青蒿琥酯对大鼠子宫内膜异位症模型血清VEGF和MMP-9的影响

宋继荣，朴英兰，李佳琳，杜佳秋

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江佳木斯154003)

子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)是育龄妇女常见病和多发病，因其具有复发、转移等恶性生物学行为且缺乏有效治愈手段而长期困扰临床。近年研究显示血管生成是子宫内膜异位症形成和发展的必备条件之一。因此抗血管生成成为目前治疗EMs的研究热点。青蒿琥酯(artesunate)是从菊科一年生草本植物黄花蒿提取所得的倍半萜内酯类化合物青蒿素的水溶性衍生物，临床上多用于抢救和治疗脑型疟疾和恶性疟疾，其毒、副作用较少［1］。近年来研究发现青蒿琥酯具有抗血管生成作用。本实验采用不同剂量青蒿琥酯干预大鼠子宫内膜异位症模型，为子宫内膜异位症的治疗提供新的思路。

1 材料与方法

健康成熟未孕雌性Wistar大鼠50只，体重(220±10)g，(购自佳木斯大学动物实验中心。)参考Vemond等［2］的方法，以自体移植法手术建立子宫内膜异位症模型。建模后3周开腹观察成模情况，按Katsuki方法［3］用两脚规测量计算移植物体积(长×宽×高)mm3。将造模成功的大鼠随机分为4组，每天采用灌胃法给药。(1)生理盐水对照组：每天灌胃法服用生理盐水2mL；(2)青蒿琥酯低剂量组：10mg/kg·d；(3)青蒿琥酯中剂量组：50mg/kg·d；(4)青蒿琥酯高剂量组：100mg/kg·d。连用2周后处死大鼠。开腹观察移植内膜情况。同时取大鼠内眦静脉血清ELISA法检测VEGF/MMP-9浓度

2 结果

2.1 成模情况

造模成功的大鼠可见移植内膜体积增大，内出现液体积聚(积液高度≥2mm)，呈透亮的小囊泡，被结缔组织或大网膜覆盖并有血管形成，质软。取少许组织做病理检查，有内膜上皮细胞间质生长并有分泌活性，证实建模成功。50只大鼠中有40只移植物成活，成功率为80%。分别测量并记录移植物体积。

2.2 青蒿琥酯治疗前后各组成模大鼠移植物体积(mm3)变化

青蒿琥酯治疗前几乎所有异位子宫内膜病灶都与周围组织有不同程度的粘连，部分病灶与肠管、子宫粘连严重。治疗后，对照组移植物体积和粘连情况与治疗前无明显差异(P＞0.05)。用药组的大鼠异位内膜病灶体积均有明显缩小(P＜0.05)，且不同剂量组之间有显著性差异。见表1。

2.3 各治疗组大鼠外周血MMP-9、VEGF的表达及与对照组之间的比较

见表2。

表1 治疗前后各组大鼠移植物体积V(mm3)的变化(x± s，n=10)

表2 青蒿琥酯灌胃后各组大鼠外周血MMP-9、VEGF表达水平()

表2 青蒿琥酯灌胃后各组大鼠外周血MMP-9、VEGF表达水平()

注：各用药组大鼠血清中MMP-9及VEGF含量均低于对照组，差异有显著性(P＜0.05)；各个剂量组间两两比较差异显著(P＜0.05)，随着给药剂量的增加，两者的含量均明显减少。

组别 治疗后MMP-9(ug/L) 治疗后VEGF(ng/L)低剂量组18.24±0.25 20.86±1.62中剂量组 17.01±0.31 18.87±1.42高剂量组 15.89±0.13 16.68±1.23对照组20.98±0.73 22.96±1.38

3 讨论

3.1 VEGF及MMP-9与子宫内膜异位症的关系

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是迄今发现的最重要的血管生长因子，广泛存在于人体组织中，几乎参与机体各种疾病过程。异位内膜的生长需要依赖新生血管给予营养。而VEGF诱导血管内皮细胞增殖、增加微血管通透性从而促进新生血管形成正好满足了这种需要。大量研究表明，内异症患者无论是血清还是腹腔液以及病灶组织中都有VEGF高表达。基质金属蛋白酶(MMP)是一组锌离子依赖性内肽酶，它们需在激活剂作用下，脱去前肽才具有酶活性。它们几乎能降解细胞外基质的所有成分，因而成为近年来肿瘤侵袭、转移以及内异症研究的热点。MMP-9作为MMP家族的重要成员，它参与基底膜的降解；并且能够释放血管内皮生长因子(VEGF)［4］，从而促进异位内膜组织的侵袭和生长。成模组大鼠血清中的MMP-9和VEGF表达明显高于正常大鼠血清含量，证实两者与内异症的生成、持续及侵袭有关［5］。

3.2 青蒿琥酯对大鼠异位内膜病灶的影响

20世纪初，有学者用家兔做为实验对象，成功将自体子宫内膜移植到兔子腹腔，成为最早的与人类内异症相似的异位病灶，为早期内异症的研究打下了良好的基础。1985年大鼠自体移植模型创立，经过国内外学者的多次摸索实践，成功率已经达到80%以上。本实验成功复制了大鼠子宫内膜异位症模型，成功率80%，与文献报道的接近。病灶肉眼可见内部充满透亮浆液的小囊泡，表面覆盖结缔组织并有丰富的血管；镜下观察可见囊壁内膜层子宫内膜上皮细胞，呈高柱状或扁平状，并有少量上皮细胞有分泌现象。腺体间质细胞少而稀疏、形态改变，有的腺腔极度扩大。这与人类内异症病灶组织在光镜下的病理结构类似［6］。经过青蒿琥酯治疗后，三组大鼠异位病灶体积均较对照组明显缩小，血清中MMP-9和VEGF的表达也明显减少，表明青蒿琥酯通过某种方式降低了异位内膜新生血管的形成，并对异位组织的侵袭起到了抑制作用。

3.3 青蒿琥酯抗EMs血管生成作用的应用前景

青蒿在我国用于治疗疟疾已有上千年历史，因其具有来源广、价格低廉、毒副反应轻、抗疟效果好而一直受到我国药学与临床工作者的青睐。青蒿素及其衍生物是我国具有完全自主知识产权的药物，目前已形成批量生产，开发其新用途对提高药用价值具有重要意义。近年来国内外研究表明青蒿素及衍生物青蒿琥酯具有广泛的体内外抗肿瘤效应，而其中的一个重要机制就是抑制肿瘤的新生血管形成，本实验显示应用青蒿琥酯后异位病灶的体积和VEGF及MMP-9的血清含量均明显低于对照组，提示青蒿琥酯抑制了两者的表达，并推测其可能通过抑制新生血管的生成从而达到对内异症的治疗作用。临床上青蒿琥酯一直用于抗疟治疗，它的试验研究主要在抗肿瘤领域，本课题组首次把青蒿琥酯用于治疗EMs大鼠模型的研究，并得出有意义的结论，对开发老药的新作用有一定的启示，并给子宫内膜异位症的治疗提供了新思路。

［1］Benakis A，Paris M，Loutan L，et al.Pharmacokinetics of artemisinin and artesunate after oral administration in healthy volunteers［J］.Am J Trop Med Hyg，1997，56（1）：17-23

［2］Vernon MW，Wilison EA.Studies on the surgical induction of endometriosis in the rat［J］.Fertil Steril，1985，44（5）：684-694

［3］Katsuki Y，Takano Y，Futamura Y，et al.Effects of dienogest，a synthetic steroid，on experimental endometriosis in rats［J］.Eur J Endocrinol，1998，138（2）：216-226

［4］鲁衍强，叶其壮.基质金属蛋白酶及其抑制剂［J］.生命的化学，2002，22（4）：348

［5］宋继荣，李佳林，卢北燕，等.吡格列酮对大鼠子宫内膜异位症模型VEGF和MMP-9表达的影响［J］.黑龙江医药科学，2011，34（4）：96-97

［6］Uchiide l，Lhara T，Sugamata M.Pathological evalution of the rat endometriosis model［J］.Fertil Steril，2002，78（4）：782-786