舒胸舌下片制备与促透剂的配方

盛芳芳 林 於 刘 新

(重庆医科大学，重庆 400016)

中国药典2010年版收载的舒胸片临床主要用于冠心病、心绞痛、心律失常的治疗。传统的舒胸片为口服固体制剂，若改为舌下黏膜给药，可具有使用方便、无胃肠及肝脏首过效应、吸收起效快、生物利用度高等优点。舌下给药也是小剂量药物注射给药的理想替代给药途径之一〔1〕，已广泛应用于临床〔2〕。本试验旨在优选舒胸舌下片制备成型工艺中的辅料组成和舌下黏膜给药促透剂的组成。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 YPJ-200A型片剂硬度仪(成都一科仪器设备有限公司)；FT2000A型脆碎度仪(北京同德创业科技有限公司)；TDP-5小型压片机(长沙市常宏制药机械设备厂)；C-20A型高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)；RYJ-6A型药物透皮扩散试验仪(上海黄海药检仪器厂)。

三七、红花、川芎均购自重庆市解放碑药材市场，经本校林於教授鉴定三七为五加科三七〔Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen〕干燥根及根茎，红花为菊科植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花，川芎为伞形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根茎。人参皂苷Rg1对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110703-2010027，含量以96.3%计。交联聚维酮(PVPP)、可溶性淀粉、甘露醇、微晶纤维素均为分析纯(成都市科龙化工试剂厂)；乳糖(北京奥博星生物技术有限责任公司)；月桂氮卓酮、薄荷醇(中国医药集团化学试剂有限公司)；油酸(苏州工业园正兴化工研究院)；人工唾液(按 ISO/TR10271标准自制)〔3〕；猪舌下黏膜自制备；甲醇为色谱纯，95%乙醇为分析纯。

1.2方法

1.2.1辅料的优选

1.2.1.1单因素试验 按文献方法〔4〕制备三七、红花、川芎药材提取物干膏，称取干膏加不同比例的辅料(见表1)，过80目筛，混匀，用95%乙醇制软材，过20目筛制粒，置50℃减压干燥30 min，40目整粒，压片，即得。可以得到乳糖和甘露醇比例、用量，微晶纤维素的用量对片剂的制备有很大的影响。

1.2.1.2正交试验 以乳糖和甘露醇比例(A)、用量(B)、微晶纤维素的量(C)作为主要影响因素，各取3个水平，以硬度、外观、脆碎度为指标进行综合评价〔5〕，见表2。

1.2.2人参皂苷Rg1的HPLC测定 舒胸片中人参皂苷Rg1性质稳定、含量较高，中国药典2010年版以其为指标控制舒胸片含量。因此，选其累积透膜量为指标间接考察不同的促透剂对舒胸舌下片的促透作用。

表1 不同辅料类型及用量性状表

1.2.2.1溶液制备 供试品溶液：取片剂适量，研细，精密称定3 g(相当于10片片重)，加甲醇分两次超声提取(15 ml×2，每次5 min)，滤过，合并滤液，水浴蒸干，残渣用甲醇转移并定容至10 ml，再精密吸取5 ml置10 ml量瓶中，甲醇定容，0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。对照品溶液：精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，甲醇溶解并制成为1.8 mg/ml的溶液。阴性样品溶液：称取不含三七药材的片剂适量，参照供试品溶液制备方法制备。

表2 正交试验因素水平

1.2.2.2色谱条件 色谱柱：岛津SPD-20A C18 (4.0 mm×200 mm，5 μm)柱，柱温25 ℃；流动相(A：乙腈，B：水)0～12 min A 19%，12～60 min A 12%～60%；流速为1.0 ml/min ；检测波长为203 nm；进样量20 μl。

1.2.2.3系统适应性实验 分别精密吸取对照品、供试品和阴性样品溶液各20 μl，按药典色谱条件测定。

1.2.2.4标准曲线 精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5 ml，移至 5 ml容量瓶中，甲醇定容。按药典色谱条件分别进样测定。

1.2.2.5加样回收率试验 取片剂粉末3 g，分别加入2、2、4、4、8、8 mg对照品，按1.2.2.1供试品溶液制备方法处理。按药典色谱条件分别进样测定，计算加样回收率加样回收率。

1.2.3体外透黏膜实验

1.2.3.1溶液配制 含药促透剂溶液：称取药材干膏3 g置50 ml量瓶中，共6份，分别精密加入月桂氮卓酮、油酸或薄荷醇1、2、2.5、3、4、5 ml，用人工唾液溶解并定容，得含促透剂2%、4%、5%、6%、8%和10%的药物溶液。空白对照溶液：分别精密加入月桂氮卓酮、油酸或薄荷醇1、2、2.5、3、4、5 ml，用人工唾液溶解并定容，得不含促透剂的对照溶液。供试黏膜：选取新鲜猪舌下黏膜，置液氮中保存备用。

1.2.3.2试验操作 将清洗后的舌下黏膜上表皮朝上固定在扩散池上。供给池中加入1.5 ml的供试液，扩散池中加入生理盐水，控制温度(37±0.5)℃，搅拌速度360 r/min〔6〕，分别在1、2、3、4、5、6、7、8 h取样0.5 ml，立刻补充等温等体积的生理盐水。样品用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，高效液相色谱(HPLC)测定人参皂苷Rg1含量。

1.2.3.3单因素试验 分别考察氮酮、薄荷醇、油酸对人参皂苷Rg1的促透规律，找出适合舒胸舌下片的复合促透剂〔7〕。按照1.2.2.2操作，分别对空白组、氮酮组、油酸组、薄荷醇组进行透黏膜实验，每组重复6次取平均值。

1.2.3.4星点设计-效应面法优选促透剂 在单因素实验基础上,按照表6研究三种不同的促透剂之间的最佳比例。采用Design Expert8.0软件对实验数据拟合方程。

采用体外透膜实验，以人参皂苷Rg1为透膜指标，最佳促透剂配方为：2%氮酮、2%油酸和5%的薄荷醇。

2 结 果

2.1正文实验结果 由方差分析得出，A、B、C对综合评分都有显著影响，由直观分析得到最佳制备工艺是A1B2C3 ，即药物干膏:〔乳糖:甘露醇(1∶9)〕:微晶纤维素为 6∶8∶0.5。见表3，表4。

2.2系统适应性实验结果 在该色谱条件下，阴性无干扰，分离良好。人参皂苷Rg1的HPLC，见图1。以人参皂苷Rg1浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。得方程Y=1 598X-344.28，r2=0.998，表明理论上在3.78～20.64 μg/ml浓度范围内人参皂苷Rg1浓度与其对应的峰面积呈良好的线性关系。精密度试验峰面积(RSD)为1.13%，表明仪器精密度良好。稳定性试验RSD为0.89%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。重复性试验，样品含量的RSD为1.53%，说明该方法重复性良好。

2.3体外透膜实验结果 氮酮组、油酸组、薄荷醇组8 h累积透膜量和空白组(0.47±0.24)比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。见表5。采用多重比较最小显著差法(LSD)法进一步进行两两比较，任何两种浓度间比较差异均有统计学意义。对于氮酮而言， 2%、4%、6%的浓度时,随着浓度增加,累积透膜量依次增加,氮酮为6%浓度时累积透膜量最大，当浓度>6%时,累积透膜量有所降低。考虑到成本等综合因素,选取2%～6%浓度的氮酮作为实验考查范围；同理分析油酸和薄荷醇累积透黏膜数据得油酸和薄荷醇组均选取2%、4%、6%的浓度。因此,氮酮、油酸、薄荷醇有效浓度区间均为2%～6%。见表6、表7，图2～图7。

表3 正交实验设计和结果

(OD)= 0.33×W1/Wmax1+0.33×W2/Wmax2+0.33×W3/Wmax3；A、B、C、D同表2

表4 综合方差分析表

F0.05(2，2)=19.00，F0.01(2，2)=99.00；A、B、C、D同表2

人参皂苷Rg1对照品

人参皂苷Rg1供试品

人参皂苷Rg1阴性

图1人参皂苷Rg1的HPLC图谱

2.4累积透膜量(Q) 拟合方程为累积透黏膜量Q=0.389 86-0.077 602×A+0.125 25×B+0.148 92×C+8.892 89E-0.03×A×B+6.889 78E-0.03×A×C-0.038 394×B×C。A为氮酮，B为油酸，C为薄荷醇。

表5 人参皂苷Rg1累积透黏膜量±s,mg/ml)

表6 各因素各水平的代码值及实际数值

表7 实验设计及各效应值数据

图2 氮酮A、油酸B曲面图

图3 氮酮A、油酸B等高

图4 氮酮A、薄荷醇C曲面图

图5 氮酮A、薄荷醇C等高

图6 油酸B、薄荷醇C曲面图

图7 油酸B、薄荷醇C等高图

3 讨 论

由于药典中舌下片要求辅料为可溶性，因此本实验尝试用不同的吸湿性小的可溶性辅料改善其吸湿性，选用了常用的辅料如可溶性淀粉、乳糖、甘露醇等。可溶性淀粉对舒胸舌下片吸湿性具有较好的改善作用，但是对于舌下片而言口感较差；乳糖、甘露醇口感较好，但是单独使用黏性较强，制粒困难，本实验通过调整乳糖甘露醇比例，发现当乳糖和甘露醇的比例为1∶9时可以达到很好地减轻颗粒黏性的作用。

传统口服型舒胸片制备是用三七粉末直接吸收其他药材浸膏制粒压片。本舌下片为全浸膏片，有利于其中的活性成分在口腔中迅速释放；体外舌黏膜透皮实验显示，本品中已知的主要活性成分人参皂苷Rg1在复合促透黏膜剂为2%氮酮、2%油酸和5%的薄荷醇复合促透剂下有较好和较快的透过性。

本实验以人参皂苷Rg1为考察对象，舌下片最佳制备工艺为:按干药材提取物-〔乳糖-甘露醇(1∶9)〕-微晶纤维素=6∶8∶0.5比例称取辅料,过80目筛，混匀，分别加2%氮酮、2%油酸和5%的薄荷醇,用95%乙醇制软材，过20目筛制粒，置50 ℃减压干燥30 min，40目整粒，压片，即得。

4 参考文献

1金 一，大熊英树，汪成发，等.尼可地尔口腔速溶片的研究〔J〕.药学学报，2011;36(7):535-8.

2Zhang H,Zhang J,Streisand JB.Oral mucosal drug delivery clinical pharmacokinetics and the rapeutic application〔J〕.Clin Pharmacokinet,2002;41(9):661-80.

3张 洁，胡 欣，梁春永，等．树脂牙与天然牙釉质摩擦磨损性能的研究[J]．中华老年口腔医学杂志，2009;7(5):295-8．

4盛芳芳,刘 新，林 於,等.舒胸片中川芎和红花提取工艺优化〔J〕.光谱实验室,2013;30(5):2379-84.

5王 钤,尹文喆.正交试验选择丹参片基片制备工艺研究〔A〕// 2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集〔C〕.天津,2010:72-4.

6傅旭春,潘晓娇.药物在口腔黏膜中的渗透性研究〔J〕.浙江大学学报(医学版),2009;38(2) :181-5.

7周 敏,顾 宜,张三奇，等.氮酮对人参皂苷Rg1和米诺地尔透皮吸收的影响〔J〕.第四军医大学学报,2004;25(10):958-60.