Survivin在正常组织、癌旁组织及子宫内膜癌组织中的表达

张旭 王喻 李小毛

·临床医学·

Survivin在正常组织、癌旁组织及子宫内膜癌组织中的表达

张旭 王喻 李小毛

目的 研究正常组织、癌旁组织以及子宫内膜癌组织中凋亡抑制基因(Survivin)的表达情况, 并探讨其相应的临床病理意义。方法 应用免疫组化检测30例正常组织、11例癌旁组织以及30例子宫内膜癌组织中Survivin的表达情况, 并结合其临床病理因素进行相关分析。结果 Survivin在子宫内膜癌中的阳性表达率为93.33%(28/30), 显著高于正常子宫内膜(26.67%) (P＜0.001), 但与癌旁组织中的Survivin表达率(81.82%)差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 Survivin在子宫内膜癌中的表达上调在子宫内膜癌发生、发展有重要意义, 包含Survivin的联合检测在子宫内膜癌的早期诊断方面具有指导意义。

子宫内膜癌(endometrial carcinoma, EC)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤, 近年来其发病率有逐年上升的趋势。研究表明, 子宫内膜的癌变过程与细胞凋亡减少、过程紊乱密切相关［1］。Survivin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis protein, IAP)的成员之一, 是近来研究比较热门的基因［2］。目前, 国内外关于Survivin与子宫内膜癌关系的研究多有报道, 尚无统一结论［3-7］。本研究采用免疫组化检测Survivin蛋白在子宫内膜癌、正常子宫内膜及癌旁组织中的表达情况, 并结合相关临床病理学特征及其他临床指标, 分析Survivin蛋白在子宫内膜癌变过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 选取2005～2013年在中山大学附属第三医院妇科诊治, 经手术-病理确诊为子宫内膜癌患者的存档病理蜡块30例, 分别行Survivin蛋白检测及HE染色。同时选取同期因子宫肌瘤行全子宫切除手术的30例正常内膜(增生期、分泌期各15例)作对照, 并于癌组织旁0.4 cm肿瘤与正常组织交界处取癌旁组织11例。所选患者均具有完整的临床病理学资料, 年龄44～76岁, 术前未接受内分泌等治疗。根据子宫内膜癌手术-病理分期(FIGO, 2000)划分：Ⅰ期23例、Ⅱ期3例、Ⅲ期3例、Ⅳ期1例；无肌层浸润6例, 浅肌层浸润(＜1/2)14例, 深肌层浸润(≥1/2)10例,发生淋巴结转移者4例；按癌细胞分化程度分为G1级22例、G2级4例、G3级4例。

1.2 研究方法

1.2.1 试剂 Survivin一抗购于美国Santa Cruz公司, SP二抗试剂盒、DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥公司等。

1.2.2 标本来源 标本来自广泛子宫或全子宫切除术后石蜡包埋子宫内膜组织。

1.2.3 实验方法 采用免疫组化2步SP染色法：离体组织切片制片后, 烤片, 脱蜡, 修复, 山羊血清封闭, 一抗、二抗孵育, DAB显色, 苏木素染核, 透明, 封片, 镜检。以乳腺癌阳性切片作阳性对照, PBS缓冲液代替Survivin一抗作阴性对照。

1.3 判断标准 Survivin蛋白常见于细胞浆, 偶见于细胞核, 以出现棕色颗粒样沉着为阳性信号。每例均随机观察5个高倍视野(×400), 以阳性细胞占百分比率分别记0～4分:≤5%记0分, 6%～25%记1分, 26%～50%记2分, 51%～75%记3分, ＞75%记4分；阳性细胞染色深浅程度记0～3分：无色0分, 淡黄色1分, 棕黄色2分, 棕褐色3分。两者所记分数乘积, 阴性(-)为0分, 弱阳性(+)为0～4分,中度阳性(++)为5～8分, 强阳性(+++)为9～12分。过表达为中度阳性和强阳性(++～+++)。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件, 协方差分析或单因素方差分析, 检验水准α=0.05。以 P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin在正常组织、癌旁组织及子宫内膜癌中的表达 Survivin在正常子宫内膜中的阳性率为26.67%(8/30),其中增生期为13.33%(2/15), 分泌期为40.00%(6/15), 均为弱阳性(+)表达；在癌旁组织中为81.82%(9/11)；在子宫内膜癌中为93.33%(28/30), 弱阳性(+)为26.67%(8/30),中度阳性(++)为50.00%(15/30), 强阳性(+++)为16.67%(5/30), 过表达率为66.67%(20/30)。以Survivin表达量作为因变量, 分组因素作为自变量, 年龄、是否绝经等作为协变量进行协方差分析, 发现控制混杂因素后,子宫内膜癌中的Survivin蛋白表达量高于正常组织, 差异有统计学意义(P＜0.001)；而采用单因素方差分析后发现,正常子宫内膜中Survivin蛋白表达量低于子宫内膜癌组织及癌旁组织, 差异有统计学意义(P＜0.05)；但子宫内膜癌与癌旁组织中Survivin蛋白的表达量差异无统计学意义(P＞0.05), 见表1。

表1 Survivin在正常组织、癌旁组织、子宫内膜癌组织中的表达 (n, %)

2.2 Survivin与临床病理学特征的关系 统计结果显示, Survivin的表达量与临床分期(I～IV)、组织分化程度(G1～G3)、侵犯肌层(无、浅肌层、深肌层)、是否发生淋巴转移、病理类型(腺癌、非腺癌)等经典影响预后的临床病理学特征的相关系数比较, 差异无统计学意义(P＞0.05)。2.3 Survivin与其他临床指标的关系 统计结果显示, Survivin 的表达量与年龄(＜50岁、50～60岁、＞60岁)、是否绝经(是、否)、孕次(0次、1次、2次及以上)、产次(0次、1次、2次及以上)、流产次数(无、有)、CA199(＜35、≥35)、CA125(＜35、≥35)等其他临床指标的相关系数差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

Survivin是近年发现的凋亡抑制蛋白家族成员, 通过下调Caspase的活性抑制细胞凋亡。Survivin过表达使正常细胞失去增殖周期中检查点(checkpoint)的限制, 促进细胞异常增殖, 导致肿瘤发生［4-7］。本研究显示, Survivin在正常子宫内膜中的表达(26.67%)低于癌旁组织(81.82%)及内膜癌组织(93.33%), 差异有统计学意义(P＜0.05)；但在子宫内膜癌(93.33%)与癌旁组织(81.82%)中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。这些结果均提示, 子宫内膜癌中Survivin表达上调, 推测Survivin的异常表达发生在内膜癌发生癌变的早期；Survivin表达阳性提示, 正常组织具有早期癌变的倾向, 因而通过检测Survivin的表达具有早期诊断的价值。另外, 本研究发现, Survivin的表达与组织分化程度、临床分期、肌层浸润、是否淋巴转移等影响预后的临床病理学因素无关, 这同Erkanli、Pallares等［6,7］学者的研究结果一致, 但是同Takai、Lehner等［4,5］学者的研究结果不相符合, 其内部发生机制有待进一步深入研究。本研究还显示, Survivin的表达与年龄、是否绝经、流产次数、孕产次、肿瘤标记物数值的高低等其他临床相关因素无关, 国内外相关报道极少见。

综上所述, 在子宫内膜癌高危人群中施行Survivin蛋白表达的检测对于子宫内膜癌的早期诊断、高危人群的筛查具有重要意义, Survivin蛋白表达的上调可能在子宫内膜的早期癌变过程中扮演重要的角色, 检测其表达并与正常组织含量对比具有早期诊断的价值, 这一相关性的内部分子机制尚不清楚, 有待进一步研究。

［1］ Temkin SM, Fleming G.Current treatment of metastatic endometrial cancer.Cancer Control, 2009, 16(1):38-45.

［2］ 李梅, 陈芸, 胡早秀, 等.Survivin在乳腺癌中的表达及其临床意义.实用医学杂志, 2006, 33(4):2339-2340.

［3］ Mita AC, Mita MM, Nawrocki ST, et al.Survivin:key regulator of mitosis and apoptosis and novel target for cancer therapeutics.Clin Cancer Res, 2008, 14 (16):5000-5005.

［4］ Takai N, Miyazaki T, Nishida M, et al.Survivin expression correlates with clinical stage, histological grade, invasive behavior and survival rate in endometrial carcinoma.Cancer Lett, 2002, 184(1):105-116.

［5］ Lehner R, Enomoto T, Mc Gregor JA, et al.Correlation of survivin mRNA detection with histologic diagnosis in normal endomet rium and endomet rial carcinoma.Acta Obstet Gynecol Scand, 2002, 81(2):162.

［6］ Erkanli S, Bolat F, Kayaselcuk F, et al.COX-2 and survivin are overexp ressed and positively correlated in endometrial carcinoma.Gynecol Oncol, 2007, 104(2):324-325.

［7］ Pallares J, Martínez-Guitarte JL, Dolcet X, et al.Survivin expression

510630 中山大学附属第三医院