脐带间充质干细胞移植治疗帕金森病效果分析

季 兴 李 波 李 婛 谭庆晶

解放军第303医院神经内科 南宁 530021



脐带间充质干细胞移植治疗帕金森病效果分析

季 兴 李 波 李 婛 谭庆晶

解放军第303医院神经内科 南宁 530021

目的 探讨脐带间充质干细胞移植治疗帕金森病的临床效果。方法 选择我院收治的38例帕金森病为研究对象，采用足月妊娠产妇脐带处理后干细胞，于第2周期进行鞘内注射移植治疗。分析治疗后临床症状及体征改善情况。治疗前及治疗后1个月，采用帕金森病统一评分量表(UPDRS)对患者精神、行为、情绪、日常活动、运动功能、并发症进行评价。结果 所有患者的静止性震颤、运动迟缓、肌强直、姿势步态障碍均不同程度缓解，治疗过程中及治疗后患者各项生命体征均较平稳。38例患者移植后UPDRS评分显著低于移植前，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗过程中患者有低热、头痛、腰痛、兴奋症状出现，给予对症处理后均完全缓解。均未见抗移植物宿主病。结论 脐带间充质干细胞移植可显著改善帕金森病患者的临床症状。

脐带；间充质干细胞；帕金森病

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)为常见的神经系统变性疾病，多见于老年人，主要病理改变为脑黑质多巴胺(dopamine, DA)能神经元的变性死亡，导致纹状体DA含量显著减少而致病[1]。病因与遗传因素、环境因素、年龄老化、氧化应激等有关[2]。临床表现为肌强直、震颤、运动迟缓及体位不稳，严重影响患者的生命健康及生活质量。传统的药物及手术治疗均无法逆转神经变性，无法增加多巴胺能神经细胞的数目。近年来，成体干细胞技术的多潜能性逐渐应用于帕金森病的临床治疗中[3]。为探讨脐带间充质干细胞移植技术在治疗帕金森病的临床效果，本研究对我院2007-03—2012-03收治的38例帕金森病患者给予脐带间充质干细胞移植治疗，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院2007-03—2012-03收治的38例帕金森病患者为研究对象，所有患者均符合中华医学会神经病学分会制定的关于运动障碍及帕金森病的相关诊断标准[4]。男28例，女10例；年龄56～89岁，平均(75.3±5.1)岁。Hoehn-Yahr分级为Ⅱ～Ⅳ级。排除合并恶性肿瘤、全身感染或局部严重感染者，合并心、肝、肾等脏器严重功能障碍者，过敏体质及有严重过敏史者，凝血功能障碍及血清学检查阳性者。

1.2 临床表现 所有患者均有一侧肢体震颤或活动笨拙。为静止性震颤，伴运动迟缓、肌强直、姿势步态障碍。部分患者有情绪低落、睡眠障碍、认知障碍等非运动症状。所有患者入院后第1周行血、尿、便常规检查，肿瘤标志物检查及胸片检查均未见异常。4例患者胆固醇及甘油三酰升高，给予降脂治疗后血脂水平恢复至正常。2例患者伴血糖升高，给予饮食控制口服拜糖平治疗后血糖控制良好。

1.3 治疗方法

1.3.1 脐血间充质干细胞的制备：产妇知情，通过伦理委员会批准，获取足月妊娠的产妇脐带，无菌条件下收集脐带，浸于含1%青链霉素的PBS溶液中，密封送实验室待处理。然后于超净台上剪取长约2 cm的脐带，剖开动静脉后用PBS冲洗净血污，剪碎脐带成肉糜状，加入4 mL含0.25%胰酶、200～400 U胶原酶Ⅱ/L的PBS混匀，置于37℃消化4 h，消化过程中每隔10 min振摇1次。消化完毕后吸取消化上清，转移至细胞培养瓶中，加入DMEM/F12培养基，37℃，体积分数5% CO2培养箱中培养3 d。3 d后于显微镜下观察到贴壁细胞，半量换液后继续培养3 d。3 d后再换液，细胞可稳定生长。以后每隔3 d换液1次至细胞生长铺满平底(约10 d)。流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD34、CD44、CD45、CD90、CD105的表达率。CD29、CD44、CD90、CD105阳性率达95%以上，CD34、CD45表达阴性即可待用。

1.3.2 脐带血间充质干细胞移植：于第2周期，应用脐血间充质干细胞进行鞘内注射移植治疗，每周1次，共治疗4次。患者取左侧卧位，背部与床边垂直，头向胸前弯曲，腰向后弓起，双膝向腹部屈曲。选择第3、4腰椎间隙为穿刺点，行常规消毒铺巾后，用2%利多卡应行局部麻醉，然后用9号穿刺针垂直刺入蛛网膜下腔，缓慢注射2 mg地塞米松，再取准备好的脐血间充质干细胞注射液20 mL(干细胞数4×107)，于10 min内缓慢注入蛛网膜下腔，注入过程中注意观察患者有无不适。然后拔出穿刺针，行局部皮肤消毒，无菌敷料敷盖创面，治疗结束。在干细胞移植治疗的同时，给予扩张血管、营养神经、稳定细胞膜、抗自由基等综合治疗。

1.4 疗效标准 于治疗前及治疗后1个月采用帕金森病统一评分量表(UPDRS)[5]对患者精神、行为、情绪、日常活动、运动功能及并发症进行评价，分值越高提示神经功能缺损越严重。

2 结果

2.1 临床症状及体征缓解情况 治疗4周后，所有患者静止性震颤、运动迟缓、肌强直、姿势步态障碍均有程度不同的缓解，治疗过程中及治疗后患者各项生命体征均较平稳。

2.2 脐带间充质干细胞移植前后UPDRS评分比较 38例患者移植后UPDRS评分显著低于移植前，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 移植前后UPDRS评分比较

2.3 治疗过程中并发症及不良反应发生情况 治疗过程中出现低热2例，体温低于38℃,2例伴头痛，1例有腰痛，1例有兴奋症状，给予对症处理后完全缓解。所有患者均未见抗移植物宿主病。

3 讨论

人脐带为连接母体与胎儿、给胎儿提供营养的组织结构，由羊膜被覆上皮、脐血管及两者之间称为华氏胶的黏液结缔组织组成。华氏胶主要对脐血管起支撑及保护作用，而其中的纤维样细胞-脐血间充质干细胞具有自我更新、多向分化及增值潜能。表面标记表型分析为CD29、CD44、CD73、CD90、CD105阳性，阳性率高于95%，CD34、CD45、CD31及HLA-DR阴性，阳性率低于2%[6]。与骨髓间充质干细胞、胚胎干细胞及脂肪间充质干细胞相比，脐带间充质干细胞具有：(1)取材方便，保存、冷冻方便，不受伦理、道德及法律等诸多方面的限制。(2)脐带间充质干细胞的免疫特性及生物学特性相对纯净，由于胎血屏障的存在，无病毒感染，从而在心肌、神经等局部治疗方面应用前景广阔。(3)脐带间充质干细胞含量丰富，分化能力强，可于体外分离、培养，迅速扩增，多次传代仍可保持旺盛功能，细胞来源充足。(4)脐带间充质干细胞低表达或不表达免疫排斥相关标记，免疫原性低，无需严格配对使用，异体移植排斥反应弱或无排斥反应，适用于不同个体间的移植[7]。

帕金森病为中脑黑质纹状体系统的多巴胺能神经元变性引起的多巴胺递质降低，从而导致静止震颤、运动迟缓、四肢僵硬、体位不稳等为主的锥体外系疾病。目前，临床治疗无论是递质替代或外科手术均无法改善脑内环境，无法增加多巴胺能神经元的数目，相反，因多巴的神经毒性及电极刺激，可使神经细胞数目减少[8]。本组采用脐血间充质干细胞移植治疗，于短期内即可部分改善患者的临床症状，治疗后患者UPDRS评分显著改善。考虑可能与以下因素有关：(1)间充质干细胞于中枢神经系统Niche下能分泌脑源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子等，促进损伤组织的修复。(2)间充质干细胞移植入脑后，可形成表达Nestin等蛋白的神经元样细胞或星形胶质细胞，可在受损部位存活并移行至全脑。(3)可于脑内创造适宜的局部微环境，经不同因子诱导分化或体外扩增使间充质干细胞分化为神经细胞后再行移植，可代替受损细胞重建神经功能区及传导通路[9]。

[1] 邱云，汪铮，路红社.脐带间充质干细胞移植治疗帕金森病8例[J].中国组织工程研究与临床康复，2011,15(36)：6 833-6 836.

[2] Yan M, Sun M, Zhou Y, et al. Conversion of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells in Wharton's Jelly to Dopamine Neurons Mediated by the Lmx1a and Neurturin In Vitro: Potential Therapeutic Application for Parkinson's Disease in a Rhesus Monkey Model[J].PLoS One，2013，28(5):e64 000.

[3] Yang S, Sun HM, Yan JH, et al. Conditioned medium from human amniotic epithelial cells may induce the differentiation of human umbilical cord blood mesenchymal stem cells into dopaminergic neuron-like cells[J].J Neurosci Res，2013，91(7):978-986.

[4] 吴立克，王晓娟，褚赛纯，等.脐血间充质干细胞移植治疗帕金森病30例[J]. 中国组织工程研究与临床康复，2009,13(40)：7 951-7 954.

[5] Yang S, Xue DD, Wu B,et al. Pleiotrophin is involved in the amniotic epithelial cell-induced differentiation of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells into dopaminergic neuron-like cells[J].Neurosci Lett，2013，539:86-91.

[6] 黄仕雄，刘军，文国强，等.Nurr1基因修饰人脐血间充质干细胞源性多巴胺能神经元移植治疗帕金森病[J].中山大学学报，2009,30(5)：522-526.

[7] Shetty P,Thakur AM,Viswanathan C.Dopaminergic cells, derived from a high efficiency differentiation protocol from umbilical cord derived mesenchymal stem cells, alleviate symptoms in a Parkinson's disease rodent model[J]. Cell Biol Int，2013，37(2):167-180.

[8] 卢国辉，张世忠.脐血间充质干细胞与帕金森病[J].中华神经医学杂志，2012,11(3)：314-318.

[9] Mathieu P,Roca V,Gamba C,et al. Neuroprotective effects of human umbilical cord mesenchymal stromal cells in an immunocompetent animal model of Parkinson's disease[J]. J Neuroimmunol，2012，246(1-2):43-50.

(收稿2013-09-18)

Effect analysis of Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation on the treation of Parkinson's disease

JiXing,LiBo,LiQiong,TanQingjing

DepartmentofNeurology,the303thHospitalofthePeople'sLiberationarmy,Naning530021,China

Objective To investigate the clinical effect of umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation on treatment of Parkinson's disease. Methods 38 cases with Parkinson's disease were selected as the research object, the full-term pregnancy umbilical cord stem cells were used.In the second cycle,umbilical cord blood mesenchymal stem cells transplantation intrathecal injection treatments were used.Clinical signs and symptoms improved were observed after treatment.Before and 1 month treatment, the unified Parkinson's disease rating scale (UPDRS) of patients with mental, behavioral, emotional, daily activities and motor function,and evaluate the treatment of the complications of four aspects were evaluated. Results Static tremor, bradykinesia,myotonia,posture gait disorders all have different degrees of ease, patients with various vital signs are relatively stable during treatment and after treatment. UPDRS score in 38 cases were significantly lower than those before transplantation UPDRS score after transplantation, the difference was statistically significant (P<0.05).Low grade fever, headache, backache, excitement symptoms were observed during therapy. Adverse reactions completely ease after symptomatic treatment. Graft host disease resistances were not observed. Conclusion Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation scanignificantly improve the clinical symptoms of Parkinson's disease patients.

Umbilical cord mesenchymal stem cell; Parkinson's disease

R742.5

A

1673-5110(2014)02-0008-03