重症腺病毒肺炎患儿实验室检查结果分析

马莉亚 卢美萍 郑海滨

1浙江省台州医院 台州 317000 2浙江大学医学院附属儿童医院呼吸科

重症腺病毒肺炎患儿实验室检查结果分析

马莉亚1卢美萍1郑海滨2

1浙江省台州医院 台州 317000 2浙江大学医学院附属儿童医院呼吸科

儿童；腺病毒肺炎；重症；细胞因子；T淋巴细胞亚群

腺病毒（adenovirus，ADV）肺炎是婴幼儿肺炎中最严重的类型之一，其病理特征表现为局灶性或融合性坏死性肺浸润和支气管炎改变，重症病例可出现肺外表现，如心力衰竭、心肌损害、肝功能损害及中毒性脑病等。现将130例腺病毒肺炎患儿相关实验室资料分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2009年1月—2012年4月本院确诊腺病毒肺炎患儿共130例，诊断均符合《诸福堂实用儿科学》[1]的诊断标准。130例中重症55例，男31例（56.4%），女 24例（43.6%），男女比例 1.3∶1，平均年龄1.8岁；非重症75例，男29例（38.7%），女46例（61.3%），男女比例为 0.63∶1，平均年龄 2.1 岁。两组年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05）。重症病例诊断符合中华医学会儿科学分会呼吸学组制定的诊断标准[2]，即婴幼儿：腋温≥38.5℃；RR≥70 次/min（除外发热、哭吵等因素影响），胸壁吸气性凹陷，鼻扇、紫绀、间歇性呼吸暂停、呼吸呻吟；拒食。年长儿：腋温≥38.5℃；RR≥50次/min（除外发热、哭吵等因素影响）鼻扇、紫绀、呼吸呻吟；有脱水征象。

1.2 病原学测定 腺病毒抗原检测：分泌物制备细胞涂片，应用美国Chemicon公司试剂盒以直接免疫荧光法检测，当放大倍数为200倍时，在视野中找到≥2个阳性细胞，判为标本阳性；试剂由美国Chemicon 公司（Chemicon International Inc，Te-mecula，CA，USA）生产，已通过FDA认证用于体外诊断。

1.3 炎症及免疫学指标测定

1.3.1 血常规和CRP检测 入院后次日清晨抽取空腹静脉血2mL，采用五分类法（SE9000血液计数仪和试剂）检测血常规，WBC计数参考范围为（4～10）×109/L，中性粒细胞绝对值参考范围为（1.8～7.0）×109/L；采用i-CHROMA比浊仪测定CRP，试剂由韩国BODITECH MED INC.诊断公司生产，CRP参考范围0～8mg/L。

1.3.2 血清IL-6、IL-10及TNF-α 检测方法 入院后次日清晨抽静脉血2～3mL不加抗凝剂，24h内分离血清，-20℃冰箱贮存待测。采用酶联免疫吸附法检测 IL-6、IL-10及 TNF-α 含量，试剂盒由中美科技有限公司提供，仪器为美国Hyperion MRIII型酶标仪。IL-6 参考范围：1.7～16.6pg/mL，IL-10 参考范围：2.6～4.9pg/mL，TNF-α 参考范围：0.1～5.2pg/mL。

1.3.3 T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+检测 入院后次日清晨采集肝素钠抗凝新鲜全血2mL，加入荧光抗体（CD4+/CD8+）20μL，混匀，室温暗处避光孵育15min，加入700μL溶血素，混匀，室温避光孵育30min后，以流式细胞仪（BD 公司，23-12495-00Rev.01）单平台进行T细胞亚群（CD4+、CD8+）百分率检测，计数10 000个以上细胞。应用Partec Flomax软件对测量数据和图形进行分析，得到T淋巴细胞亚群结果，与同龄儿童正常值进行对比分析。T细胞亚群正常值：CD4+29%～40%，CD8+19%～25%，CD4+/CD8+1.1～2。

1.4 统计学方法 用PASW18软件进行统计分析，两组间资料采用t检验及Mann Whitney-U检验，以P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 炎症指标及细胞因子比较 重症组患儿中性粒细胞计数、CRP、IL-6和IL-10水平均高于非重症组患儿（P＜0.05，P＜0.01）。两组外周血白细胞计数和血清TNF水平差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2 免疫学指标比较 重症组CD4+、CD4+/CD8+显著低于非重症组（P＜0.05），但两组CD8+水平差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 2。

表1 两组外周血象、CRP和细胞因子比较（±s）

表1 两组外周血象、CRP和细胞因子比较（±s）

注：与非重症组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组 别重症组非重症组n/例55 75白细胞/（×109/L）10.85±5.45 10.15±4.76中性粒细胞/（×109/L）6.16±3.85**5.00±2.79 CRP/（mg/L）33.58±42.53**21.00±30.64 IL-6/（pg/mL）182.90±235.33*62.50±59.82 IL-10/（pg/mL）11.46±4.20*8.72±2.81 TNF-α/（pg/mL）7.13±10.40 8.00±10.10

表2 两组T淋巴细胞亚群比较（±s） %

表2 两组T淋巴细胞亚群比较（±s） %

注：与非重症组比较，*P＜0.05

组 别重症组非重症组n/例55 75 CD4+25.40±9.56*30.94±9.80 CD8+21.54±2.32 20.83±2.65 CD4+/CD8+1.20±0.48*1.50±0.46

3 讨论

腺病毒为双股DNA病毒，无包膜，直径70～90nm，衣壳呈规则的20面体结构，含有240个六联体（hexon）。目前已知有 7个亚型（A-G），共 52个血清型[3]，其中我国以3型和7型为主要病原，而国内外均有资料证实ADV-7导致的临床过程和肺部后遗症最严重[4-5]；重症腺病毒肺炎患儿临床上表现为明显感染中毒貌，热程长，喘憋严重，严重者可出现呼吸衰竭，同时，还可出现较多肺外并发症，如心力衰竭、肝功能损害、凝血功能障碍、中毒性脑病及严重电解质紊乱等，有一定病死率（＜5%）[1]。

Fernández等[6]研究发现，腺病毒致严重肺损伤与体内相关炎症介质有关。本组资料显示，重症腺病毒肺炎患儿的中性粒细胞绝对值、CRP水平、IL-6及IL-10血清浓度均显著高于非重症患儿。国外亦有资料[7]证实，腺病毒感染后CRP可异常升高，是与继发感染无关的独立过程。Kawasaki等[8]认为，相对于流感病毒和呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒感染后的炎症反应更强，表现为热程更长，更为明显的中性粒细胞为主的白细胞升高和CRP升高，以及血清IL-6浓度升高。IL-6是炎症急性期合成的重要介质，可对多种细胞有促炎作用和诱导肝组织合成急性时相蛋白（CRP），它还可通过诱导T细胞分化，加强炎症细胞因子的释放，促进炎症的发生[9]，当IL-6升高时，将造成组织损害。而IL-10是由Th2细胞产生的强效抗炎细胞因子，能抑制IL-6、TNF-α等促炎细胞因子的释放。赵晓东等[10]研究表明，腺病毒肺炎所产生的炎症反应可能是其临床严重程度的主要取决因素之一，且炎症反应所造成的损害可能比病毒复制本身引起的损害更大。刘秀云等[11]临床调查发现，重症腺病毒肺炎患儿全身激素使用的比例明显高于肺炎链球菌肺炎及呼吸道合胞病毒肺炎，提示重症腺病毒肺炎患儿体内存在较强的炎症过程。我们发现重症腺病毒肺炎患儿血清的IL-6及IL-10水平均较非重症组有明显升高，提示重症患儿体内免疫亢进与免疫抑制同时存在。Patel等[12]认为，相对其他病毒而言，ADV引起TNF-α升高更为明显，而我们研究发现TNF-α在两组之间的差别不明显，这可能与本研究样本量较小等有关，TNF-α水平与腺病毒肺炎的相关性有待大样本的对照研究进一步探讨。

腺病毒感染后的免疫应答过程中，T细胞主要辨识腺病毒衣壳蛋白，特别是丰富的腺病毒六联体蛋白，其中主要为 CD4+[13]。David Onion 等[14]推测在腺病毒急性感染后，CD4+T细胞通过分泌细胞因子维持腺病毒特异性CD8+T细胞的功能，特别是干扰素的分泌还可能通过上调HLA I的水平促进CD8+T细胞清除感染细胞。祝国红等[15]研究发现，腺病毒感染的患儿血清CD4+/CD8+水平下降，可能存在细胞免疫受损。本研究也发现重症组患儿的CD4+和CD4+/CD8+水平下降更为明显（P<0.05），提示重症腺病毒肺炎患儿体内细胞免疫功能明显下降，病毒清除能力下降。相关免疫功能的紊乱可能与腺病毒肺炎的严重程度密切相关。

综上所述，血清炎症和免疫学相关指标的测定有助于重症腺病毒肺炎病例的早期识别，临床上重视相关指标的检测，有利于腺病毒肺炎患儿的早期干预和综合治疗，控制病情进展。

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卢美萍，E-mail：meipinglu@126.com

2013-05-10

2013-06-19