黄柏胶囊与抗生素的体外联合抗菌作用研究

江 滟，易 旭

(贵阳医学院，贵州 贵阳550004)

黄柏为芸香科落叶乔木植物黄檗(关黄柏)和黄皮树(川黄柏)的干燥树皮。黄柏树皮含小檗碱、药根碱、木兰花碱、黄柏碱、N－甲基大麦芽碱、巴马汀、蝙蝠葛碱等多种生物碱，另含黄柏酮、黄柏内脂、白鲜交酯、黄柏酮酸等成分。黄柏胶囊内容物为黄色粉末，主要用于清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮等［1］。现代药理试验已经证实，黄柏对多种病原性细菌具有不同程度的抑制或杀灭作用［1－2］，但未见关于黄柏与抗生素联合抗菌的相关报道。

1 材料与方法

1.1 黄柏胶囊 每粒0.5 g，相当于原药材1 g，由贵阳新天药业股份有限公司提供，批号111002。

1.2 菌种 金黄色葡萄球菌(ATCC26112－5)、大肠埃希菌(ATCC25922)、白假丝酵母菌(ATCC10231)，中国药品生物制品检定所提供，贵阳医学院微生物教研室保存;铜绿假单胞菌(临床分离菌株)、肺炎克雷伯菌(临床分离菌株)、新生隐球菌(临床分离菌株)，由贵阳医学院微生物教研室鉴定、保存。

1.3 培养基 水解酪蛋白液体培养基(M－H液体培养基)，杭州天和微生物试剂有限公司，按2.5 g/100 mL配制，121℃20 min灭菌，贮于4℃备用;YPG培养基，按蛋白胨1%，酵母浸出物0.5%，葡萄糖2%配制，115℃ 10 min灭菌，贮于4℃备用。

1.4 抗菌药物 注射用头孢曲松钠，中诺药业有限公司，批号110345015;硫酸阿米卡星注射液，苏州第六制药厂，批号090903;盐酸林可霉素注射液，苏州第六制药厂，批号090103;氟康唑氯化钠注射液，江西东亚制药有限公司，批号2010110613。

1.5 方法

1.5.1 最低抑菌浓度(MIC)试验［3］用无菌双蒸水将黄柏胶囊内容物和各抗生素分别稀释成系列浓度，用M－H液体基分别将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌的24 h培养物稀释成(0.5～1)×105个/mL，用YPG培养基分别将白假丝酵母菌和新生隐球菌的48 h培养物稀释成(0.5～1)×105个/mL。在96孔板中，每孔分别加入90 μL菌液和10 μL不同稀释度的黄柏胶囊内容物溶液或抗生素溶液，同时设置不含药物的各菌阴性对照和不含菌不含药的空白对照。置孔板于恒温孵育箱内，37℃培养，24 h后观察抗细菌作用结果，48 h后观察抗真菌作用结果。观察培养基中细菌或真菌的生长情况，以完全无菌生长的提取物最高稀释度作为该药的MIC。

1.5.2 分级抑菌浓度(FIC)指数测定［3－4］在96孔板中每孔加入80 μL菌液和10 μL不同稀释度的黄柏胶囊内容物溶液以及10μL一种不同稀释度的抗生素溶液，用棋盘格法测得黄柏胶囊与4种抗菌药联合用药的MIC，从而计算出FIC指数。黄柏胶囊与抗菌药物配伍的作用效果通过FIC指数为判定依据。FIC指数=甲药联合时MIC/甲药单用时MIC+乙药联合时MIC/乙药单用时MIC。判断标准:FIC指数≤0.5为协同作用;FIC指数＞0.5～1为相加作用;FIC指数＞1～2为无关作用;FIC指数＞2为拮抗作用［5］。

2 结 果

2.1 黄柏胶囊的MIC实验结果 黄柏胶囊对金黄色葡萄球菌(MIC=2.5 g/L)、大肠埃希菌(MIC=12.5 g/L)以及单细胞真菌(白假丝酵母菌、新生隐球菌)(MIC=2.5 g/L)具有较好的抑制作用。而对于铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌，100 g/L黄柏胶囊无抑菌作用(MIC均＞100 g/L)。

2.2 黄柏胶囊与抗菌药物联合抗菌作用 黄柏胶囊与林可霉素联合用药后对大肠埃希菌和铜绿假单胞菌及与头孢曲松联合用药对肺炎克雷伯菌的抗菌作用，与阿米卡星联合用药的抗菌作用表现为拮抗作用外，黄柏胶囊分别与头孢曲松、阿米卡星、林可霉素联合用药后对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌联合用药的抗菌作用均表现为协同作用(FIC=0.1～0.506)。黄柏胶囊与氟康唑联合用药后对白假丝酵母菌和新生隐球菌均表现为协同作用(FIC=0.314)，见表1。

3 讨 论

随着抗菌药物的广泛应用，细菌的耐药性也日益增加，造成了临床治疗细菌性感染的困难。中草药在现代预防和控制细菌性感染疾病方面发挥了积极作用，由于中药的特殊性，细菌较少对中药产生耐药性，因此研究和开发抗菌中药对解决耐药菌株的产生和抗生素短缺问题具有重要意义［6］。

同一中草药对不同菌，其抑菌效果存在着较大的差别，可能是药物成分对不同菌作用机制不同所致，中草药杀菌剂的研究，尤其是抗菌机制方面还处于研究阶段。本研究通过微量液体稀释法检测了黄柏胶囊对多种病原性细菌和单细胞真菌的抑菌活性，黄柏胶囊对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌以及白假丝酵母菌和新生隐球菌表现出较好的抑菌活性(MIC=2.5～12.5 g/L)，其抗菌机制有待进一步研究。

民族药黄柏是我省地产大宗药材，含小蘖碱、苦味素、甾醇衍生物、巴马亭、木兰碱、黄柏碱等有效成分，目前我省黄柏胶囊已经投入生产，主要用于清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮等［1－2］。本研究证实，黄柏胶囊不仅本身具有抑菌活性，当其与抗生素联合应用时大多数情况下表现为协同作用，此结果为黄柏扩大临床应用提供了实验依据。中药成分联合抗生素使用，能减少抗生素用量、提高疗效，从而降低不良反应，甚至能够逆转细菌对某些抗生素的耐药性，这对于新型抗菌剂尤其是抗耐药菌药物的开发是一个有效的途径［7］，可望成为抗细菌感染治疗的一个新突破。

表1 黄柏胶囊与抗菌药物联合对常见病原菌的FIC指数

［1］李峰，贾彦竹.黄柏的临床药理作用［J］.中医药临床杂志，2004，16(2):191

［2］吕燕宁，邱全瑛.黄柏抑菌效果的实验研究［J］.现代医药卫生，2005，21(20):2746 －2747

［3］李仪奎，金若敏，王钦茂，等.中药药理实验方法学［M］.2版.上海:上海科学技术出版社，2006:755

［4］李明远.微生物学与免疫学［M］.北京:高等教育出版社，2010:401

［5］Arikan S，Lozano-Chiu M，Paetznick V，et al.In vitro synergy of caspofungin and amphotericin B against Aspergillus and Fusarium spp［J］.Antimicrob Agents Chemother，2002，46(1):245 － 247

［6］曾春兰，钟振国.中药抗菌作用的研究进展［J］.广西中医学院学报，2006，5(1):51

［7］刘华钢，申庆荣，刘丽敏.中药抗菌研究进展［J］.时珍国医国药，2010，21(2):463 －465