白头翁正丁醇提取物对小鼠肝损伤保护研究

2014-09-17李春丰何淑玲张羽男江清林

黑龙江医药科学 2014年2期

黄展，李春丰，王晶，何淑玲，姜成，张羽男，时慧，蒋勇，江清林

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江佳木斯154003；2.佳木斯大学生命科学院，黑龙江佳木斯154007；3.佳木斯大学基础医学院，黑龙江佳木斯154007)

白头翁为毛茛科植物(Pulsatilla chinensis(Bunge)Regel)，多年生草本，别名：打碗花、老翁花、奈何草、耗子花、毛姑朵花、老公花。分布在黑龙江、吉林、辽宁等省山岗与荒坡及田野间。白头翁干燥根春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。白头翁干燥根具有清热解毒，凉血止痢，燥湿杀虫的功效。对细菌及真菌等有不同抑制作用，白头翁正丁醇提取物对小鼠肝损伤是否有保护作用尚未见报道。本实验进行白头翁正丁醇提取物对小鼠肝损伤是否有保护作用研究。

1 材料与方法

1.1 材料

①试剂：四氯化碳(CCl4，分析纯，重庆川江化学试剂厂，批号20120426)；正丁醇(CH3CH2CH2CH2OH，分析纯，上海紫业化工有限公司，批号20110312)；葵花护肝片(黑龙江葵花药业股份有限公司，批号110602)；丙二醛(Malondialdehyde；malonic dialdehyde；Propan edial，MDA)；黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase from buttermilk，XOD)；谷胱甘肽还原酶试剂盒(Glutathione Reductase Assay Kit上海碧云天生物技术有限公司，批号20100322)。

②药物：白头翁正丁醇提取物提取工艺流程：白头翁粗粉→加95%乙醇热回流提取3h→用布氏滤斗过滤，共提取3次，合并滤液静置12 h→80℃R2003旋转蒸发器减压浓缩→白头翁提取物(BR)→水溶解混悬→正丁醇萃取→YC-015微型实验室喷雾干燥机真空干燥备用。正丁醇组分加水超声溶解定容10mL，即1mL，含生药量5g。

③实验动物：昆明种(KM)小鼠，60只，平均体质量(20±2)g，由佳木斯大学实验动物中心提供。

④仪器722分光光度计(上海棱光技术有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 急性肝损伤模型建立：昆明种(KM)小鼠，60只，平均体质量(20±2)g，由佳木斯大学实验动物中心提供，采用0.1%CCl4花生油溶液10mL/kg，禁食不禁水24h后模型成功。

1.2.2 分组与给药：采用随机分组，①正常对照组：昆明种(KM)小鼠10只，喂饲普通饲料，灌胃生理盐水1mL/100g·d；②急性肝损伤模型组(以下简称模型组)：昆明种(KM)小鼠10只，灌胃生理盐水1mL/100g·d；③葵花护肝片组：昆明种(KM)小鼠10只，灌胃0.5%葵花护肝片1mL/100g·d；④白头翁正丁醇提取物低剂量组：昆明种(KM)小鼠10只，灌胃5%白头翁正丁醇提取物1mL/100g·d；⑤白头翁正丁醇提取物中剂量组：昆明种(KM)小鼠10只，灌胃10%白头翁正丁醇提取物1mL/100g·d；⑥白头翁正丁醇提取物高剂量组：昆明种(KM)小鼠10只，灌胃15%白头翁正丁醇提取物1mL/100g·d。以上6组分别每天灌胃给药(ig)1次连续灌胃15d后，除正常对照组外，其它组小鼠灌胃0.1%CCl花生油溶液10mL/kg禁食不禁水，24h后造模成功，分别进行生化测定及形态学检查实验观察白头翁正丁醇提取物对小鼠肝损伤保护效果。

1.3 统计学处理

采用SPSS18.0统计软件处理，实验数据用平均数±标准差()表示，方差分析实验数据。

2 结果

2.1 白头翁正丁醇提取物对肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸转氨酶(AST)及肝脏系数影响结果，见表1。

表1 白头翁正丁醇提取物对肝损伤小鼠血清中ALT与AST及肝脏系数影响(x± s，n=10)

白头翁正丁醇提取物对肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸转氨酶(AST)及肝脏系数影响实验方法是从模型成功小鼠由眼球后静脉取血，测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸转氨酶(AST)及取肝称重计算肝脏系数(肝脏重量/体重)。实验结果从表1中可以见到急性肝损伤模型组与正常对照组比较丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸转氨酶(AST)显著升高(P＜0.01)。白头翁正丁醇提取物中、高剂量组与急性肝损伤模型组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸转氨酶(AST)比较差异显著(P＜0.01、P＜0.05)，表明白头翁正丁醇提取物对急性肝损伤小鼠肝脏保护作用明显。急性肝损伤模型组肝脏系数增大明显，表明药物对肝脏轻度肿胀有缓解作用。

2.2 白头翁正丁醇提取物对肝损伤小鼠肝组织中丙二醛(MDA)与黄嘌呤氧化酶(XOD)及谷胱甘肽还原酶(GSH)影响，见表2。

白头翁正丁醇提取物对肝损伤小鼠血清中丙二醛(MDA)与黄嘌呤氧化酶(XOD)及谷胱甘肽还原酶(GSH)影响实验方法，从模型成功小鼠肝左叶取病部肝组织制备10%肝组织匀浆，运用试剂盒测定血清中丙二醛(MDA)(n mol/mg)含量与黄嘌呤氧化酶(XOD)(U/g)及谷胱甘肽还原酶(GSH)(U/g)活性，722分光光度计测定。

实验结果从表2中可以见到急性肝损伤模型组与正常对照组比较肝组织中丙二醛(MDA)与黄嘌呤氧化酶(XOD)活性显著升高，谷胱甘肽还原酶(GSH)活性降低显著(P＜0.01)。白头翁正丁醇提取物中、高剂量组均可降低肝组织中丙二醛(MDA)与黄嘌呤氧化酶(XOD)水平，谷胱甘肽还原酶(GSH)活力提高显著(P＜0.01)。

表2 白头翁正丁醇提取物对肝损伤小鼠肝组织中MDA、XOD及GSH影响(x± s，n=10)

3 讨论

肝损伤临床表现腹腔内出血与血液及胆汁引起腹膜刺激征，按损伤程度分真性肝裂伤与肝包膜下裂伤及中央型肝裂伤三种类型。小鼠肝损伤是研究白头翁正丁醇提取物护肝作用及机制理想病理模型。四氯化碳(CCl4)引起小鼠肝损伤主要是代谢产生自由基作用，其机制是四氯化碳(CCl4)进入小鼠体内经电子还原产生氯甲基及过氧化三氯甲基自由基攻击脂质细胞膜，肝脏中肝细胞脂质过氧化形成肝损伤，表现为肝肿大，肝脂肪变性，肝硬化等病变。小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸转氨酶(AST)是表示肝损伤主要指标和肝细胞受损程度。

白头翁正丁醇提取物对小鼠肝损伤保护研究中经过小鼠灌胃0.1%CCl花生油溶液10mL/kg 24h肝损伤模型形成，表现为肝脏被膜分隔形成肝小叶结构被破坏，肝细胞间血窦及中央静脉扩张明显，肝细胞索排列不规律，肝脏组织呈点状及碎片状和桥接坏死，脂肪变性及肝细胞变性呈水样，肝小叶有大量浸润发炎细胞。实验结果表明白头翁正丁醇提取物中、高剂量对小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸转氨酶(AST)及肝脏系数降低显著，四氯化碳(CCl4)引起肝损伤形态学病变减轻，说明白头翁正丁醇提取物对四氯化碳(CCl4)引起肝损伤小鼠保护作用显著。本实验的白头翁正丁醇提取物中和高剂量组小鼠肝小叶结构破坏不显著，肝细胞间血窦及中央静脉扩张不明显，肝细胞肿胀坏死处不明显，发炎浸润细胞不多，肝脏组织呈点状少量坏死。表明白头翁正丁醇提取物对小鼠肝损伤有保护作用，这可能就是白头翁正丁醇提取物保护小鼠肝损伤主要作用机制之一。

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