Jy—Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用

杨红

[摘要] 目的 探讨Jy-Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用。方法 收集200例骨髓活检穿刺组织，选取其中150例采用Jy-Ⅱ脱钙液脱钙，同时选取50例采用5%的硝酸脱钙液脱钙做对照观察，脱钙后分别做HE染色、特殊染色（Gomori氏网状纤维染色）和免疫组织化学染色（MaxVisionTM法CD38染色），观察Jy-Ⅱ脱钙液对骨髓活检组织结构的保存及染色情况。 结果 经Jy-Ⅱ脱钙液脱钙后骨髓活检组织结构保持完整，完整率达98.67%。镜下形态结构清晰，组织结构清晰率达100.00%，染色情况良好，脱钙时间短，为150 min。脱钙完全，效果好。经5%的硝酸脱钙液脱钙后的骨髓活检组织，结构保持不完整，完整率达60.00%，镜下形态结构欠清晰，清晰率达52.00%，染色情况欠佳，脱钙时间长，长达240 min，脱钙不完全，效果欠佳（P<0.05）。 结论 Jy-Ⅱ脱钙液效果明显优于5%的硝酸脱钙液，骨髓活检组织结构保持良好，操作简便，脱钙时间短，在脱钙过程中无需更换脱钙液，HE染色、特殊染色、免疫组化染色效果也较满意，实用性强，不失为一种良好的脱钙液，值得推广

[关键词] Jy-Ⅱ脱钙液；骨髓活检

[中图分类号] R361 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）24-0046-03

组织脱钙过度，破坏组织形态结构和细胞成分性质，造成细胞核着色很浅或不着色，从而影响了组织的病理诊断[1]。本医院病理科实验室根据多年的工作经验，将Jy-Ⅱ氏混合脱钙液应用在骨髓活检工作中，获得了良好的效果，现将方法介绍如下。

1 材料与方法

1.1一般材料

1.1.1 标本 收集我院2010年1月～2013年11月骨髓活检标本200例。

1.1.2主要仪器及设备 主要仪器：LeicaASP300型全自动脱水机，英国珊鈍石蜡包埋机，Leica HM2235轮转石蜡切片机，常规病理制片和免疫组织化学染色所需的试剂及仪器；Gomori氏网状纤维染色试剂盒，抗体采用鼠抗CD38和DAB试剂盒均为即用型（均购自福州迈新生物有限技术开发公司）。

1.1.3 脱钙液的配制 Jy-Ⅱ脱钙液的配制：甲醛 30 mL，盐酸30 mL，甲酸20 mL，蒸馏水20 mL；将甲醛30 mL加入事先放有20 mL蒸馏水的烧杯中，再徐徐加入甲酸20 mL和盐酸30 mL，加盖摇匀即可[2]。5%硝酸脱钙液：将5 mL浓硝酸加入95 mL的蒸馏水中，摇匀即可。

1.1.4脱钙及脱钙终点的判断 以大头针刺入组织无阻力感，为脱钙完全。

1.2 方法

将取材好的骨髓穿刺标本（一般均为长0.5～1.0 cm，直径0.05～1.0 cm），选取其中150例，将组织放入1 mL的塑料离心管内，10%的中性福尔马林液固定2 h，倾去固定液，加入适量的Jy-Ⅱ氏脱钙液中2～2.5 h后取出，用蒸馏水稍洗。另一组50例采用5%硝酸脱钙液脱钙后蒸馏水冲洗，两组标本同时常规脱水，包埋，连续切片3张，厚2 μm，分别行HE染色，特殊染色（Gomori氏网状纤维染色，操作步骤按说明书），免疫组织化学染色（CD38染色，免疫组织化学染色采用MaXVisionTM方法，高压抗原修复，DAB显色，苏木精复染胞核，中性树胶封固，光镜观察。所有染色均用已知阳性片做阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照）。

1.3 统计学方法

采用卡方检验计算器V1.61进行统计学检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1组织结构及染色情况

经Jy-Ⅱ脱钙液脱钙后骨髓活检组织结构保持完整，完整率达98.67%。与对照组比较，具有显著差异（χ2=57.27，P<0.05）。观察组镜下形态结构清晰，组织结构清晰率达100.00%，染色情况良好。经5%的硝酸脱钙液脱钙后的骨髓活检组织结构不完整，完整率仅达60.00%，镜下形态结构欠清晰，清晰率只达52.00%，染色情况欠佳。见表1。

2.2脱钙时间、脱钙效果比较

Jy-Ⅱ脱钙液脱钙时间短，为150 min，5%的硝酸脱钙液脱钙时间长，达240 min。Jy-Ⅱ脱钙液脱钙完全，脱钙效果较好。5%的硝酸脱钙液脱钙不完全，效果欠佳。

2.3组织抗原的保持

Jy-Ⅱ脱钙液对组织损伤小。组织抗原保持完好。5%硝酸脱钙液对组织损伤大，抗原丢失。

2.4对染色效果的评估

2.4.1 HE结果 Jy-Ⅱ脱钙液骨组织结构保持良好， 细胞核呈蓝色，细胞浆、红细胞、骨小梁呈红色，色泽亮丽，对比鲜明。见图1。5%硝酸脱钙液镜下红染，胞核和细胞浆对比不鲜明，模糊不清。见图2。

2.4.2网状纤维染色结果 Jy-Ⅱ脱钙液网状纤维呈蓝黑色，细胞核呈蓝色。见图3。5%硝酸脱钙液网状纤维着色不理想。见图4。

2.4.3免疫组化结果判断 Jy-Ⅱ脱钙液阳性部位定位于准确，定位于细胞膜，呈棕黄色，见图5；5%硝酸脱钙液阳性部位定位不准确，部分抗原丢失，见图6。

3 讨论

由于骨组织中含有大量的钙盐沉淀而成最坚硬的结缔组织，直接切片相当麻烦[3]。骨和含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织，均需经脱钙处理 ，钙盐被溶解 ，组织变软后才能制作切片[4]。脱钙，是骨髓活检组织制片染色技术的关键环节，它是应用化学或物理化学的方法将组织成分中的钙盐与胶原纤维分离，弃去钙盐，保留完整的胶原纤维成分[5]，脱钙方法和脱钙液的选择与骨组织切片的制作质量有着密切的联系[6]。尤其要进行免疫组织化学染色时如何达到既充分脱钙又保护骨组织抗原不受破坏[7]。脱钙的方法和脱钙液的种类很多，寻求一种理想的脱钙液，是良好脱钙效果的关键。通常使用的脱钙液有以硝酸、甲酸、盐酸为主配置的脱钙液还有以铬酸和赘合剂配置的脱钙液[8]，但大多数酸类脱钙液对骨骼造成一定的损害[9]，对组织内的酶、抗原、核酸均有一定的破坏性[10]。硝酸脱钙时间过长，对超微结构也有一定的损伤[11]，而且除酸时间较长。目前多数病理实验室使用硝酸脱钙。硝酸是一种强酸，脱钙较迅速，但存在以下不足：脱钙时间1～5 d不等，不易掌握，脱钙过程中易产生气CO2，CO2气泡可引起组织变形，用硝酸做脱钙液容易形成亚硫酸钠，使脱钙液呈黄色，产生颜色后，影响脱钙速度，且组织黄染后，妨碍以后的染色反应，并影响对组织的观察判断，硝酸在组织脱钙过程易造成组织酸化，因此硝酸脱钙后的标本容易造成细胞核着色不良，染色效果不理想[12]。本实验室采用Jy-Ⅱ混合脱钙液，Jy-Ⅱ混合脱钙液的效果明显优越于单纯的5%硝酸脱钙液，所制成的切片，骨组织结构保持完整，胞核细胞浆着色清晰，对比鲜明。这种混合脱钙液可促进脱钙完全并加快脱钙速度，同时有防止纤维组织过度膨胀，减少组织的破坏及对染色的影响作用。在脱钙液中加入甲醛，具有穿透速度快，固定均匀，对组织收缩小的特点[13]，使骨髓活检标本在脱钙的同时得到了固定，甲醛不仅是优良的固定液，还可适度缓冲酸对组织的腐蚀作用。加入盐酸，对组织损害较小，对组织不膨胀，不至于导致脱钙过程缓慢。加入甲酸，甲酸又称蚁酸，甲酸性质温和，对组织破坏较轻，脱钙时间范围较宽，对组织损害程度较小，对染色效果影响不大。Jy-Ⅱ混合脱钙液脱钙速度较快，也就弥补了其他无机酸对组织的损害。利用盐酸和甲酸起到了事半功倍的效果。同时克服了单一酸类脱钙液对组织的损伤，使组织内部的抗原及超微结构也得到很好的保护。

本实验室对150例骨髓活检组织采用Jy-Ⅱ混合脱钙液，经反复实践，取得了良好的效果，骨髓活检组织结构保持完好，形态结构清晰，在脱钙过程中无需更换脱钙液，操作简便，脱钙时间短，对组织损伤小，组织抗原保存完好。HE染色、特殊染色和免疫组化染色效果评估也都比较满意，实用性强，因此本研究认为Jy-Ⅱ混合脱钙液不失为一种良好的脱钙液，值得推广。

[参考文献]

[1] 陈世梁，卢志承，董玉英. 介绍一种改良脱钙液在骨组织中应用[J]. 临床与实验病理学杂志，2009，25（5）：557.

[2] 席越，王戈平，黄啸原，等. 骨组织病理解剖学技术[M]. 北京：人民卫生出版社，1997：133.

[3] 赵洁，李霞，魏志敏，等. 骨组织脱钙方法的改良[J]. 齐鲁医学杂志，2006，21（4）：356.

[4] 连丽琴，夏凌志，钟慧霞. 三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析[J]. 武警医学杂志，2008，19（10）：937.

[5] 万蕾，章锦才，轩冬英，等. 不同脱钙方式观察牙髓组织切片的效果比较[J]. 广东医学，2012，33（7）：917.

[6] 胥维勇，杨群. 脱钙方法与脱钙液的选择及应用[J]. 中国组织化学与细胞化学组织杂志，2002，11（3）：263.

[7] 马恒辉，章如松，周航波，等. 介绍一种改良的Neutral氏EDTA脱钙液[J]. 诊断病理学杂杂志，2005，12（5）：391.

[8] 陈明城，张伟，赖续文，等. 改良脱钙液在骨骼组织切片中的应用[J]. 中国误诊学杂志，2011，11（35）：8640.endprint

[摘要] 目的 探讨Jy-Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用。方法 收集200例骨髓活检穿刺组织，选取其中150例采用Jy-Ⅱ脱钙液脱钙，同时选取50例采用5%的硝酸脱钙液脱钙做对照观察，脱钙后分别做HE染色、特殊染色（Gomori氏网状纤维染色）和免疫组织化学染色（MaxVisionTM法CD38染色），观察Jy-Ⅱ脱钙液对骨髓活检组织结构的保存及染色情况。 结果 经Jy-Ⅱ脱钙液脱钙后骨髓活检组织结构保持完整，完整率达98.67%。镜下形态结构清晰，组织结构清晰率达100.00%，染色情况良好，脱钙时间短，为150 min。脱钙完全，效果好。经5%的硝酸脱钙液脱钙后的骨髓活检组织，结构保持不完整，完整率达60.00%，镜下形态结构欠清晰，清晰率达52.00%，染色情况欠佳，脱钙时间长，长达240 min，脱钙不完全，效果欠佳（P<0.05）。 结论 Jy-Ⅱ脱钙液效果明显优于5%的硝酸脱钙液，骨髓活检组织结构保持良好，操作简便，脱钙时间短，在脱钙过程中无需更换脱钙液，HE染色、特殊染色、免疫组化染色效果也较满意，实用性强，不失为一种良好的脱钙液，值得推广

[关键词] Jy-Ⅱ脱钙液；骨髓活检

[中图分类号] R361 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）24-0046-03

组织脱钙过度，破坏组织形态结构和细胞成分性质，造成细胞核着色很浅或不着色，从而影响了组织的病理诊断[1]。本医院病理科实验室根据多年的工作经验，将Jy-Ⅱ氏混合脱钙液应用在骨髓活检工作中，获得了良好的效果，现将方法介绍如下。

1 材料与方法

1.1一般材料

1.1.1 标本 收集我院2010年1月～2013年11月骨髓活检标本200例。

1.1.2主要仪器及设备 主要仪器：LeicaASP300型全自动脱水机，英国珊鈍石蜡包埋机，Leica HM2235轮转石蜡切片机，常规病理制片和免疫组织化学染色所需的试剂及仪器；Gomori氏网状纤维染色试剂盒，抗体采用鼠抗CD38和DAB试剂盒均为即用型（均购自福州迈新生物有限技术开发公司）。

1.1.3 脱钙液的配制 Jy-Ⅱ脱钙液的配制：甲醛 30 mL，盐酸30 mL，甲酸20 mL，蒸馏水20 mL；将甲醛30 mL加入事先放有20 mL蒸馏水的烧杯中，再徐徐加入甲酸20 mL和盐酸30 mL，加盖摇匀即可[2]。5%硝酸脱钙液：将5 mL浓硝酸加入95 mL的蒸馏水中，摇匀即可。

1.1.4脱钙及脱钙终点的判断 以大头针刺入组织无阻力感，为脱钙完全。

1.2 方法

将取材好的骨髓穿刺标本（一般均为长0.5～1.0 cm，直径0.05～1.0 cm），选取其中150例，将组织放入1 mL的塑料离心管内，10%的中性福尔马林液固定2 h，倾去固定液，加入适量的Jy-Ⅱ氏脱钙液中2～2.5 h后取出，用蒸馏水稍洗。另一组50例采用5%硝酸脱钙液脱钙后蒸馏水冲洗，两组标本同时常规脱水，包埋，连续切片3张，厚2 μm，分别行HE染色，特殊染色（Gomori氏网状纤维染色，操作步骤按说明书），免疫组织化学染色（CD38染色，免疫组织化学染色采用MaXVisionTM方法，高压抗原修复，DAB显色，苏木精复染胞核，中性树胶封固，光镜观察。所有染色均用已知阳性片做阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照）。

1.3 统计学方法

采用卡方检验计算器V1.61进行统计学检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1组织结构及染色情况

经Jy-Ⅱ脱钙液脱钙后骨髓活检组织结构保持完整，完整率达98.67%。与对照组比较，具有显著差异（χ2=57.27，P<0.05）。观察组镜下形态结构清晰，组织结构清晰率达100.00%，染色情况良好。经5%的硝酸脱钙液脱钙后的骨髓活检组织结构不完整，完整率仅达60.00%，镜下形态结构欠清晰，清晰率只达52.00%，染色情况欠佳。见表1。

2.2脱钙时间、脱钙效果比较

Jy-Ⅱ脱钙液脱钙时间短，为150 min，5%的硝酸脱钙液脱钙时间长，达240 min。Jy-Ⅱ脱钙液脱钙完全，脱钙效果较好。5%的硝酸脱钙液脱钙不完全，效果欠佳。

2.3组织抗原的保持

Jy-Ⅱ脱钙液对组织损伤小。组织抗原保持完好。5%硝酸脱钙液对组织损伤大，抗原丢失。

2.4对染色效果的评估

2.4.1 HE结果 Jy-Ⅱ脱钙液骨组织结构保持良好， 细胞核呈蓝色，细胞浆、红细胞、骨小梁呈红色，色泽亮丽，对比鲜明。见图1。5%硝酸脱钙液镜下红染，胞核和细胞浆对比不鲜明，模糊不清。见图2。

2.4.2网状纤维染色结果 Jy-Ⅱ脱钙液网状纤维呈蓝黑色，细胞核呈蓝色。见图3。5%硝酸脱钙液网状纤维着色不理想。见图4。

2.4.3免疫组化结果判断 Jy-Ⅱ脱钙液阳性部位定位于准确，定位于细胞膜，呈棕黄色，见图5；5%硝酸脱钙液阳性部位定位不准确，部分抗原丢失，见图6。

3 讨论

由于骨组织中含有大量的钙盐沉淀而成最坚硬的结缔组织，直接切片相当麻烦[3]。骨和含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织，均需经脱钙处理 ，钙盐被溶解 ，组织变软后才能制作切片[4]。脱钙，是骨髓活检组织制片染色技术的关键环节，它是应用化学或物理化学的方法将组织成分中的钙盐与胶原纤维分离，弃去钙盐，保留完整的胶原纤维成分[5]，脱钙方法和脱钙液的选择与骨组织切片的制作质量有着密切的联系[6]。尤其要进行免疫组织化学染色时如何达到既充分脱钙又保护骨组织抗原不受破坏[7]。脱钙的方法和脱钙液的种类很多，寻求一种理想的脱钙液，是良好脱钙效果的关键。通常使用的脱钙液有以硝酸、甲酸、盐酸为主配置的脱钙液还有以铬酸和赘合剂配置的脱钙液[8]，但大多数酸类脱钙液对骨骼造成一定的损害[9]，对组织内的酶、抗原、核酸均有一定的破坏性[10]。硝酸脱钙时间过长，对超微结构也有一定的损伤[11]，而且除酸时间较长。目前多数病理实验室使用硝酸脱钙。硝酸是一种强酸，脱钙较迅速，但存在以下不足：脱钙时间1～5 d不等，不易掌握，脱钙过程中易产生气CO2，CO2气泡可引起组织变形，用硝酸做脱钙液容易形成亚硫酸钠，使脱钙液呈黄色，产生颜色后，影响脱钙速度，且组织黄染后，妨碍以后的染色反应，并影响对组织的观察判断，硝酸在组织脱钙过程易造成组织酸化，因此硝酸脱钙后的标本容易造成细胞核着色不良，染色效果不理想[12]。本实验室采用Jy-Ⅱ混合脱钙液，Jy-Ⅱ混合脱钙液的效果明显优越于单纯的5%硝酸脱钙液，所制成的切片，骨组织结构保持完整，胞核细胞浆着色清晰，对比鲜明。这种混合脱钙液可促进脱钙完全并加快脱钙速度，同时有防止纤维组织过度膨胀，减少组织的破坏及对染色的影响作用。在脱钙液中加入甲醛，具有穿透速度快，固定均匀，对组织收缩小的特点[13]，使骨髓活检标本在脱钙的同时得到了固定，甲醛不仅是优良的固定液，还可适度缓冲酸对组织的腐蚀作用。加入盐酸，对组织损害较小，对组织不膨胀，不至于导致脱钙过程缓慢。加入甲酸，甲酸又称蚁酸，甲酸性质温和，对组织破坏较轻，脱钙时间范围较宽，对组织损害程度较小，对染色效果影响不大。Jy-Ⅱ混合脱钙液脱钙速度较快，也就弥补了其他无机酸对组织的损害。利用盐酸和甲酸起到了事半功倍的效果。同时克服了单一酸类脱钙液对组织的损伤，使组织内部的抗原及超微结构也得到很好的保护。

本实验室对150例骨髓活检组织采用Jy-Ⅱ混合脱钙液，经反复实践，取得了良好的效果，骨髓活检组织结构保持完好，形态结构清晰，在脱钙过程中无需更换脱钙液，操作简便，脱钙时间短，对组织损伤小，组织抗原保存完好。HE染色、特殊染色和免疫组化染色效果评估也都比较满意，实用性强，因此本研究认为Jy-Ⅱ混合脱钙液不失为一种良好的脱钙液，值得推广。

[参考文献]

[1] 陈世梁，卢志承，董玉英. 介绍一种改良脱钙液在骨组织中应用[J]. 临床与实验病理学杂志，2009，25（5）：557.

[2] 席越，王戈平，黄啸原，等. 骨组织病理解剖学技术[M]. 北京：人民卫生出版社，1997：133.

[3] 赵洁，李霞，魏志敏，等. 骨组织脱钙方法的改良[J]. 齐鲁医学杂志，2006，21（4）：356.

[4] 连丽琴，夏凌志，钟慧霞. 三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析[J]. 武警医学杂志，2008，19（10）：937.

[5] 万蕾，章锦才，轩冬英，等. 不同脱钙方式观察牙髓组织切片的效果比较[J]. 广东医学，2012，33（7）：917.

[6] 胥维勇，杨群. 脱钙方法与脱钙液的选择及应用[J]. 中国组织化学与细胞化学组织杂志，2002，11（3）：263.

[7] 马恒辉，章如松，周航波，等. 介绍一种改良的Neutral氏EDTA脱钙液[J]. 诊断病理学杂杂志，2005，12（5）：391.

[8] 陈明城，张伟，赖续文，等. 改良脱钙液在骨骼组织切片中的应用[J]. 中国误诊学杂志，2011，11（35）：8640.endprint

[摘要] 目的 探讨Jy-Ⅱ脱钙液在骨髓活检中的应用。方法 收集200例骨髓活检穿刺组织，选取其中150例采用Jy-Ⅱ脱钙液脱钙，同时选取50例采用5%的硝酸脱钙液脱钙做对照观察，脱钙后分别做HE染色、特殊染色（Gomori氏网状纤维染色）和免疫组织化学染色（MaxVisionTM法CD38染色），观察Jy-Ⅱ脱钙液对骨髓活检组织结构的保存及染色情况。 结果 经Jy-Ⅱ脱钙液脱钙后骨髓活检组织结构保持完整，完整率达98.67%。镜下形态结构清晰，组织结构清晰率达100.00%，染色情况良好，脱钙时间短，为150 min。脱钙完全，效果好。经5%的硝酸脱钙液脱钙后的骨髓活检组织，结构保持不完整，完整率达60.00%，镜下形态结构欠清晰，清晰率达52.00%，染色情况欠佳，脱钙时间长，长达240 min，脱钙不完全，效果欠佳（P<0.05）。 结论 Jy-Ⅱ脱钙液效果明显优于5%的硝酸脱钙液，骨髓活检组织结构保持良好，操作简便，脱钙时间短，在脱钙过程中无需更换脱钙液，HE染色、特殊染色、免疫组化染色效果也较满意，实用性强，不失为一种良好的脱钙液，值得推广

[关键词] Jy-Ⅱ脱钙液；骨髓活检

[中图分类号] R361 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）24-0046-03

组织脱钙过度，破坏组织形态结构和细胞成分性质，造成细胞核着色很浅或不着色，从而影响了组织的病理诊断[1]。本医院病理科实验室根据多年的工作经验，将Jy-Ⅱ氏混合脱钙液应用在骨髓活检工作中，获得了良好的效果，现将方法介绍如下。

1 材料与方法

1.1一般材料

1.1.1 标本 收集我院2010年1月～2013年11月骨髓活检标本200例。

1.1.2主要仪器及设备 主要仪器：LeicaASP300型全自动脱水机，英国珊鈍石蜡包埋机，Leica HM2235轮转石蜡切片机，常规病理制片和免疫组织化学染色所需的试剂及仪器；Gomori氏网状纤维染色试剂盒，抗体采用鼠抗CD38和DAB试剂盒均为即用型（均购自福州迈新生物有限技术开发公司）。

1.1.3 脱钙液的配制 Jy-Ⅱ脱钙液的配制：甲醛 30 mL，盐酸30 mL，甲酸20 mL，蒸馏水20 mL；将甲醛30 mL加入事先放有20 mL蒸馏水的烧杯中，再徐徐加入甲酸20 mL和盐酸30 mL，加盖摇匀即可[2]。5%硝酸脱钙液：将5 mL浓硝酸加入95 mL的蒸馏水中，摇匀即可。

1.1.4脱钙及脱钙终点的判断 以大头针刺入组织无阻力感，为脱钙完全。

1.2 方法

将取材好的骨髓穿刺标本（一般均为长0.5～1.0 cm，直径0.05～1.0 cm），选取其中150例，将组织放入1 mL的塑料离心管内，10%的中性福尔马林液固定2 h，倾去固定液，加入适量的Jy-Ⅱ氏脱钙液中2～2.5 h后取出，用蒸馏水稍洗。另一组50例采用5%硝酸脱钙液脱钙后蒸馏水冲洗，两组标本同时常规脱水，包埋，连续切片3张，厚2 μm，分别行HE染色，特殊染色（Gomori氏网状纤维染色，操作步骤按说明书），免疫组织化学染色（CD38染色，免疫组织化学染色采用MaXVisionTM方法，高压抗原修复，DAB显色，苏木精复染胞核，中性树胶封固，光镜观察。所有染色均用已知阳性片做阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照）。

1.3 统计学方法

采用卡方检验计算器V1.61进行统计学检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1组织结构及染色情况

经Jy-Ⅱ脱钙液脱钙后骨髓活检组织结构保持完整，完整率达98.67%。与对照组比较，具有显著差异（χ2=57.27，P<0.05）。观察组镜下形态结构清晰，组织结构清晰率达100.00%，染色情况良好。经5%的硝酸脱钙液脱钙后的骨髓活检组织结构不完整，完整率仅达60.00%，镜下形态结构欠清晰，清晰率只达52.00%，染色情况欠佳。见表1。

2.2脱钙时间、脱钙效果比较

Jy-Ⅱ脱钙液脱钙时间短，为150 min，5%的硝酸脱钙液脱钙时间长，达240 min。Jy-Ⅱ脱钙液脱钙完全，脱钙效果较好。5%的硝酸脱钙液脱钙不完全，效果欠佳。

2.3组织抗原的保持

Jy-Ⅱ脱钙液对组织损伤小。组织抗原保持完好。5%硝酸脱钙液对组织损伤大，抗原丢失。

2.4对染色效果的评估

2.4.1 HE结果 Jy-Ⅱ脱钙液骨组织结构保持良好， 细胞核呈蓝色，细胞浆、红细胞、骨小梁呈红色，色泽亮丽，对比鲜明。见图1。5%硝酸脱钙液镜下红染，胞核和细胞浆对比不鲜明，模糊不清。见图2。

2.4.2网状纤维染色结果 Jy-Ⅱ脱钙液网状纤维呈蓝黑色，细胞核呈蓝色。见图3。5%硝酸脱钙液网状纤维着色不理想。见图4。

2.4.3免疫组化结果判断 Jy-Ⅱ脱钙液阳性部位定位于准确，定位于细胞膜，呈棕黄色，见图5；5%硝酸脱钙液阳性部位定位不准确，部分抗原丢失，见图6。

3 讨论

由于骨组织中含有大量的钙盐沉淀而成最坚硬的结缔组织，直接切片相当麻烦[3]。骨和含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织，均需经脱钙处理 ，钙盐被溶解 ，组织变软后才能制作切片[4]。脱钙，是骨髓活检组织制片染色技术的关键环节，它是应用化学或物理化学的方法将组织成分中的钙盐与胶原纤维分离，弃去钙盐，保留完整的胶原纤维成分[5]，脱钙方法和脱钙液的选择与骨组织切片的制作质量有着密切的联系[6]。尤其要进行免疫组织化学染色时如何达到既充分脱钙又保护骨组织抗原不受破坏[7]。脱钙的方法和脱钙液的种类很多，寻求一种理想的脱钙液，是良好脱钙效果的关键。通常使用的脱钙液有以硝酸、甲酸、盐酸为主配置的脱钙液还有以铬酸和赘合剂配置的脱钙液[8]，但大多数酸类脱钙液对骨骼造成一定的损害[9]，对组织内的酶、抗原、核酸均有一定的破坏性[10]。硝酸脱钙时间过长，对超微结构也有一定的损伤[11]，而且除酸时间较长。目前多数病理实验室使用硝酸脱钙。硝酸是一种强酸，脱钙较迅速，但存在以下不足：脱钙时间1～5 d不等，不易掌握，脱钙过程中易产生气CO2，CO2气泡可引起组织变形，用硝酸做脱钙液容易形成亚硫酸钠，使脱钙液呈黄色，产生颜色后，影响脱钙速度，且组织黄染后，妨碍以后的染色反应，并影响对组织的观察判断，硝酸在组织脱钙过程易造成组织酸化，因此硝酸脱钙后的标本容易造成细胞核着色不良，染色效果不理想[12]。本实验室采用Jy-Ⅱ混合脱钙液，Jy-Ⅱ混合脱钙液的效果明显优越于单纯的5%硝酸脱钙液，所制成的切片，骨组织结构保持完整，胞核细胞浆着色清晰，对比鲜明。这种混合脱钙液可促进脱钙完全并加快脱钙速度，同时有防止纤维组织过度膨胀，减少组织的破坏及对染色的影响作用。在脱钙液中加入甲醛，具有穿透速度快，固定均匀，对组织收缩小的特点[13]，使骨髓活检标本在脱钙的同时得到了固定，甲醛不仅是优良的固定液，还可适度缓冲酸对组织的腐蚀作用。加入盐酸，对组织损害较小，对组织不膨胀，不至于导致脱钙过程缓慢。加入甲酸，甲酸又称蚁酸，甲酸性质温和，对组织破坏较轻，脱钙时间范围较宽，对组织损害程度较小，对染色效果影响不大。Jy-Ⅱ混合脱钙液脱钙速度较快，也就弥补了其他无机酸对组织的损害。利用盐酸和甲酸起到了事半功倍的效果。同时克服了单一酸类脱钙液对组织的损伤，使组织内部的抗原及超微结构也得到很好的保护。

本实验室对150例骨髓活检组织采用Jy-Ⅱ混合脱钙液，经反复实践，取得了良好的效果，骨髓活检组织结构保持完好，形态结构清晰，在脱钙过程中无需更换脱钙液，操作简便，脱钙时间短，对组织损伤小，组织抗原保存完好。HE染色、特殊染色和免疫组化染色效果评估也都比较满意，实用性强，因此本研究认为Jy-Ⅱ混合脱钙液不失为一种良好的脱钙液，值得推广。

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