冰冻亚型红细胞信息库的建立及应用

郭超群++++++李运琴++++++刘志勇++++++来祝檩++++++夏琳静++++++王林++++++闫晓鹏

[摘要] 目的 探讨冰冻亚型红细胞信息库的建立及应用，以利于冰冻亚型红细胞的合理选择和应用。 方法 以甘油作为防冻剂，将ABO亚型红细胞进行甘油化和适当分装后，于-80℃低温冰箱冰冻保存；同时详细记录每份红细胞的来源、亚型种类、弱抗原与抗血清的反应强度、红细胞容量、预期用途、分装容器、分装总份数、每份分装量、血浆是否含ABO不规则抗体、是否保存对应血浆以及献血码或姓名、性别、年龄、民族、身份证号码、通讯地址、联系电话等资料，建立冰冻亚型红细胞信息库；根据不同工作需要，从红细胞信息库中选择合适的亚型红细胞，经融化洗涤，加入合适的保存介质和抑菌剂后使用。 结果 从冰冻亚型红细胞信息库中选择合适的亚型标本，在血站和医院供血库ABO血型鉴定相关工作中应用后，无偿献血者和医院患者的ABO亚型检出率显著提高，进一步保证了临床输血的安全性和有效性。 结论 ABO亚型红细胞的冰冻保存及其信息库的建立，能使ABO亚型红细胞得到充分有效的利用，具有良好的经济效益和社会效益，可在采供血机构和医院供血库进行推广应用。

[关键词] 信息库；红细胞；冰冻；ABO亚型

[中图分类号] R331.1+41 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2014）07（b）-0187-04

ABO亚型是指在常见的人类A、B、O、AB 4种血型之下进一步细分的ABO血型[1]，如A血型的A2、Aint、A3、AX、Aend、Am、Ay、Ael等，B血型的B3、BX、Bend、Bm、Bel等，AB血型的A2B、A3B、AB3、AXB、ABX、AmB、ABm、cisAB、B（A）等，这些亚型是由于基因突变导致的红细胞抗原减弱[2]。在血型血清学试验中，ABO亚型由于红细胞A、B抗原减弱或血浆中同时含有ABO不规则抗体，极易因漏检和误判而导致严重的输血不良反应，给安全输血带来极大隐患[3-8]。因此，正确鉴定献血者和临床患者中存在的ABO亚型，在保证临床输血安全方面具有十分重要的意义。2010年以来，笔者利用冰冻保存RhD阴性血液的原理，将日常工作中确定为亚型的血液和标本进行冰冻保存，建立了冰冻亚型红细胞信息库，并在血站和医院供血库ABO血型鉴定相关工作中得到了一定范围的应用，有效提高了无偿献血者和临床患者的ABO亚型检出率，进一步保证了临床输血安全。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2010年1月～2013年12月，进行冰冻保存的ABO亚型血液和标本，16份来自本站无偿献血者血液（其中包括2010年以前献血时被确定为正常血型，2010年以后重复献血时被确定为亚型的4名无偿献血者血液），15份来自临床供血库送检的患者标本，14份是家系调查标本。

1.2 初始血液和标本的选择条件

所有进行冰冻保存的血液和标本均被确定为ABO亚型，采集时间<6 d，无溶血和脂血，HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等传染性指标检测均为阴性。

1.3 方法

1.3.1 亚型红细胞的冰冻保存

从医院患者或家系调查获得的小容量ABO亚型标本，按文献[9]的方法用注射器和真空采血管进行甘油化，分装后保存于-80℃低温冰箱。被确定为亚型的无偿献血者血液，用Cryafugedessi型大容量低温离心机（德国贺利氏公司），按RCF 1600×g离心10 min，或1280×g离心18 min，分离出浓缩红细胞，使红细胞压积控制在0.75±0.05[10]，然后称取需要甘油化红细胞的重量，按终浓度40%[11]计算甘油添加量，用COBE2991TM1型血细胞淘洗机（美国COBE血液技术公司）进行甘油化，甘油的添加速度控制在8～10 ml/min，震荡频率控制在90～100次/min，添加完毕静止平衡30 min，以RCF 1250×g离心10 min，去除多余的水分和甘油，使甘油化红细胞的压积控制在0.60±0.05[11]。分装后于-80℃低温冰箱冰冻保存。分离出的血浆根据需要选择性保存于-30℃低温冰箱。

1.3.2 冰冻亚型红细胞信息库的建立

上述所有进行冰冻保存的ABO亚型红细胞，均详细记录每份红细胞的来源、亚型种类、弱抗原与抗血清的反应强度、红细胞容量、预期用途、分装容器、分装总份数、每份分装量、血浆是否含ABO不规则抗体、是否保存对应血浆以及献血码或姓名、性别、年龄、民族、身份证号码、通讯地址、联系电话等资料，从而建立冰冻亚型红细胞信息库。目前，冰冻亚型红细胞信息库中，分门别类冰冻保存的ABO亚型红细胞共有45例，其中A2 3例，A2B 3例，A3 2例，B3 2例，Ax 3例，BX 4例，Bend 2例，AXB 3例，ABx 6例，Am 1例，Bm 2例，AmB 1例，ABm 1例，Ael 1例，Bel 2例，A3B 1例，AB3 2例，B（A）6例。

1.3.3 冰冻亚型红细胞的使用

1.3.3.1 冰冻亚型红细胞的融化和洗涤 根据不同工作需要，从冰冻亚型红细胞信息库中选择合适的亚型红细胞，将其从低温冰箱中取出，迅速投入37℃水浴箱中，不断轻轻摇动，使红细胞在5 min内迅速融化，继续复温至红细胞表面温度达（20±2）℃[12]。用9%氯化钠溶液洗涤1次，加入量为红细胞标计量的1/2，加入速度40～50 ml/min，震荡频率90～100次/min，静止平衡5 min，以RCF 1250×g离心10 min，去上清；用1.6%氯化钠溶液洗涤1次，加入量和红细胞标计量相同，其他条件同9%氯化钠溶液洗涤；用0.9%氯化钠溶液洗涤2次，根据容器大小以最大量加入，加入速度和震荡频率也可适当加快，每次均静止平衡5 min，以RCF 1250×g离心10 min，去上清。然后按压积红细胞的1.5倍加入合适的保存介质。endprint

1.3.3.2 红细胞融化洗涤后的保存 红细胞融化洗涤后，如作为本站无偿献血者和医院供血库ABO血型鉴定室内质控品时，用MAP红细胞保存液作为保存介质；作为医院供血库ABO血型鉴定质量测评、输血技能比武及ABO血型鉴定技能培训的标本时，用血浆作为保存介质；作为单克隆抗血清等血型检测试剂的质量评估、进货验证的标本时，MAP和血浆均可作为其保存介质。在加入保存介质的红细胞中，按终浓度0.05 mg/ml的比例加入硫酸庆大霉素抑菌剂，混匀后分装贴签，2～6℃冰箱保存备用。

1.3.3.3 冰冻亚型红细胞的使用及范围 每次使用前，将红细胞从2～6℃冰箱中取出，置于室温平衡15～30 min，用完后立即放回2～6℃冰箱保存，每天置于室温时间应≤1 h。每次使用前必须检查红细胞，发现溶血、颜色变化、细菌污染等，即放弃使用并更换新的红细胞。红细胞必须在规定的有效期内使用。以MAP红细胞保存液作为保存介质时的有效期规定为40 d；以血浆作为保存介质时的有效期规定为20 d。几年来，从冰冻亚型红细胞信息库中选择合适的亚型标本，在血站和医院供血库ABO血型鉴定相关工作中得到了一定规模的应用（表1）。

1.4 统计学处理

采用Modern 2000TMV5.0计算机管理软件统计冰冻亚型红细胞使用前（2006年1月～2009年12月）和使用后（2010年1月～2013年12月）无偿献血者人数（不计重复献血者）；根据血型室实验记录统计两组无偿献血者对应的ABO亚型检出例数（不计重复检测者），并计算ABO亚型检出率；采用χ2检验比较两组ABO亚型检出率的差异性，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 冰冻亚型红细胞在血站的应用效果

冰冻亚型红细胞在血站ABO血型鉴定相关工作中应用后，无偿献血者ABO亚型检出率显著提高（表2）。

2.2 冰冻亚型红细胞在医院供血库中的应用效果

冰冻亚型红细胞在医院供血库ABO血型鉴定相关工作中应用后，从患者中检出的疑似亚型标本例数明显增加，经本站血型室协助确认为亚型的标本例数也相应增加（表3）。

3 讨论

ABO亚型的血清学特征是红细胞A、B抗原呈不同程度减弱，所以极易漏检和误判而导致输血不良反应。在日常工作中，若献血者的血液被确定为亚型，其血液一般不能作为正常血液供应临床，常常进行报废处理；如果献血者的亚型因漏检和误判而误输给临床患者，则可引起严重的输血不良反应。若临床患者的血型被确定为亚型，则必须按以下原则选择血液进行输注[13]，即输注红细胞时，尽量选择O型；输注血浆或冷沉淀时，选择AB型或亚型对应的正常血型；输注血小板时，选择亚型对应的正常血型，否则，因患者的亚型漏检和误判而输错血液时，同样可引起严重的输血不良反应。可见，正确鉴定ABO亚型的重要性。

笔者通过认真分析ABO亚型漏检误判的各种原因，利用其抗原减弱的特点，将其作为弱阳性参考品应用于单克隆抗血清等血型检测试剂的质量评估及进货验证；作为弱阳性质控品用于本站无偿献血者及医院供血库ABO血型鉴定的室内质控；作为弱阳性标本用于对医院供血库进行ABO血型鉴定质量测评、输血技能比武及ABO血型鉴定技能培训等工作中，取得良好效果。本研究结果显示，ABO亚型红细胞在血站和医院供血库的相关工作中进行应用后，有效提高了无偿献血者及临床患者的ABO亚型检出率，促进了临床输血的安全性和有效性。

但ABO亚型在人群中只有约1.50/万[14]的比例，远远低于RhD阴性在人群中0.3%～0.5%[15]的比例。所以，笔者将其进行冰冻保存并建立了冰冻亚型红细胞信息库，使日常工作中被确定为ABO亚型且需要报废的血液和标本得到了充分有效的利用，具有良好的经济效益和社会效益，可在采供血机构和医院供血库进行推广应用，但冰冻亚型红细胞的数量需进一步扩大和补充。

[参考文献]

[1] 向东.ABO亚型的检测[J].中国输血杂志，2010，23（8）：577-580.

[2] 喻琼，吴国光，梁延连，等.一个中国汉族ABO血型B亚型家系中发现新的B等位基因[J].中华医学遗传学杂志，2005，22（2）：129-133.

[3] 孙晓琳，关晓珍，于洋，等.36例ABO血型亚型检测及血清学分析[J].中国输血杂志，2012，14（3）：215-218.

[4] 王嵘，路林英，夏杰成，等.29例血型错误的原因分析[J].北京医学，2006，28（2）：120-121.

[5] 董兴华，林正明，江建锋，等.36例疑难配血原因分析及解决方案[J].中国输血杂志，2012，25（5）：481-482.

[6] 杜红梅，何天辉，赵民霞，等.48例非传染性输血反应原因分析[J].中国输血杂志，2013，26（1）：10-11.

[7] 郭文俊，吴端，杨惠，等.医院血库血型鉴定错误原因分析[J].中国输血杂志，2005，18（2）：187-188.

[8] 梁廷波.ABO血型或亚型不合引起的输血反应及救治[J].中国实用外科杂志，2007，27（2）：120-122.

[9] 李雪英，邱玉霞，窦茉莉.冰冻亚型红细胞的保存及应用[J].山东医药，2012，52（35）：90-91.

[10] 张雅莉，张贝，靳朝霞，等.冰冻解冻去甘油红细胞制备过程质量控制方法[J].临床输血与检验，2014，16（1）：68-70.

[11] 赵阳.冰冻红细胞制备工艺的标准化和产品的质量控制[J].中国输血杂志，2010，23（10）：788-790.

[12] 马庆.深低温长期保存红细胞的效果评价[J].中国输血杂志，2012，25（9）：837-840.

[13] 刘景汉，兰炯采.临床输血学[M].北京：人民卫生出版社，2011：256-257.

[14] 向东，刘曦，郭忠慧，等.上海地区中国人群中ABO亚型的研究[J].中国输血杂志，2006，19（1）：25-26.

[15] 魏亚明，吕毅.基础输血学[M].北京：人民卫生出版社，2011：123-145.

（收稿日期：2014-04-14 本文编辑：林利利）endprint

1.3.3.2 红细胞融化洗涤后的保存 红细胞融化洗涤后，如作为本站无偿献血者和医院供血库ABO血型鉴定室内质控品时，用MAP红细胞保存液作为保存介质；作为医院供血库ABO血型鉴定质量测评、输血技能比武及ABO血型鉴定技能培训的标本时，用血浆作为保存介质；作为单克隆抗血清等血型检测试剂的质量评估、进货验证的标本时，MAP和血浆均可作为其保存介质。在加入保存介质的红细胞中，按终浓度0.05 mg/ml的比例加入硫酸庆大霉素抑菌剂，混匀后分装贴签，2～6℃冰箱保存备用。

1.3.3.3 冰冻亚型红细胞的使用及范围 每次使用前，将红细胞从2～6℃冰箱中取出，置于室温平衡15～30 min，用完后立即放回2～6℃冰箱保存，每天置于室温时间应≤1 h。每次使用前必须检查红细胞，发现溶血、颜色变化、细菌污染等，即放弃使用并更换新的红细胞。红细胞必须在规定的有效期内使用。以MAP红细胞保存液作为保存介质时的有效期规定为40 d；以血浆作为保存介质时的有效期规定为20 d。几年来，从冰冻亚型红细胞信息库中选择合适的亚型标本，在血站和医院供血库ABO血型鉴定相关工作中得到了一定规模的应用（表1）。

1.4 统计学处理

采用Modern 2000TMV5.0计算机管理软件统计冰冻亚型红细胞使用前（2006年1月～2009年12月）和使用后（2010年1月～2013年12月）无偿献血者人数（不计重复献血者）；根据血型室实验记录统计两组无偿献血者对应的ABO亚型检出例数（不计重复检测者），并计算ABO亚型检出率；采用χ2检验比较两组ABO亚型检出率的差异性，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 冰冻亚型红细胞在血站的应用效果

冰冻亚型红细胞在血站ABO血型鉴定相关工作中应用后，无偿献血者ABO亚型检出率显著提高（表2）。

2.2 冰冻亚型红细胞在医院供血库中的应用效果

冰冻亚型红细胞在医院供血库ABO血型鉴定相关工作中应用后，从患者中检出的疑似亚型标本例数明显增加，经本站血型室协助确认为亚型的标本例数也相应增加（表3）。

3 讨论

ABO亚型的血清学特征是红细胞A、B抗原呈不同程度减弱，所以极易漏检和误判而导致输血不良反应。在日常工作中，若献血者的血液被确定为亚型，其血液一般不能作为正常血液供应临床，常常进行报废处理；如果献血者的亚型因漏检和误判而误输给临床患者，则可引起严重的输血不良反应。若临床患者的血型被确定为亚型，则必须按以下原则选择血液进行输注[13]，即输注红细胞时，尽量选择O型；输注血浆或冷沉淀时，选择AB型或亚型对应的正常血型；输注血小板时，选择亚型对应的正常血型，否则，因患者的亚型漏检和误判而输错血液时，同样可引起严重的输血不良反应。可见，正确鉴定ABO亚型的重要性。

笔者通过认真分析ABO亚型漏检误判的各种原因，利用其抗原减弱的特点，将其作为弱阳性参考品应用于单克隆抗血清等血型检测试剂的质量评估及进货验证；作为弱阳性质控品用于本站无偿献血者及医院供血库ABO血型鉴定的室内质控；作为弱阳性标本用于对医院供血库进行ABO血型鉴定质量测评、输血技能比武及ABO血型鉴定技能培训等工作中，取得良好效果。本研究结果显示，ABO亚型红细胞在血站和医院供血库的相关工作中进行应用后，有效提高了无偿献血者及临床患者的ABO亚型检出率，促进了临床输血的安全性和有效性。

但ABO亚型在人群中只有约1.50/万[14]的比例，远远低于RhD阴性在人群中0.3%～0.5%[15]的比例。所以，笔者将其进行冰冻保存并建立了冰冻亚型红细胞信息库，使日常工作中被确定为ABO亚型且需要报废的血液和标本得到了充分有效的利用，具有良好的经济效益和社会效益，可在采供血机构和医院供血库进行推广应用，但冰冻亚型红细胞的数量需进一步扩大和补充。

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[1] 向东.ABO亚型的检测[J].中国输血杂志，2010，23（8）：577-580.

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[3] 孙晓琳，关晓珍，于洋，等.36例ABO血型亚型检测及血清学分析[J].中国输血杂志，2012，14（3）：215-218.

[4] 王嵘，路林英，夏杰成，等.29例血型错误的原因分析[J].北京医学，2006，28（2）：120-121.

[5] 董兴华，林正明，江建锋，等.36例疑难配血原因分析及解决方案[J].中国输血杂志，2012，25（5）：481-482.

[6] 杜红梅，何天辉，赵民霞，等.48例非传染性输血反应原因分析[J].中国输血杂志，2013，26（1）：10-11.

[7] 郭文俊，吴端，杨惠，等.医院血库血型鉴定错误原因分析[J].中国输血杂志，2005，18（2）：187-188.

[8] 梁廷波.ABO血型或亚型不合引起的输血反应及救治[J].中国实用外科杂志，2007，27（2）：120-122.

[9] 李雪英，邱玉霞，窦茉莉.冰冻亚型红细胞的保存及应用[J].山东医药，2012，52（35）：90-91.

[10] 张雅莉，张贝，靳朝霞，等.冰冻解冻去甘油红细胞制备过程质量控制方法[J].临床输血与检验，2014，16（1）：68-70.

[11] 赵阳.冰冻红细胞制备工艺的标准化和产品的质量控制[J].中国输血杂志，2010，23（10）：788-790.

[12] 马庆.深低温长期保存红细胞的效果评价[J].中国输血杂志，2012，25（9）：837-840.

[13] 刘景汉，兰炯采.临床输血学[M].北京：人民卫生出版社，2011：256-257.

[14] 向东，刘曦，郭忠慧，等.上海地区中国人群中ABO亚型的研究[J].中国输血杂志，2006，19（1）：25-26.

[15] 魏亚明，吕毅.基础输血学[M].北京：人民卫生出版社，2011：123-145.

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1.3.3.2 红细胞融化洗涤后的保存 红细胞融化洗涤后，如作为本站无偿献血者和医院供血库ABO血型鉴定室内质控品时，用MAP红细胞保存液作为保存介质；作为医院供血库ABO血型鉴定质量测评、输血技能比武及ABO血型鉴定技能培训的标本时，用血浆作为保存介质；作为单克隆抗血清等血型检测试剂的质量评估、进货验证的标本时，MAP和血浆均可作为其保存介质。在加入保存介质的红细胞中，按终浓度0.05 mg/ml的比例加入硫酸庆大霉素抑菌剂，混匀后分装贴签，2～6℃冰箱保存备用。

1.3.3.3 冰冻亚型红细胞的使用及范围 每次使用前，将红细胞从2～6℃冰箱中取出，置于室温平衡15～30 min，用完后立即放回2～6℃冰箱保存，每天置于室温时间应≤1 h。每次使用前必须检查红细胞，发现溶血、颜色变化、细菌污染等，即放弃使用并更换新的红细胞。红细胞必须在规定的有效期内使用。以MAP红细胞保存液作为保存介质时的有效期规定为40 d；以血浆作为保存介质时的有效期规定为20 d。几年来，从冰冻亚型红细胞信息库中选择合适的亚型标本，在血站和医院供血库ABO血型鉴定相关工作中得到了一定规模的应用（表1）。

1.4 统计学处理

采用Modern 2000TMV5.0计算机管理软件统计冰冻亚型红细胞使用前（2006年1月～2009年12月）和使用后（2010年1月～2013年12月）无偿献血者人数（不计重复献血者）；根据血型室实验记录统计两组无偿献血者对应的ABO亚型检出例数（不计重复检测者），并计算ABO亚型检出率；采用χ2检验比较两组ABO亚型检出率的差异性，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 冰冻亚型红细胞在血站的应用效果

冰冻亚型红细胞在血站ABO血型鉴定相关工作中应用后，无偿献血者ABO亚型检出率显著提高（表2）。

2.2 冰冻亚型红细胞在医院供血库中的应用效果

冰冻亚型红细胞在医院供血库ABO血型鉴定相关工作中应用后，从患者中检出的疑似亚型标本例数明显增加，经本站血型室协助确认为亚型的标本例数也相应增加（表3）。

3 讨论

ABO亚型的血清学特征是红细胞A、B抗原呈不同程度减弱，所以极易漏检和误判而导致输血不良反应。在日常工作中，若献血者的血液被确定为亚型，其血液一般不能作为正常血液供应临床，常常进行报废处理；如果献血者的亚型因漏检和误判而误输给临床患者，则可引起严重的输血不良反应。若临床患者的血型被确定为亚型，则必须按以下原则选择血液进行输注[13]，即输注红细胞时，尽量选择O型；输注血浆或冷沉淀时，选择AB型或亚型对应的正常血型；输注血小板时，选择亚型对应的正常血型，否则，因患者的亚型漏检和误判而输错血液时，同样可引起严重的输血不良反应。可见，正确鉴定ABO亚型的重要性。

笔者通过认真分析ABO亚型漏检误判的各种原因，利用其抗原减弱的特点，将其作为弱阳性参考品应用于单克隆抗血清等血型检测试剂的质量评估及进货验证；作为弱阳性质控品用于本站无偿献血者及医院供血库ABO血型鉴定的室内质控；作为弱阳性标本用于对医院供血库进行ABO血型鉴定质量测评、输血技能比武及ABO血型鉴定技能培训等工作中，取得良好效果。本研究结果显示，ABO亚型红细胞在血站和医院供血库的相关工作中进行应用后，有效提高了无偿献血者及临床患者的ABO亚型检出率，促进了临床输血的安全性和有效性。

但ABO亚型在人群中只有约1.50/万[14]的比例，远远低于RhD阴性在人群中0.3%～0.5%[15]的比例。所以，笔者将其进行冰冻保存并建立了冰冻亚型红细胞信息库，使日常工作中被确定为ABO亚型且需要报废的血液和标本得到了充分有效的利用，具有良好的经济效益和社会效益，可在采供血机构和医院供血库进行推广应用，但冰冻亚型红细胞的数量需进一步扩大和补充。

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[5] 董兴华，林正明，江建锋，等.36例疑难配血原因分析及解决方案[J].中国输血杂志，2012，25（5）：481-482.

[6] 杜红梅，何天辉，赵民霞，等.48例非传染性输血反应原因分析[J].中国输血杂志，2013，26（1）：10-11.

[7] 郭文俊，吴端，杨惠，等.医院血库血型鉴定错误原因分析[J].中国输血杂志，2005，18（2）：187-188.

[8] 梁廷波.ABO血型或亚型不合引起的输血反应及救治[J].中国实用外科杂志，2007，27（2）：120-122.

[9] 李雪英，邱玉霞，窦茉莉.冰冻亚型红细胞的保存及应用[J].山东医药，2012，52（35）：90-91.

[10] 张雅莉，张贝，靳朝霞，等.冰冻解冻去甘油红细胞制备过程质量控制方法[J].临床输血与检验，2014，16（1）：68-70.

[11] 赵阳.冰冻红细胞制备工艺的标准化和产品的质量控制[J].中国输血杂志，2010，23（10）：788-790.

[12] 马庆.深低温长期保存红细胞的效果评价[J].中国输血杂志，2012，25（9）：837-840.

[13] 刘景汉，兰炯采.临床输血学[M].北京：人民卫生出版社，2011：256-257.

[14] 向东，刘曦，郭忠慧，等.上海地区中国人群中ABO亚型的研究[J].中国输血杂志，2006，19（1）：25-26.

[15] 魏亚明，吕毅.基础输血学[M].北京：人民卫生出版社，2011：123-145.

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