CD24在喉癌中的表达及其临床意义

庄黎明

(福建医科大学附属泉州第一医院耳鼻咽喉外科，福建 泉州 362000)

喉癌是高侵袭性的恶性肿瘤，其发生、发展是一个多基因、多阶段的演进过程。CD24是一种低分子量高度糖基化的黏附分子,主要表达在造血系统。研究表明，CD24可能参与肿瘤侵袭和转移。本研究探讨可能影响喉癌预后的独立因素以及CD24在喉癌发生、发展中的作用及临床意义。

1 资料与方法

1.1临床病例资料 选取福建医科大学附属泉州第一医院1998年至2005年间行喉鳞状细胞癌根治术且随访资料完整的68例病例，年龄28～75岁，术前均未进行放、化疗及免疫治疗，且术后均在本院根据NCCN指南进行放疗。其生存期从手术之日起开始计算，终止日期为死亡期或末次随访日期，截止日期为2008年6月30日。随访期限从13～115个月不等，平均随访日期为60.63个月。其中局部复发8例，远处转移9例，死亡45例。所有患者的手术标本经10％甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，分别做HE染色及免疫组化染色。所有病例均由两位病理医师确诊。68例喉癌组织中，按发生部位分型：声门上型21例，声门型28例，声门下型19例；组织学分级：Ⅰ级23例，Ⅱ级22例，Ⅲ级23例。68例喉癌中32例有淋巴转移。根据国际抗癌协会TNM分期方案分为：Ⅰ期25例，Ⅱ期20例，Ⅲ期23例。另外随机取远离肿瘤(>1 cm)的肿瘤旁正常组织(镜下无癌)20例作对照组。

1.2实验试剂 鼠抗人CD24单克隆抗体(克隆号SN3b)，Elivision试剂盒，胃蛋白酶，H2O2，内源性生物素阻断试剂盒购自福州迈新生物技术公司。

1.3实验过程 采用免疫组化Elivision法染色，严格按试剂盒说明方法操作。鼠抗人CD24单克隆抗体(克隆号SN3b)，Elivision试剂盒，胃蛋白酶，H2O2，内源性生物素阻断试剂盒购自福州迈新生物技术公司。石蜡切片脱蜡水化，采用高压锅法抗原修复，3％ H2O2孵育，生物素阻断剂阻断。加入一抗CD24单克隆抗体,工作浓度为1∶100,二抗孵育,DBA显色,脱水,透明,封片。用已知的扁桃腺切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.4结果判定 由两位病理医师独立观察，随机采集10个具有代表性的视野进行计数，取平均数值。CD24阳性染色判断标准:胞质或胞膜有棕黄色颗粒沉着者为阳性染色。依阳性细胞百分率判定阳性强度。阳性细胞数≤10％为“+”,10％～50％为“”,≥50％为“”。

1.5统计学方法 运用SPSS17.0软件进行χ2检验；生存分析采用Kaplan-Meier法分析，不同生存曲线的差异性检验用对数秩检验(Log-rank Test)；运用多因素COX模型法来综合评价和权衡各因素对预后生存的影响。

2 结 果

2.1CD24在喉癌组织和癌旁组织中的表达 喉癌组织CD24明显表达，阳性定位于细胞膜上部分细胞细胞质亦染色(图1)，其他位置未见染色；CD24在喉癌癌旁正常组织中不表达。超过72％的喉癌细胞有不同程度CD24表达，41％的肿瘤呈中等程度表达，30.8％的肿瘤呈强阳性表达。

图1 CD24在喉癌组织中的阳性表达(Elivision染色，×400)

2.2CD24与喉癌病理参数的关系 高TNM分期、有淋巴结转移的癌组织中CD24表达明显高于对应组(P<0.05)，而与患者的年龄、性别、肿瘤分型、组织学分级无关。见表1。

2.3喉癌组织中CD24蛋白表达与患者生存时间的关系 不同CD24表达组之间的生存率差异显著(χ2=18.164，P=0.000)，CD24表达强阳性喉癌患者生存率明显低于CD24表达强度较低组。见表2。

2.4COX比例风险模型分析 对可能影响喉癌预后的6个因素：CD24、患者的年龄、肿瘤分型、组织学分级、淋巴结转移、临床分期，进行多因素COX模型分析，结果显示，CD24、临床分期是影响喉癌预后的独立因素(P<0.05)。见表3。

表1 CD24与喉癌病理参数的关系(n)

表2 CD24表达与喉癌总生存率的关系

表3 68例喉癌患者临床病理特征多因素COX回归分析

3 讨 论

CD24蛋白是在上世纪70年代末被发现的，CD24是小鼠“热稳定抗原(heat-stable antigen，HSA) ”在人类的同源分子，功能基因定为于常染色体6q21区带，在常染色体1p36、15q212q22和性染色体Yq11存在不含内含子的CD24假基因。CD24在生理条件下,能支持单核或中性粒细胞的黏附,从而激活血小板或内皮细胞的活性。

在生理条件下，CD24表达于脑和胰腺的发育以及肌肉、表皮、肾小管的再生过程中。而恶性肿瘤中，CD24在小细胞和非小细胞肺癌〔1〕、卵巢上皮癌〔2，3〕、乳腺癌〔2〕、前列腺癌〔4〕、胆管细胞癌〔5〕、胰腺癌〔6〕、子宫颈鳞状上皮癌〔7〕、膀胱癌〔2，8〕、肾癌〔9〕中表达增高，是乳腺癌、卵巢上皮癌、非小细胞性肺癌、胆管细胞癌的独立预后指标。上调CD24蛋白的表达可能提高乳腺癌细胞〔10〕的侵袭、转移潜力,与多种肿瘤的侵袭转移有关。最近研究〔11,12〕表明CD24基因是乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌肿瘤干细胞的表明标志,参与肿瘤的发生发展。但对于CD24在喉癌中的作用研究尚少。

本研究提示,在喉癌的发生发展过程中,CD24 可能起重要作用。CD24 蛋白可能在喉癌的恶性进展、侵袭转移中起重要作用，可能是影响喉癌预后的独立因素，故CD24 可能成为反映喉癌的恶性程度指标和预后指标。

Overdevest等〔8〕发现表达CD24是膀胱癌小鼠模型发生肺转移的必要条件，通过抗CD24单抗可抑制肿瘤的生长并延长生存期，在体外，Su等〔3〕发现通过ShRNA技术敲除CD24可观察到通过促进血管生成、细胞增殖和减少凋亡明显抑制卵巢癌细胞的生长,而在宫颈癌中Sung等〔7〕发现甚至在术后辅助放疗患者中都发现CD24高表达者预后差,故可通过抗CD24抗体抑制CD24的表达从而抑制肿瘤的生长。所以对CD24 的研究将不仅有助于人们更好地了解肿瘤发生发展的分子机制，还能促进新的抗癌药物和治疗方法的开发和出现。

4 参考文献

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