人参皂苷Rg3对表达多耐药基因的晚期胃癌患者生存期的影响

王沛+陈国荣

doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2014.15.5

摘 要 目的：观察人参皂苷Rg3对表达胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶π（Glutathione-s-transferase π，GST-π）、P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gP）、拓扑异构酶Ⅱ（Topoisomerase Ⅱ，Topo-Ⅱ）等多耐药基因的晚期胃癌患者生存期的影响。方法：利用免疫组织化学技术检测晚期胃癌组织中GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ蛋白的表达情况，选取48例初治胃癌组织中≥2个耐药基因蛋白表达阳性患者纳入试验，随机分为治疗组（25人）和对照组（23人），治疗组给予人参皂苷Rg3+奥沙利铂+替吉奥方案为主的化疗，对照组给予奥沙利铂+替吉奥方案为主的化疗，比较两组间生存期的差别。结果：治疗组的中位生存时间（23.000±1.655）个月，对照组的中位生存时间（13.000±1.497）个月，两组间生存期比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：人参皂苷Rg3能较明显地延长有多耐药基因表达的晚期胃癌患者生存期，可能具有逆转晚期胃癌铂类化疗药物耐药的能力。

关键词 胃癌 人参皂苷Rg3 化疗 耐药

Effect of ginsenoside Rg3 on the survival time of advanced gastric cancer patients with expressing multiple drug resistance genes

Wang Pei1，2，Chen Guorong1

Xinxiang Medical University（Xinxiang City，Henan）4530031

The People's Hospital of Linying County，Henan 4626002

Abstract Objective：To observe the effect of ginsenoside Rg3 on the lifetime of advanced gastric cancer patients with expressing multiple drug resistance genes，such as placenta type of glutathione-s-transferaseπ（GST-π），P-glycoprotein（P-gP），topoisomerase Ⅱ（Topo-Ⅱ） and so on.Methods：The expression of GST-π，P-gP，Topo-Ⅱ protein in the advanced gastric cancer tissue were detected by immunohistochemistry.48 cases with 2 or more than 2 expressing positive resistance gene proteins in the early gastric cancer tissue were selected.They were randomly divided into the treatment group（25 cases） and the control group（23 cases）.The treatment group were treated with ginsenoside Rg3，oxaliplatin and gimeraciland oteracil porassium chemotherapy.The control group were treated with oxaliplatin and gimeraciland oteracil porassium chemotherapy.The difference of the survival time between the two groups was compared.Results：The median survival time of the treatment group was 23.000±1.655 months.The median survival time of the control group was 13.000±1.497 months. The difference of the survival time between the two groups was statistically significant（P<0.01）.Conclusion：Ginsenoside Rg3 can significantly prolong the survival time of advanced gastric cancer patients with expressing multiple drug resistance genes，and maybe reverse platinum chemotherapy drug resistance of advanced gastric cancer.

Key words Gastric cancer；Ginsenoside Rg3；Chemotherapy；Drug resistance

目前胃癌的化疗方案虽然在不断完善，但由于肿瘤对药物的敏感性不同，在不同患者中的相同肿瘤对抗癌药物的敏感性也不相同，甚至同一患者的不同阶段对药物的敏感性也存在差异，所以在术后的辅助治疗中，化疗的疗效不佳。其中化疗失败的根本原因是多药耐药（Multidrug resistance，MDR）。MDR是指肿瘤细胞不仅对一种抗肿瘤药物产生耐药，而且对不同的作用机制和化学结构，甚至未在化疗中使用的其他抗肿瘤药物产生交叉、广谱耐药的现象[1～3]。奥沙利铂（Oxaliplatin）是继顺铂、卡铂之后的第3代铂类抗癌药，已逐渐作为治疗中晚期胃癌的主要药物，但一些患者对奥沙利铂产生耐药，严重影响了化疗效果，即出现多药耐药（MDR）现象。目前有关铂类药物耐药机制的研究，主要包括DNA修复能力增强、药物解毒增加、肿瘤细胞减少药物摄取积聚、机体对铂类-DNA络合物的耐受性提高等，涉及多种基因、蛋白和信号转导通路。研究发现：GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ等蛋白和多种实体瘤的MDR密切相关[4～6]。人参皂苷Rg3应用于胃癌的联合化疗，有抑制肿瘤新生血管形成、增强患者免疫力、抗肿瘤转移、提高化疗疗效、延长生存期及疾病进展时间的作用。同时，在体外发现人参皂苷可逆转肿瘤细胞的MDR，增强肿瘤对化疗药物的敏感性[7，8]。本研究采用免疫组织化学法检测胃癌组织中GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ的表达，选取3个或2个蛋白表达阳性的病例纳入试验。在奥沙利铂+替吉奥化疗基础上加用人参皂苷Rg3，旨在探讨人参皂苷Rg3对表达GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ的晚期胃癌患者的临床治疗效果，判断人参皂苷Rg3是否可逆转晚期胃癌多药耐药，从而为晚期胃癌的临床化疗方案的选择提供客观的参考数据。

资料与方法

2009年2月-2014年2月收治胃癌患者48例，经过病理组织学（胃镜、手术后病检）确诊，且通过免疫组织化学检测胃癌组织中GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ 2个或3个蛋白表达阳性。基本资料：男30例（62.5%），女18例（37.5%）；年龄39～75岁，中位年龄58岁，平均55.9岁；病理分类：低分化腺癌14例，中分化腺癌10例，高分化腺癌8例，印戒细胞癌11例，鳞癌3例，类癌1例，未分化癌1例；ECOG状态评分0～1分39例（81.3%），2分9例（18.7%）。其中根治术后复发转移患者11例，有转移行姑息性胃癌切除术患者22例，确诊时已转移无法手术患者15例。入组患者均为Ⅲ～Ⅳ期的晚期胃癌患者，随机数字表法分组，其中治疗组25例，接受人参皂苷Rg3+替吉奥+奥沙利铂的方案治疗，对照组23例，接受替吉奥+奥沙利铂的方案治疗。

胃癌组织免疫组织化学检测胃癌组织中GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ的表达：依据说明书步骤进行操作，常规免疫组织化学，其中免疫组织化学中所用一抗为：GST-π一抗产品编号：MAB-0583；P-gP一抗产品编号：MAB-0237；TOPOⅡ一抗产品编号：MAB-0588；0.2mg/ml抗体，1∶100稀释，二抗为生物素化兔抗大鼠IgG抗体。切片通过光学显微镜下观察，通过CMIS-2020病理图文系统拍照。在100倍镜下视野中，随机选取10个视野，计数每个视野中细胞的染色情况，取平均值。出现粗细一致的棕黄（褐）色颗粒为阳性染色。阳性细胞数<10%定为阴性；阳性细胞数≥10%定为阳性。

纳入标准：①经病理组织学确诊为胃癌。②在化学疗法前后，均进行肿瘤标志物（CEA、CA199）检查。③进行TNM分期，患者为Ⅲ～Ⅳ期胃癌。④预计生存期≥3个月。⑤临床资料完整。⑥入组患者均有CT或MRI可测量的客观病灶，ECOG评分均≥2分，心脏功能、血常规及肝肾功能基本正常，具备进行化疗治疗的条件，且自愿接受人参皂苷Rg3治疗。

排除标准：①上消化道生理功能缺陷或者不能口服药物者，消化道活动性出血者。②器官移植者。③无自控力及有症状的脑转移患者。④妊娠或哺乳期妇女。

治疗方案：①治疗组：参一胶囊（主要成分为人参皂苷Rg3，国药准字Z20030044）20mg，2次/日，第1～21天连续服用。奥沙利铂130mg/m2（根据患者不同的体表面积确定剂量）+5%葡萄糖注射液500ml静滴，第1天静滴2小时，并给予维生素B1、甲钴胺等口服药物，治疗及预防奥沙利铂的神经学毒性。替吉奥80mg/m2口服，2次/日，早晚餐后0.5小时服用，第1～14天连续服用，21天1个周期。②对照组：不用人参皂苷Rg3治疗，其他的治疗均同治疗组。在两组化疗前，常规给予5-羟色胺受体阻断剂进行止吐治疗，同时给予保肝及保护胃黏膜等治疗，化疗前后定期对血常规、肝肾功能进行复查，然后根据血常规的结果，给予重组人粒细胞集落刺激因子、白介素-11等支持治疗。

随访：患者出院后前半年内3个月随访1次，后半年6个月随访1次，以后每年随访1次，随访形式包括门诊复查和电话随访。随访的终点是患者死亡，随访截止日期为2014年02月28日。

统计学方法：采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，计量资料采用x±s表示，组间差异采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）分析，生存率比较采用Log-Rank法，采用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线。P<0.05为差异具有统计学意义。

结 果

胃癌组织中GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ的表达情况：GST-π定位于细胞质；P-gP定位于细胞膜和细胞质；Topo-Ⅱ定位于细胞核。GST-n、P-gP、Topo-Ⅱ在胃癌组织中的表达阳性率依次为75.8%（72/95）、61.1%（58/95）、76.8%（73/95）。

治疗组与对照组生存期比较：以5年观察期为限，最终死亡人数45例。治疗组的平均生存时间（23.908±2.297）个月，95%CI分别19.407～28.409个月；对照组的平均生存时间（14.739±2.173）个月，95%CI分别10.480～18.999个月。治疗组的中位生存时间（23.000±1.655）个月，对照组的中位生存时间（13.000±1.497）个月。上述两组数据差异有统计学意义（P<0.01）。即用人参皂苷Rg3可延长晚期胃癌48例患者的总生存期。

讨 论

多项研究提示，GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ参与多基因耐药，其中GST-π参与铂类的灭活，提高细胞对铂类的解毒能力，引起铂类耐药。P-gP高表达伴随肿瘤患者预后不良，如低缓解率、高复发率、化疗疗效差、生存期短。Topo-Ⅱ使肿瘤细胞不因DNA断裂而死亡，从而产生耐药。这与上述铂类耐药机制相吻合[1，3]。通过本研究发现，GST-π、P-gP、Topo-Ⅱ在晚期胃癌组织中的表达约占60%～70%，与其他试验所报道（60%～80%）的大致相同[9]。

本研究所应用的化疗药物奥沙利铂+替吉奥是比较经典的铂类加氟类方案，在日本晚期胃癌的治疗方案主要是替吉奥单药或替吉奥与其他药物相联合。本方案经本研究也证实有良好的耐受性，无预期外严重不良反应，是治疗晚期胃癌较为有效的一线治疗方案[10]。

有关人参皂苷Rg3逆转肿瘤多药耐药的机制可能有以下四方面。①人参皂苷Rg3可抑制肿瘤细胞膜上膜糖蛋白介导的药物外排，增加细胞内化疗药物浓度，逆转多药耐药；②人参皂苷Rg3可作用于肿瘤细胞谷胱甘肽/谷胱甘肽-s转移酶系统，增加肿瘤细胞内自由基的生成，使自由基超载，导致肿瘤细胞死亡；③人参皂苷Rg3可促进肿瘤细胞凋亡基因caspase3表达，降低细胞膜的流动性，达到逆转肿瘤细胞耐药的作用；④人参皂苷Rg3也可通过抑制血管内皮细胞生长因子的表达，抑制MAPK活性，延缓肿瘤耐药等[11，12]。

本研究观察了人参皂苷Rg3对有多耐药基因的晚期胃癌患者生存期的影响，治疗组的中位生存时间（23.000±1.655）个月，对照组的中位生存时间（13.000±1.497）个月，两组间生存期比较差异有统计学差意义（P<0.01）。说明人参皂苷Rg3能较明显地延长有多耐药基因表达的晚期胃癌患者生存期，提示人参皂苷Rg3有可能具有逆转晚期胃癌对奥沙利铂和替吉奥的耐药，从而为临床选用逆转肿瘤耐药药物提供试验支持。

本研究由于条件限制，时间有限，入组病例数偏少，一定程度上可能影响试验数据的统计，需进行较大规模的临床试验，进一步确定人参皂苷Rg3是否具有延长有多耐药基因表达的晚期胃癌患者生存期的作用。

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