钠葡萄糖转运子1和表皮生长因子受体2 mRNA在结直肠癌中表达的相关性

齐慧生 张志勇 吴晨鹏 王 晔 刘丽云 崔永兴 徐晋珩 胡月明

(唐山市工人医院呼吸内科，河北 唐山 063000)

在我国，结直肠癌(CRC)发病率呈逐年上升趋势，严重危害人体健康。钠葡萄糖转运子1(SGLT-1)作为一种转运载体主要是介导葡萄糖和半乳糖的吸收，可促进肿瘤细胞对葡萄糖的吸收为其生长提供营养〔1〕。表皮生长因子受体-2(HER-2)在肿瘤发展的不同阶段过程中发挥作用。本研究拟检测CRC组织及正常黏膜组织中SGLT-1和HER-2 mRNA表达，研究其临床特点的差异及在预后判断中的作用。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集唐山市工人医院2008年CRC患者的肿瘤组织35例作为肿瘤组，离体后立即置于液氮冻存，存于-80℃冰箱备用。其中男20例，女15例，年龄31～82〔平均(64.7±12.3)〕岁。病理类型：黏液癌10例，非黏液癌25例(本组纳入病例无其他组织学类型)；分化程度：高分化2例，中分化25例，低分化6例，资料缺失2例；无淋巴结转移17例，有淋巴结转移18例(根据术后病理确定有无淋巴结转移)。随机选取10例正常组织作为对照组。两组病例性别构成、年龄等常规指标比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要试剂 Trizol、反转录试剂盒、SYBR Green均购自GeneCopoeia公司。SGLT-1引物：正义5′-GCTGTTCATCCCTGGTGCT-3′，反义5′-ACATCTGGAATGGGCTTG-3′，HER-2引物：正义5′- TGCTGTCCTGTTCACCACTC-3′，反义：5′-TCATCCTCATCATCTTCACATTG-3′，内参β-Actin引物：正义5′-GTCTTCCCCTCCATCGTG-3′，反义5′-AGGGTGAGGATGCCTCTC-3′，均为赛百盛公司合成。

1.2.2组织总RNA提取 在20 mg新鲜组织(CRC组织)中加入1 ml Trizol混匀，按说明书操作提取总RNA，并计算RNA OD260/OD280比值，要求在 1.8～2.2。

1.2.3cDNA合成及real-time PCR检测 以提取的组织总RNA为模板，以Oligo(dT)15为引物，按试剂盒说明书合成cDNA，逆转录反应总体系20 μl。反应条件：25℃ 10 min,40℃ 60 min,70℃ 10 min。取合成的cDNA 2 μl为模板，进行real-time PCR反应，反应条件：94℃ 4 min,94℃ 20 s,60℃ 30 s,72℃ 30 s，进行35个循环。以上各步骤中，反应体系及试剂用量均按说明书进行操作。SGLT-1和HER-2的相对表达量采用2-△Ct法计算。

1.3统计学处理 应用SPSS13.0软件进行分析，组间比较应用Mann-Whitney检验，采用spearman进行相关性研究。

2 结 果

2.1SGLT-1和HER-2 mRNA在CRC组与中的表达 SGLT-1和HER-2 mRNA在CRC组中相对比分别为0.0424±0.049和0.003 4±0.009 23，在正常组中分别为0.007 2±0.004和0.000 8±0.000 77，差异有统计学意义(P=0.003 3，0.032 7)。

2.2CRC中 SGLT-1 mRNA的表达与临床病理特征的关系 CRC组中SGLT-1 mRNA在不同性别、年龄、组织类型、分化程度以及有无淋巴转移中的表达量差别均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3CRC中HER-2 mRNA的表达与临床病理特征的关系 HER-2 mRNA在淋巴结转移组中的表达量明显高于无淋巴结转移组，而在不同性别、年龄、组织类型、分化程度中的表达量差别均无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

2.4CRC中SGLT-1和HER-2 mRNA相关性分析 CRC组中SGLT-1和HER-2 mRNA的表达呈正相关(r=0.416，P=0.016)。见图1。

表1 结直肠癌中的SGLT-1 mRNA、HER-2 mRNA的表达与临床病理特征的关系

图1 CRC中SGLT-1和 HER-2 mRNA 表达的关系

3 讨 论

SGLT-1可促进肿瘤细胞对葡萄糖的吸收为其生长提供营养，可能成为肿瘤治疗的潜在靶点〔2〕。Hanabata〔2〕在口腔鳞状细胞癌的研究中发现SGLT-1蛋白均过度表达，由此认为SGLT-1通过促进肿瘤细胞对葡萄糖的摄取，影响口腔鳞状细胞癌的发生发展。Casneuf等〔3〕研究结果显示SGLT-1表达情况同胰腺癌患者的无病生存期密切相关，其可作为评估胰腺癌患者预后的分子标记。Guo等〔4〕表明SGLT-1在CRC组织中的表达明显高于正常组织且同临床分期密切相关。肿瘤细胞生长旺盛，需要足够的营养物质维持其生长，因此需要大量的SGLT-1接到葡萄糖的转运，故SGLT-1 mRNA在肿瘤中的表达量明显增高。本实验提示其在CRC的形成过程中起重要的促进作用。

近年有文献报道原癌基因HER-2在CRC的发生、发展过程中发挥重要作用，在人类肿瘤发生中HER-2基因是改变频率最高的原癌基因之一，被激活后促进细胞增殖和肿瘤发生。HER-2基因的致癌机制为抑制凋亡、促进存活、促进肿瘤新生血管形成和增加肿瘤细胞的侵袭力〔5〕。Cunninglmm等〔6〕发现HER-2的表达与年龄、性别和部位无关，与淋巴结转移密切相关。张建宾等〔7〕对CRC患者进行生存分析，HER-2过表达与CRC的不良预后有关，且可作为预后的独立因素。HER-2可作为评估CRC患者恶性程度及预后的生物学指标。本实验提示二者在CRC的形成过程中起重要的促进作用。不仅如此，本实验还表明HER-2蛋白的表达在肿瘤细胞侵袭性生长或转移中起一定的作用。HER-2蛋白的表达与CRC病理特点和生物学行为有密切联系，与CRC侵袭、转移和预后有关，故检测HER-2 mRNA的表达，可作为CRC侵袭转移能力的评估依据〔8〕。本研究同时提示SGLT-1和HER-2 mRNA可能存在某种联系，但具体机制还需进一步研究。

4 参考文献

1Ravdin PM.Should HER-2 status be routinely measured for all breast cancer patients〔J〕.Semin Oncol，1999；26(4 Suppl 12)：117-23.

2Hanabata Y.Expression analysis of EGFR and SGLT-1 in oral squamous cell carcinoma〔J〕.Kokubyo Gakkai Zasshi，2011；78(1)：12-8.

3Casneuf VF，Fonteyne P，Van Damme N，etal.Expression of SGLT-1，Bcl-2 and p53 in primary pancreatic cancer related to survival〔J〕.Cancer Invest，2008；26(8)：852-9.

4Guo GF，Cai YC，Zhang B，etal.Overexpression of SGLT1 and EGFR in colorectal cancer showing a correlation with the prognosis〔J〕.Med Oncol，2011；28(Suppl 1)：S197-203.

5Tan M,Li P, Klos KS，etal.ErbB2 promotes Src synthesis and stability：Novel mechanisms of Src activation that confer breast cancer metastasis〔J〕.Cancer Res，2005；65(5)：1858-67.

6Cunninglmm D，Humblet Y，Siena S，etal.Cetuximab monotherapy and cetuximab plus irinotecan in irinotecan-refractory metastatic coloreotal cancer〔J〕.N Engl J Med，2004；351(4)：337-45.

7张建宾，陈莉兵.c-erbB-2过表达、nm23低表达与结直肠癌预后不良的关系〔J〕.中华病理学杂志，2003；32 (2)：115-9.

8吴桂丽，张 力.癌蛋白HER-2在直肠癌组织中表达的临床意义〔J〕.中国实用医药，2008；3(10)：86-7.