四制香附对大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响及作用机制研究*

★ 郭慧玲 许茜茜 胡志方 胡律江 赵晓娟 闫柏屹

(1.江西中医药大学 江西 南昌 330004；2.江西中医药高等专科学校 江西 抚州 344000)

香附，为莎草科植物莎草(CyperusrotundusL.)的干燥根茎。其主要含有挥发油类成分。此外，还有糖类、生物碱等。有行气解郁，调经止痛之功效。用于肝郁气滞，胸胁胀痛，疝气疼痛，乳房胀痛，脾胃气滞，脘腹痞闷、胀满疼痛，月经不调，经闭痛经[1]。研究结果表明，从香附石油醚部位分离得到的α-香附酮是香附调经解痛的主要有效成分，且镇痛效果与剂量呈正相关[2]。本课题组前期研究已探明建昌帮四制香附中α-香附酮成分含量优于醋蒸法、醋炒法[3]。本文通过对四制香附作用缩宫素诱导大鼠离体子宫痉挛性收缩的影响考察，探讨香附四制炮制前后对未孕大鼠离体子宫平滑肌收缩作用异同，可为临床应用提供实验依据。

1 实验材料

1.1 试药 己烯雌酚片：合肥久联制药有限公司，批号20100920；缩宫素(SGS)：河南辅仁怀庆堂制药有限公司，批号1105301；95%乙醇：天津市大茂化学试剂厂，批号20110122；石油醚(60～90℃)：天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号20110427；乙酸乙酯：国药集团化学试剂有限公司，批号T20110913；吐温-80为药用级；水为超纯水。吲哚美辛(阿拉丁，批号13931)；硝苯地平(中国食品药品检定研究院，批号100338-201103)。

1.2 实验仪器 powerlab生物信号采集系统(ADIntruments公司)；数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司，型号：HH-2)；麦氏浴槽。

1.3 实验动物 昆明种清洁级大鼠，雌性，体重(200±20g)，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。许可证号：SCXK(湘)2011-0003。

2 实验方法

2.1 供试品制备 生香附、四制香附供试品制备：取生香附、四制香附[3]粗粉各2g，加入8倍量95%乙醇，加热回流提取3次，每次2h，回收溶剂得浸膏，浸膏用3%吐温-80定容至2mL，即得生香附、四制香附供试品，备用。

四制香附石油醚部位供试品制备：取四制香附2g，加入8倍量95%乙醇，加热回流提取3次，每次2h，合并醇液，回收溶剂得浸膏，加水混悬，用石油醚(60～90℃)萃取，即得石油醚部位浸膏。浸膏用3%吐温-80定容至2mL，得四制香附石油醚部位供试品，备用。

2.2 离体子宫标本的制备 取SD未孕雌性大鼠，于实验前连续7d灌胃己烯雌酚0.2mg/100g，以同步化子宫并增加子宫的敏感性，人工造成大鼠的动情期。用颈椎脱臼法将大鼠处死,剪开腹腔，游离卵巢，取出子宫置于充有混合气体(95%O2和5%CO2)的Loke'S液(NaCl 9.2g，KCl 0.42g，CaCl20.24g，NaHCO30.15g，Glucose 1.0g，溶于1000mL超纯水)中清洗，从子宫颈端剪开，将子宫颈端固定于浴槽内固定器底部小钩上，卵巢端连接在张力换能器上。置于含10mL Loke'S液的恒温浴槽中，温度为37±0.1℃，通入95% O2+5% CO2混合气体。通过调节螺母加2g的负荷，平衡60min，每15min换营养液一次，待子宫收缩稳定，自发节律恢复后，开始进行实验。

表1 各供试品对大鼠离体子宫肌张力的实验结果

注：*P<0.05。

图1 各供试品对大鼠离体子宫平滑肌收缩运动抑制率比较

图2 各供试品对大鼠离体子宫平滑肌的影响

表2 拮抗剂对大鼠离体子宫平滑肌的影响

组别(n=15)剂量(mg)肌肉张力(g)给药前给药后平均抑制率(%)对照组-3.1208±0.0282.8055±0.13410.1±0.142生香附组172.7451±0.1692.3304±0.22818.8±0.172*四制香附组173.4205±0.1942.3447±0.09132.1±0.167*石油醚部位组173.4790±0.0232.1598±0.18836.9±0.129*α-香附酮组225μL3.2602±0.0712.5560±0.07121.5±0.285*吲哚美辛组-3.4373±0.3272.6395±0.20823.2±0.275*硝苯地平组-3.3644±0.4483.2095±0.9524.6±0.567吲哚美辛+生香附组173.1919±0.2232.4172±0.09828.2±0.068▲吲哚美辛+四制香附组173.4169±0.1212.0726±0.07644.8±0.004▲吲哚美辛+石油醚部位组173.6127±0.9842.0447±0.49744.3±0.031▲吲哚美辛+α香附酮组225μL2.9790±0.0382.3164±0.59627.5±0.013▲硝苯地平+生香附组173.113±0.03922.687±0.232321.3±0.153*硝苯地平+α-香附酮组173.4231±0.2922.6935±0.42124.1±0.110*硝苯地平+四制香附组173.2427±0.0452.4732±0.98925.4±0.080*硝苯地平+石油醚部位组255μL4.5590±0.2212.8906±0.42838.7±0.136*

注：与对照组比较＊P<0.05，与单用药物组比较▲P<0.05。

2.3 方法 将大鼠随机分为13组，每只大鼠取四条平滑肌标本，按2.2制备子宫平滑肌并分别安置在恒温平滑肌槽中，每个肌槽中分别盛有10mL营养液。每15min更换一次。肌条平稳后加入缩宫素(5U/L)观察记录10min。对照组：给药3%吐温-80，记录给药张力。单用药物组：分别累计加入生香附、四制香附、石油醚部位及α-香附酮使其终浓度分别为1.7g/L、0.0255μL/mL为单用药物组。受体拮抗剂﹢药物组：即子宫加入缩宫素，观察记录10min后，分别加入吲哚美辛、硝苯地平，5min后再加入四种不同药物。用powerlab生物信号采集系统记录子宫平滑肌收缩运动,各组分别观察和记录给药前后10min内的子宫平滑肌子宫肌肉张力，每次给药后冲洗3遍，进行下一次实验观察。

统计给药前及给药后子宫肌肉张力，计算抑制的百分率，应用SPSS18.0软件进行数据处理，结果见表1。

抑制率计算方法：抑制率=(给药前平均张力-给药后平均张力)/给药前平均张力×100%。

图3 不同拮抗剂对大鼠离体子宫平滑肌的影响

3 结果

3.1 生香附、四制香附、石油醚部位、α-香附酮对缩宫素引起大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响 见表1、图1、图2。

3.2 拮抗剂对抗各供试品对大鼠离体子宫平滑肌的作用 依据文献[4-6]，加入拮抗剂考察各供试品对大鼠离体子宫平滑肌的影响，结果见表2、图3。

4 讨论

本实验结果表明，四制香附组及其石油醚部位对大鼠离体子宫平滑肌的抑制率强于α-香附酮组及生香附组，并且与剂量成正相关。由此，从抑制子宫平滑肌收缩的作用强度可说明，四制香附石油醚部位是抗痛经作用的主要有效部位。通过作用机制的初步探讨，提示香附及其炮制品抑制子宫平滑肌收缩的平均张力的作用可能与前列腺素的合成与释放有关，与L型钙通道无关。

[1]国家药典委员会.中国药典一部[S].北京：中国医药科技出版社,2010:241-242.

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[3]胡志方,谢颖,胡律江,等.香附不同炮制方法的品质比较[J].江西中医学院学报,2010,22(6):48-49.

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