二根龙蛭汤对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织微循环的影响

顿宝生，范小璇，强选萍，逯 莉，冯文慧

(1.陕西国际商贸学院，陕西 咸阳 712046；2. 陕西中医学院附属医院，陕西 咸阳 712046)

缺血性脑血管病是严重危害人类健康的常见病、多发病。据相关统计，在急性脑血管病中，缺血性脑血管病占总数的50%～70%[1]，而缺血性中风占全部急性脑血管疾病患者的86%[2]。因其具有高致残率、高病死率的特点，给社会和家庭带来沉重负担。微循环障碍是缺血性脑血管病发生后主要的病理变化，因此，改善脑组织微循环是治疗缺血性中风的主要途径。二根龙蛭汤是笔者通过长期临床工作总结出的经验方，治疗脑缺血性疾病效果良好，本实验旨在探讨其作用机制，现报道如下。

1 实验资料

1.1动物及分组 选用SD成年大鼠40只，体质量(200±50)g，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK 2012-003。将大鼠随机分为假手术组、模型组、对照组和治疗组，每组10只。

1.2药物 吡拉西坦片，宜昌人福药业有限责任公司生产；二根龙蛭汤，组方：葛根、白茅根、地龙、水蛭、丹参、红花、川芎，水煎取汁，由陕西国际商贸学院医药学院实验室提供。

1.3造模 参考文献[3-4]制造缺血再灌注模型。所有动物购回后适应性喂养7 d，术前12 h禁饮食，自由饮水。称质量后用10%水合氯醛(3.5 mL/kg) 腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后将大鼠固定在鼠板上，颈部剃毛，皮肤消毒后，取正中切口，仔细分离右侧颈外动脉、颈内动脉，用丝线结扎颈外动脉，颈内动脉远端放置动脉夹；将头皮针端口打磨光滑，把头端涂油石蜡油的尼龙渔线从颈外动脉靠近分叉处导入血管内，去掉动脉夹，在直视下缓慢推进渔线入颅，遇到阻力后停止，入颅约1.8 cm；将颈内动脉连同渔线一起结扎，缺血30 min，将造模成功(成功标准：苏醒后出现左侧前肢屈曲、内收、左侧转圈、或向右侧倾倒)大鼠放开颈外动脉结扎线，将留在外面的线拔除1 cm，使大脑中动脉再通。假手术组只切开颈部皮肤、暴露血管后缝合皮肤。

1.4治疗方法 所有动物术后给予红霉素软膏涂抹伤口，假手术和模型组术后6 h开始给予进食进水。对照组术后6 h在进食进水的基础上予吡拉西坦片，按人与实验用鼠比为1:10进行换算后以3.6 g/(kg·d)量灌胃；治疗组术后6 h进食进水，给予二根龙蛭汤，根据体质量按人正常用量的10倍浓缩煎剂灌胃治疗。

1.5Morris水迷宫实验 大鼠购回后第3 d开始进行水迷宫训练，连续3 d；术后第4天再次进行训练，3 d。术后第7天进行水迷宫实验。放置一直径1.3 m、深0.5 m的圆形水池，池壁为白色，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 4个象限，在任何一象限内放置一个直径10 cm、高25 cm的安全平台，水面没过平台5 cm，水中注入适量奶粉，以目视看不见平台为宜，水温控制在25 ℃左右。记录大鼠寻找到安全平台时间，即逃避潜伏时间；再撤去平台，选第Ⅱ象限入水点将大鼠面向池壁放入水中，记录90 s内大鼠跨越原平台次数。

1.6指标测定 模型动物经治疗7 d后将动物处死取脑。10%水合氯醛腹腔注射麻醉后经左心室穿刺，生理盐水冲洗，见肝脏颜色发白后在冰盘上迅速断头取脑，取右侧大脑，去除小脑和延髓部分，距额极2.5 mm向后切去10 mm脑组织，称质量后移入玻璃匀浆管中，按1∶10(W/V)比例加入9倍体积的预冷生理盐水，冰盘上匀浆，充分研碎，组织匀浆后4 000 r/min离心10 min后提取上清液待测。采用酶联免疫法按VEGF试剂说明书配置洗涤液、标准品、酶结合物工作液等，加样后采用全自动酶标仪测定。

2 结 果

本研究死亡大鼠共4只，其中模型组2只，治疗组和对照组各1只。水迷宫实验结果见表1。治疗后7 d，假手术组 VEGF含量(51.50± 5.17)ng/L，模型组(79.63± 8.42)ng/L，治疗组(157.89± 10.49)ng/L，对照组(97.36± 41.14)ng/L。治疗组大鼠脑组织VEGF含量较模型组明显升高(t=3.84,P<0.05)，较对照组亦升高明显(t=2.89,P<0.05)。

3 讨 论

VEGF是一种特异性作用于血管内皮细胞的内皮生长因子,有促进血管内皮增生、增强血管通透性加速新血管形成的作用[5]。研究表明，在脑梗死发生后VEGF的表达会上调，促进脑部缺血半暗带区新血管形成，达到缩小梗死体积、减轻缺血损害的目的[6-7]。 VEGF参与了脑缺血后脑组织的病理修复过程[8]，在缺血性脑血管病中有促进内皮细胞增殖、促新生血管形成保护神经亲神经特性及增加脑血管通透性等生物学作用[9]。本项研究表明，二根龙蛭汤能改善脑缺血再灌注损伤后模型大鼠水迷宫实验中的学习记忆能力，提高大鼠脑组织中VEGF的含量，提示二根龙蛭汤改善脑缺血再灌注模型大鼠的学习记忆能力可能与该方能提高脑组织中VEGF含量，改善脑组织微循环状况有关。

表1 治疗后7 d水迷宫实验结果比较

注：①与模型组比较，P<0.05；②与对照组比较，P<0.05；③与对照组比较，P>0.05。

二根龙蛭汤是由葛根、白茅根、地龙、水蛭、丹参、红花、川芎7味中药组成。水蛭地龙共为君药，水蛭咸、苦、平而归肝经，破血、逐瘀、通经；地龙咸、寒归肝、脾、膀胱经，息风通络、利水。二药共用使瘀血消散，闭阻之经络畅通。臣以丹参、红花、川芎，丹参苦、寒，归心、肝经，具有活血调经、凉血安神之功效；红花辛温，归心、肝经，具有活血通经、祛瘀止痛之功效。二者相须为用，功专于化瘀，再加活血行气、祛风止痛之川芎，能上行头目，旁通络脉，使瘀血去、经脉通，头痛止，意识清。佐以葛根，甘辛凉，解肌退热，扩管通脉。使药白茅根甘、寒，凉血止血，清热利水，使热散而血止，湿渗则水利。全方共奏化瘀通络利水之效。

研究发现葛根素能明显改善急性血瘀模型大鼠的血流变学作用，且高剂量组对全血黏度低切值的降低作用明显强于低剂量组，并呈一定量效关系[10]。丹参素可以改善脂多糖引起的小鼠的脑微循环障碍, 该作用可能与其抑制粒细胞黏附分子CD11b和CD18、大脑皮质血管内皮黏附分子ICAM-1和E-selectin的表达, 抑制血浆炎性因子TNF-A产生有关[11]。红花黄色素能明显提升缺血再灌注后局部脑血流量，降低脑组织的含水量，缩小脑梗死面积，减轻缺血所致的组织病理学变化，可通过抗氧化保护神经系统免受大鼠脑缺血再灌注的损伤[12]。川芎具有抗凝抑制血小板聚集，增加纤溶活性，降低血黏度，抑制脑缺血时体内血小板激活，解除血管平滑肌痉挛，扩张血管改善微循环的作用；川芎提取物对盐酸肾上腺素造成的小鼠耳郭微循环障碍具有明显的改善作用，可明显增加微循环障碍小鼠血流速度，扩大微循环细小血管管径，改善毛细血管开放数量[13]。

总之，二根龙蛭汤能改善脑缺血再灌注损伤模型大鼠学习记忆功能，这一作用可能是通过提高脑组织内VEGF含量，从而改善脑组织微循环来实现的。

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