产生和纤溶发生的重要标志物。由于D-二聚体作为纤维蛋白的一种稳定而特异的降解产物，通过对D-二聚体测定用于多种血栓性疾病的辅助诊断。因此，对MPP患儿进行血浆D-二聚体测定，有利于早期发现MPP患儿血液的凝集状态，预防血栓形成及血管病变的发生，对临床实际工作中及时合理的使用抗凝药物有指导作用，并有助于血栓形成的诊断、疗效评价和预后的评估。

本研究通过对MPP组和正常对照组的免疫球蛋白IgA、IgM和IgG进行检测，进一步的研究体液免疫在MPP发病机制中的作用。结果显示MPP组患儿的IgA、IgM水平均较正常对照组IgA、IgM水平增高，差异有统计学意义（P＜0.01）；MPP组患儿的IgG水平与正常对照组IgG水平比较，差异无统计学意义。说明患儿感染MP早期，机体体液免疫应答中可产生IgA和IgM，免疫球蛋白IgG在感染早期表达不明显。进一步表明IgA对支原体感染具有抗菌、抗毒素、抗病毒作用；IgM对菌血症感染有重要的防御作用。免疫球蛋白是具有抗体活性的动物蛋白，是由淋巴细胞（B细胞）产生的一种具有高度特异性、具有不同理化性质并能与多种抗原决定簇特异性结合的多种抗体的混合物，主要存在于血浆中，也可见于其他体液、组织和一些分泌液中。感染MP后机体一方面会刺激B细胞产生针对性抗体（即免疫球蛋白IgM及IgG），另一方面可致机体细胞膜抗原结构改变或者相似的自身抗原产生自身抗体发生自身免疫应答反应。通过对免疫球蛋白含量的测定，进而辅助多种疾病的诊断、疗效和预后的观察。免疫球蛋白IgA在机体免疫系统中具有抗菌、抗病毒、抗毒素的作用，可能对某些真菌和支原体也有作用，IgA含量低下机体易受感染从而引起呼吸道疾病［21］。IgM是机体免疫应答中最早产生的免疫球蛋白，是人体血清分子量最大的免疫球蛋白，其增高往往提示近期感染，有助于疾病的早期诊断。IgM具有溶菌和溶血作用，并具有较高的抗原结合价以及明显的补体激活能力。IgG在机体免疫系统的免疫防护中起重要的作用，不仅可以调理吞噬细胞的吞噬作用，还可以对游离病毒和外毒素起到中和作用［21］，是血清中含量最高、半衰期最长的免疫球蛋白。

综上所述，MPP组患儿存在免疫失衡和紊乱情况，是MPP患儿病情严重或反复的重要原因之一，与T细胞功能紊乱及MP感染后机体产生相应组织自身抗体导致多系统免疫损伤有关。血浆D-二聚体测定，利于早期发现MPP患儿血栓形成、预防急性肺栓塞的发生、指导抗凝药物的及时应用，并对疗效观察和评估预后具有重要意义。而免疫指标的改变又为MP感染后机体的免疫功能状态提供了科学依据，可用于MPP患儿的辅助诊断和免疫调节治疗的监测。因此，儿童感染MP后免疫功能紊乱，受到不同程度抑制，因此在常规抗支原体治疗的基础上，结合不同的临床症状及疾病进展情况，进一步监测D-二聚体水平的表达，加强对免疫系统的调节和治疗。

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（编校：李璐璐）

Changes of D-Dimer and Immunoglobulin in Children w ith M ycop lasma Pneumonia and its Significance

HAO Li1，ZHENG Cheng-zhong2Δ

（1.Department of Pediatric，Clinical College of The 306 Hospital of PLA of AnhuiMedical University，Beijing 100101，China；2.Department of Pediatric，The 306 Hospital of PLA，Beijing 100101，China）

ObjectiveTo explore the changes of T-lymphocyte subsets，D-Dimer and immunoglobulin in mycoplasma pneumonia children and its significance.MethodsThe levels of T lymphocyte subsets（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋）in 50 children with mycoplasma pneumonia（MPP Group）and 50 healthy children were detected by flow cytometry；The levels of D-Dimer were detected by immunoturbidimetry；The levels of serum immunoglobulin were detected by immune turbidimetric method.ResultsThe results of T lymphocyte subsets：Compared with normal control group，CD3＋and CD4＋peripheral blood cells in MPP group were significantly declined（P＜0.001）、CD8＋cellswere increased slightly，butwith no significant difference、CD4＋／CD8＋ratioswere decreased slightly.The results of D-Dimer：Compared with normal control group，the levels of D-Dimer in MPP group were significantly escalated（P＜0.001）.The results of immunoglobulin：IgA and IgM in MPP group were both significantly higher than those of normal group，but IgGwas notdifferent from that in normal group.ConclusionChildren withmycoplasma pneumonia have immune disorder，whichmay generate abnormal clotting.Therefore，besides the conventional anti-mycoplasma pneumonia treatment，we need to detect the levels of D-Dimer according to the clinical symptoms and disease progression and strength the regulation and treatment of the immune system.

mycoplasma pneumonia；T lymphocyte subsets；D-Dimer；immunoglobulin

R446.63

A

1005－1678（2014）03－0156－04

发展中国家肺炎是儿童时期最常见的疾病之一，也是我国住院患儿死亡中的首要病因，严重地威胁着我国儿童的身体健康［1］。肺炎支原体（Mycoplasma，MP）是儿童呼吸道感染常见的病原体，大小介于细菌与病毒之间，是已知能独立生活的病原微生物中最小的细胞外寄生菌，广泛寄居于自然界。肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumonia，MPP）好发于儿童及青少年，是最常见的由MP引起的下呼吸道感染性疾病，发病率在近年来有明显上升的趋势［2-3］。故对于MPP发病机制及治疗的探讨越来越引起人们的重视，有研究认为，MP致病机制除与直接感染病原体相关外，还与机体的免疫平衡功能失调有关［2-4］，其中T淋巴细胞为机体重要的免疫细胞。D-二聚体来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块，其增高反映了体内凝血和纤溶系统的激活［5］。通过对D-二聚体的检测可作为排查急性肺栓塞的有效发法，是急性肺栓塞诊断的重要手段之一。也有研究认为，MPP发病机制中，相关细胞因子都直接或者间接地参与了免疫反应、炎症反应及免疫损伤［6］。在MPP体液免疫方面，免疫球蛋白IgA、IgM、IgG与疾病的严重程度和病程长短成为人们研究的焦点。本文通过对 MPP患儿 T淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋）、D-二聚体及免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）水平进行研究，探讨其在诊治小儿MPP中的价值，为MPP患儿的临床诊断及治疗提供理论依据。

郝丽，女，硕士，住院医师，研究方向：儿童感染性疾病与儿童过敏性疾病诊治，E-mail：hao19840815li＠163.com；郑成中，通信作者，男，硕士，教授，研究方向：儿童感染性疾病与儿童过敏性疾病诊治，E-mail：zcz3066＠126.com。