天南星多糖对荷瘤小鼠的抗肿瘤活性

姜 爽 李建睿 苑广信 李洪宇 杜培革

(长春中医药大学基础医学院，吉林 长春 130117)

近年来应用天南星配伍治疗肝癌、肺癌、宫颈癌等疾病引起广泛关注〔1, 2〕。多糖为天南星的主要功效成分之一〔3〕，而植物多糖的抗肿瘤及对免疫功能的调节作用已经明确〔4, 5〕。本研究建立S180荷瘤小鼠模型，探讨天南星多糖的体内抑瘤作用及对荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-2含量的影响，以期对天南星多糖防治肿瘤有更深入的认识，为其应用于肿瘤治疗提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1仪器 酶标仪(美国，Bio-Tek，Elx800)，洁净工作台(苏州安泰空气技术有限公司， SW-CJ-1F)，低温超高速离心机(德国，Eppendorf，5417R)，二氧化碳培养箱(美国，Thermo，3110)，超低温冰箱(日本，三洋，MDF-380型)。

1.2药品与试剂 天南星药材购自本地药材市场，经北华大学药学院生药教研室鉴定为天南星科、天南星属植物；注射用环磷酰胺(CTX)购自江苏恒瑞医药股份有限公司，批号: 1105092；RP-MI1640 培养基及小牛血清购自美国Gibco公司；小鼠TNF-α和IL-2检测试剂盒购自南京建成生物技术有限公司。

1.3动物及瘤株 健康清洁级昆明种小鼠，体质量(20±2)g，雌雄各半，由吉林大学实验动物中心提供。小鼠肉瘤 S180购于协和细胞库，并定期腹腔接种传代保种。

1.4方法

1.4.1天南星多糖的提取 天南星根茎清洗后，在80℃条件下烘干，然后粉碎过40目筛，用40倍蒸馏水溶解。沸水浴煮沸3 h，过滤后，3 000 r/min，离心20 min；上清液于90℃水浴浓缩至原体积的1/4；加入3倍体积预冷的无水乙醇，放置过夜，离心后得沉淀。用适当蒸馏水溶解沉淀，用滤纸过滤除去蛋白质等杂物；再加入无水乙醇进行二次沉淀，沉淀物自然风干，得天南星多糖。

1.4.2动物模型的建立、分组及给药 生理盐水稀释传代7 d的瘤株小鼠的腹水，至细胞浓度为2×106个/ml，每只小鼠右前肢腋下接种0.2 ml。接种后的小鼠随机分成五组，每组10只。一组为阳性药物组(CTX组)，腹腔注射给药，剂量为0.02 g·kg-1·d-1；其余三组分别灌胃给予2 g·kg-1·d-1、1 g·kg-1·d-1和0.5 g·kg-1·d-1的天南星多糖；模型组灌胃给予等体积的生理盐水，连续给药30 d。

1.4.3天南星多糖抑瘤作用的评价 每日观察小鼠精神状况、生存状况并称量体重。给药结束后处死小鼠，剪开小鼠右腋皮下组织，剥离肿瘤，称重，并计算抑瘤率。抑瘤率(%)= (模型组瘤重-实验组瘤重) /模型组瘤重×100%

1.4.4天南星多糖对血清TNF-α和IL-2含量的影响 给药结束后眼球取血，分离血清，按照试剂盒操作指南用酶标仪检测各孔OD 450 值，通过OD 450 值计算各组TNF-α和IL-2含量。

1.5统计学分析 采用SPSS15.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1天南星多糖的提取 天南星多糖的提取率(相对于被提取的天南星干重)为7.8 %，纯度为92.4%。

2.2天南星多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用 与模型组比较，天南星多糖各剂量组小鼠体重虽有增加，但是差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较，天南星多糖高、中剂量组和 CTX 组肿瘤重量明显减轻，具有统计学意义(P<0.01)。其中天南星多糖高剂量组和 CTX 组抑瘤率均>30%。见表1。

2.3天南星多糖对血清TNF-α和IL-2含量的影响 与模型组比较，天南星多糖各剂量组、CTX 组血清 TNF-α 含量显著性增高(P<0.05或P<0.01)，且具有剂量依赖关系；同时，天南星多糖各剂量组血清 IL-2 含量也有一定程度增加，其中高、中剂量组增加明显(P<0.01)。见表 2。

表1 天南星多糖对 S180荷瘤小鼠移植瘤的作用±s，n=10)

表2 天南星多糖对血清TNF-α和IL-2含量的影响±s，n=10,pg/ml)

3 讨 论

肿瘤发病率高，难以治愈。目前临床上治疗肿瘤的药物以化学合成药和细胞因子药为主。化学合成药虽然有一定的治疗效果，但其毒副作用大；细胞因子类药物作用机制复杂，且价格昂贵，使用受到限制。而传统中药以疗效稳定、毒副作用小、价格低廉等优点，逐渐成为人们关注的热点〔6〕。在中药抗肿瘤研究中，当中药的抑瘤率超过 30%，可判断该药物具有一定的抑制肿瘤效果。本文表明，天南星对S180移植瘤有一定抑制作用，且随给药浓度增加抑瘤作用明显加强，呈剂量依赖关系。

肿瘤的发生、发展及预后与免疫功能关系密切，TNF-α和IL-2是两种比较重要的抗肿瘤免疫因子。TNF-α可以激活 T 淋巴细胞，刺激机体产生细胞因子和抗体，最终起到直接杀伤肿瘤细胞的作用。TNF-α也可以通过抑制肿瘤血管生成等方式诱导肿瘤细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞存活〔7〕。IL-2 是由T 淋巴细胞等分泌的细胞因子，在肿瘤免疫中也具有重要作用。IL-2细胞是 T 细胞生长不可缺少的细胞因子，其能通过增强细胞毒性 T 细胞对肿瘤细胞的细胞毒性和刺激单核细胞等方式起到杀伤肿瘤细胞的作用〔8〕。

综上，天南星多糖可以减少因肿瘤生长而导致的细胞因子合成抑制，从而增强机体的抗肿瘤免疫能力，这可能是其抗肿瘤作用的潜在机制之一。

4 参考文献

1杨宗辉, 尹建元, 魏征人，等. 天南星提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制的实验研究〔J〕. 中国老年学杂志, 2007;27(2):142-4.

2王关林, 蒋 丹, 方宏筠. 天南星的抑菌作用及其机理研究〔J〕. 畜牧兽医学报, 2004;35(3): 280-2.

3徐增香, 师健友. 天南星中多糖的测定〔J〕. 华西药学杂志, 2010;25(2): 208-9.

4Cao W, Li XQ, Wan X,etal. A novel polysaccharide, isolated from Angelica sinensis (Oliv.) Diels induces the apoptosis of cervical cancer HeLa cells through an intrinsic apoptotic pathway 〔J〕. Phytomedicine,2010;17(8-9):598-605.

5Furusawa E,Hirazumi A,Story S,etal.Antitumour potential of a polysaccharide-rich substance from the fruit juice of morinda citrifolia (Noni) on sarcoma 180 ascites tumour in mice 〔J〕. Phytother Res,2003;17(10):1158-64.

6刘磊磊, 陈 娟, 师彦平. 清热解毒中药抗肿瘤作用研究进展〔J〕. 中草药, 2012;43(6):1203-12.

7Kruglov AA, Kuchmiy A, Grivennikov S,etal. Physiological functions of tumor necrosis factor and the consequences of its pathologic overexpression or blockade:mouse models 〔J〕. Cytokine Growth Factor Rev, 2008;19(3-4):231-41.

8Smith AJ，Humphries SE. Cytokine and cytokine receptor gene polymorphisms and their functionality 〔J〕. Cytokine Growth Factor Rev, 2009;20(1): 43-59.