慢性心力衰竭患者白细胞介素-1β+3953基因多态性

李克研 李今朝 屈宝泽 李 宁

(辽宁医学院附属第一医院心脏内科,辽宁 锦州 121000)

研究表明炎症介质如白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子(TNF) 在动脉粥样硬化及其并发症的发生和发展中起到重要的作用，慢性心力衰竭(CHF)与炎症的关系日益受到人们的重视〔1〕。IL-1是一种重要的炎症反应调节因子，与慢性炎症的活跃性有着密切的关系〔2〕。IL-1基因簇定位于2q13，包括IL-1α、IL-1β、IL-1受体拮抗物，IL-1的基因多态性与许多炎症反应性疾病有着紧密的联系〔3，4〕。IL-1β+3953位点位于IL-1β基因第五外显子区，存在1个C到T的替换，本研究观察IL-1β +3953基因多态性与CHF发病的相关性。

1 对象与方法

1.1研究对象 锦州市中心医院和辽宁医学院附属第一医院80例CHF患者，其中男45例，女35例，年龄55～65岁，符合以下条件：①CHF诊断参照Framingham 标准，心功能NYHA 分级Ⅱ～Ⅳ级、超声心动图左室射血分数(LVEF)<45%； ②CHF病史至少≥3个月。排除标准：①严重肝、肾功能不全；②严重的急性感染或代谢紊乱；③急性心力衰竭。健康对照组经体检排除心血管疾病、严重肝肾疾病、甲状腺疾病及糖尿病。男42例，女38例。均知情同意。

1.2样本采集和DNA提取 取受试者前臂静脉血5 ml，注入装有EDTA 抗凝剂的试管中备用，应用小剂量基因组DNA提取试剂盒进行基因组DNA提取，具体步骤参照说明书。

1.3IL-1β+3953/Taq Ⅰ基因型测定 采用PCR 扩增IL-1β+3953片段，然后用限制性内切酶Ava Ⅰ酶切法鉴定其基因型。引物序列为A：5′-TTCAGTTCATATGGACCAGA-3′,B：5′-GTTGTCATCAGACTTTGACC-3′ (大连宝生物公司)。20 μl反应体系包括10×缓冲液2 μl，dNTP 1 μl (2 mmol/L)，MgCl2(25 mmol/L) 1 μl，上、下游引物各1 μl (4 μmol/L)，基因组DNA 1 μl，Taq DNA聚合酶(5 U/μl)0.2 μl，无菌去离子水补充至20 μl。循环参数为预变性94℃,5 min，94℃，30 s，52℃，50 s，72℃，1 min，共35个循环，最后延伸72℃，10 min，4℃ 保存，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测，片段大小为249 bp。

1.4限制性内切酶酶切多态性分析 根据文献〔3〕，用限制性内切酶Taq Ⅰ (大连宝生物公司提供)消化PCR产物：取PCR扩增产物5 μl，Taq Ⅰ内切酶2 U，10×酶切缓冲液1 μl，无菌去离子水补足至总体积10 μl，37℃水浴酶切过夜，酶切产物经3%琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像系统直接读取基因型结果。

1.5统计学方法 采用SPSS11.0软件，经Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验和χ2检验。

2 结 果

2.1基因组DNA提取结果及PCR扩增结果 基因组DNA经试剂盒提取效果较好。基因组DNA进行PCR扩增，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统中观察，目的片段大小为304 bp,见图1。

2.2IL-1β+3953/TaqⅠ基因型判定结果 1号和3号样本3条带，分别为114、135和249 bp，基因型为CT；2号样本两条带，分别为114和135 bp，基因型为CC。见图1。

M:Marker,分子量标准品；1，2,4,5,6：CC基因型； 3:CT基因型

2.3IL-1β+3953/Taq Ⅰ等位基因及基因型频率分布 两组均以CC基因型和C等位基因为主。见表1。

表1 IL-1β+3953/TaqⅠ的基因型频率及等位基因频率〔n(%)，n=80〕

2.4两组基因型及等位基因频率比较 两组IL-1β+3953位点基因型分布无差异(χ2=0.592,P>0.05，OR=1.490，95%CI0.537～4.132)，等位基因分布亦无差异(χ2=0.504,P>0.05，OR=1.403，95%CI= 0.549～3.585)。见表1。

3 讨 论

IL-1β是IL-1家族的一种激动剂,由各种有核细胞分泌,主要参与局部炎症和细胞内事件的调节。IL-1β通过识别靶细胞上的受体而产生生物学效应〔5〕。研究表明局部和全身炎症在动脉粥样硬化及其CHF发生和发展中起重要的作用。炎症介质如IL-1和TNF-α均可促进低密度脂蛋白与内皮细胞、平滑肌细胞的结合，启动细胞内一系列的反应过程和炎症细胞因子的产生〔6〕。本研究与朱银华等〔7〕对CHF患者IL-1β+3953 位点的研究结果相一致。CHF的病因很复杂，临床表现也多种多样，虽然IL-1+3953 基因多态性与CHF发病的相关性有待进一步证实，但是通过大量的研究已发现IL-1的基因多态性在冠心病的发生发展中起到一定的作用〔8〕。

4 参考文献

1Biasucci LM，Santamaria M，Liuzzo G.Inflammation，arteriosclerosis and acute coronary syndromes〔J〕.Minerva Cardioangiol，2002；50：475-86.

2Birkedal-Hmasen H.Role of cytokines and inflammatory mediators in tissue destruction〔J〕.J Periodontal Res,1993；28(6):500-10.

3Meisel P，Siegemund A，Grimm R，etal.The interleukin-1 polymorphism，smoking， and the risk of periodontal disease in the population-based SHIP study〔J〕.J Dent Res,2003；82:189-93.

4Lin YH， Huang P， Lu X，etal.The relationship between IL-1 gene polymorphism and marginal bone loss around dental implants〔J〕.J Oral Maxillofac Surg，2007；65:2340-4.

5Bioque G，Cnlsius JBA,Koutroubakis I,etal.Allelic polymorphism in IL-1β and IL-1 receptor antagonist(IL-1Ra)genes in inflammatory bowel disease〔J〕.Clin Exp Immmunol,1995；102(6):379-83.

6Joshipura KJ，Rimm EB，Douglass CW,etal.Poor oral health and coronary heart disease〔J〕.J Dent Res，1996；75:1631-6.

7朱银华，徐永春，周 斌，等.白细胞介素-1β基因启动子-31T/C和外显子5+3953C/T多态性与冠心病的相关性研究〔J〕.四川大学学报(医学版),2009；40(1)：73-6.

8李汉成，吴开毅，赵 锦.IL-1-511基因多态性与冠心病相关性研究〔J〕.医学综述，2012；4(18)：1085-7.