银杏叶提取物对SKOV3种植性卵巢癌Bcl-2、Bax的影响

马 哲 薛惠荣 黄秀英

(北华大学附属医院妇产科，吉林 吉林 132011)

银杏叶提取物(EGb 761)主要应用于心脑血管疾病的防治〔1〕，而近年来的一些研究发现银杏叶提取物对某些肿瘤具有抑制增殖的作用。研究显示 EGb 761及内脂B可明显降低乳腺癌细胞增殖〔2〕，给予银杏叶提取物可抑制人结肠癌细胞HT-29增殖〔3〕，银杏叶提取物山奈酚可通过诱导凋亡抑制胰腺癌细胞增殖〔4〕。研究还显示银杏叶提取物明显遏制二乙基亚硝胺(DEN)诱发的肝癌增殖〔5〕以及 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱发的 SD大鼠胃癌前病变〔6〕。但关于银杏叶提取物对卵巢癌的研究资料目前尚无报道。本研究利用SKOV3细胞株构建裸鼠种植性卵巢癌模型，观察银杏叶提取物对卵巢癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，从凋亡角度探讨其中的机制。

1 材料与方法

1.1材料 银杏叶提取物(商品名：金纳多，德国威舒培大药房)； Bax抗体、Bcl-2抗体、PV-6000 免疫组织化学试剂盒、DAB 显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)；其他试剂为国产分析纯。人卵巢癌细胞株SKOV3由吉林省肿瘤医院提供。雌性4周龄裸小鼠，由北京云菱生物技术有限公司提供。

1.2方法 体外培养SKOV3细胞， 收集对数生长期细胞，生理盐水调整至细胞数浓度为2×107/ml给予裸鼠皮下注射(0.2 ml/只)，接种2 w后，将成模裸鼠随机分为模型组、银杏叶提取物低剂量组(50 mg·kg-1·d-1)、银杏叶提取物高剂量组(100 mg·kg-1·d-1)，每组10只。模型组及银杏叶提取物各剂量组分别腹腔注射生理盐水或相应浓度药物1次/d，银杏叶提取物组连续给药3 w。3 w后处死动物，取出肿瘤称重后固定于4%甲醛溶液中。免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax在移植瘤组织中的表达。

2 结 果

2.1各组动物状态及瘤重 模型组动物状态尚可，实验至第16天时1只动物死亡，而给予银杏叶提取物的动物状态较好，体重无明显下降，实验期间无动物死亡。 与模型组比较，各治疗组肿瘤重量均有降低趋势，其中银杏叶提取物高剂量组差异显著(P<0.05)，瘤重抑制率达14.1%。见表1。

2.2肿瘤组织中Bcl-2、Bax蛋白表达情况 Bcl-2、Bax蛋白在模型组动物中均有较高水平的表达，阳性信号主要位于胞质。经银杏叶提取物治疗后的裸鼠肿瘤组织中Bcl-2的表达有所降低(P<0.05)，而Bax蛋白的表达有所升高(P<0.05)，特别是银杏叶提取物组高剂量组变化较明显。

表1 各组裸鼠体重及瘤重

A、D：模型组；B、E：银杏叶提取物组低剂量组；C、F：银杏叶提取物组高剂量组;A～C：Bcl-2；D～F：Bax

3 讨 论

银杏叶药用史已有五千多年，有良好的用药经验，药物毒性小。银杏叶提取物成分复杂，有效化学成分多，药理作用广泛，其中多种物质具有抗氧化、清除自由基、促进凋亡等抗肿瘤的药理基础。多项研究已显示银杏叶提取物可抑制肿瘤或癌前病变的增殖，其中一些研究显示，其抑制肿瘤的作用与肿瘤细胞凋亡密切相关〔2～7〕。银杏叶提取物可降低人结肠癌细胞HT-29 中bcl-2 mRNA、提高p53 mRNA表达，从而诱导其凋亡〔3〕。在N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱发的SD大鼠胃癌前病变的研究中也显示，银杏叶提取物治疗后大鼠Bcl-2、 c-myc及FasL等癌基因均表达降低，凋亡基因Fas 表达明显升高〔6〕。此外，关于白血病细胞U937的研究也显示，银杏叶提取物中的银杏酸成分可通过诱导凋亡明显抑制U937的增殖〔7〕。

化疗是卵巢癌的重要治疗手段，关于银杏叶提取物辅助化疗的研究也有报道，如银杏叶提取物联合他莫昔芬治疗乳腺癌大鼠，其疗效优于他莫昔芬单独治疗组〔8〕。一项临床Ⅱ期实验也显示给予胰腺癌病人5-氟尿嘧啶联合银杏叶提取物，病人耐受性强于单独使用5-氟尿嘧啶〔9〕。

本研究发现银杏叶提取物可以抑制卵巢移植瘤的增殖，给予银杏叶提取物的SKOV3种植性卵巢癌裸鼠瘤重有降低趋势，但本实验中银杏叶提取物瘤重抑制程度并不高，主要原因考虑为银杏叶提取物作用缓和，而本模型为短疗程治疗。

Bcl-2和Bax 是一对凋亡调节蛋白，Bax自身可形成同源二聚体，同源二聚体Bax/Bax的比例大于异源二聚Bcl-2/Bax时可促进细胞的凋亡，反之则抑制细胞凋亡。本实验结果显示，给予银杏叶提取物的动物Bcl-2表达明显降低，而Bax的表达明显增高，并呈剂量依赖性。提示银杏叶提取物可能通过促进肿瘤细胞凋亡从而抑制卵巢移植瘤的生长。

4 参考文献

1顾学裘.银杏药学研究与临床开发〔M〕.北京: 中国医药科技出版社,2004：17-31.

2Papadopoulos V,Kapsis A,Li H,etal.Drug-induced inhibition of the peripheral-type benzodiazeetalpine receptor expression and cell proliferation in human breast cancer cells〔J〕.Anticancer Res,2000;20(5A):2835-47.

3Chen XH,Miao YX,Wang XJ,etal.Effects of Ginkgo biloba extract EGb761 on human colon adenocarcinoma cells〔J〕.Cell Physiol Biochem,2011;27(3-4):227-32.

4Zhang Y,Chen AY,Li M,etal.Ginkgo biloba extract kaempferol inhibits cell proliferation and induces apoptosis in pancreatic cancer cells〔J〕.J Surg Res,2008;148(1):17-23.

5Dias MC，Rodrigues MA，Reimberg MC，etal.Protective effects of Ginkgo biloba against rat liver carcinogenesis〔J〕.Chem Biol Interact，2008;173(1):32-42.

6Jiang XY,Qian LP,Zheng XJ,etal.Interventional effect of Ginkgo biloba extract on the progression of gastric precancerous lesions in rats〔J〕.J Dig Dis,2009;10(4):293-9.

7Yang XM，Chen YC，Chen J，etal.Apoptosis study on human or leukaemia cell line U937 induced by ginkgolic acids from Ginkgo biloba L〔J〕.Food Sci，2006;27: 241- 6.

8Dias MC,Furtado KS,Rodrigues MA,etal.Effects of Ginkgo biloba on chemically-induced mammary tumors in rats receiving tamoxifen〔J〕.BMC Complement Altern Med,2013,doi: 10.1186/1472-6882-13-93.

9Hauns B,Häring B,Köhler S,etal.Phase Ⅱ study with 5-fluorouracil and ginkgo biloba extract(GBE 761 ONC)in patients with pancreatic cancer〔J〕.Phytother Res,2001;15(1):34-8.