雷公藤粘胶分散型贴剂质量标准研究*

★ 许可为 陈丽华 朱若凯 蔡佳 管咏梅

(1.江西中医药大学附属医院药剂科 江西 南昌 330006；2.江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室 江西 南昌 330004；3.江西省医药采购服务中心 江西 南昌 330029)

雷公藤属卫矛科植物，被传统中医认为具有活血化瘀、清热解毒、消肿散结、杀虫止血等功效[1]。雷公藤在治疗风湿、类风湿性关节炎方面的疗效尤为显著，但其口服制剂在长期服用的情况下毒性很大[2-4]。雷公藤贴剂相比较口服制剂可以避免首过效应、降低毒性及不良反应、减少服药次数并延长作用时间[5]。结合文献报道[6,7]，本研究将雷公藤提取物制备成粘胶分散型贴剂，通过薄层色谱法对贴剂处方中的主要有效成分雷公藤甲素进行鉴别，并采用高效液相色谱法对雷公藤甲素进行含量测定，为雷公藤粘胶分散型贴剂的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 电子天平(BT25S，北京赛多利斯科学仪器有限公司)；超声波清洗器(KQ3200E，昆山市超声仪器有限公司)；数显鼓风干燥箱(GZX-9140MBE，上海博迅实业有限公司医疗设备厂)；实验用精密涂布机(TB-04D，天津锴凯科技有限公司)；高效液相色谱仪(Agilent1200，美国安捷伦科技有限公司)；Phenomenox C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm，广州菲罗门科学仪器有限公司)。

1.2 试药 雷公藤提取物(桂林市三棱生物制品有限公司，批号：20120629)；雷公藤甲素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111567-200502)；硬脂酸镁(国药集团化学试剂有限公司，批号：F20111108)；色谱甲醇(美国TEDIA天地试剂有限公司)；氮酮(福建寿宁美菲思生物化学品厂)；丙二醇(分析纯，西陇化工股份有限公司)；无水乙醇(分析纯，上海振兴化工一厂)；双蒸水(实验室自制)；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 雷公藤粘胶分散型贴剂的制备 称取处方比例的雷公藤提取物、氮酮、丙二醇、硬脂酸镁、无水乙醇等；搅拌均匀后，室温静置2h以脱除气泡，于涂布机上进行涂布，涂布完成后室温放置1h；随后于80℃下烘15min以除去有机溶剂，取出后趁热压上背衬即得雷公藤粘胶分散型贴剂。

1.雷公藤甲素对照品；2.供试品；3.阴性对照

2.2 雷公藤甲素的薄层鉴别 取本品0.5g，撕去防粘层并剪成适当大小后转移至具塞锥形瓶中，以20mL无水乙醇超声提取30min后，提取液以0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤作为TLC供试品溶液；取减压干燥至恒重的雷公藤甲素对照品，加无水乙醇制成每1mL中含1mg雷公藤甲素的溶液，作为TLC对照品溶液；按处方比例称取缺少雷公藤提取物的其它试剂与辅料，按“2.1”项下方法制备阴性样品，取阴性样品0.5g，按照上述TLC供试品溶液制备方法制备TLC阴性对照品溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，分别点于同一以0.8%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂(2% 3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2 mol/L氢氧化钠乙醇溶液临用前按1∶3混合)使显色，供试品色谱和对照品色谱在相同位置处应显示相同颜色的斑点，结果见图1。

2.3 雷公藤甲素的含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenox C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：甲醇-水(45∶55)；流速：1mL/min；检测波长：218nm；柱温：30℃；进样量：20μL；色谱见图2。

A.雷公藤甲素对照品；B.供试品；C.阴性对照

2.3.2 对照品溶液的配制 精密称取已经干燥至恒重的雷公藤甲素对照品适量，以45%甲醇水为溶剂进行溶解，制备成每1mL含有10μg雷公藤甲素的溶液，备用。

2.3.3 供试品溶液的配制 取本品0.75g，撕去防粘层并剪成适当大小后转移至具塞锥形瓶中，加45%甲醇水溶液200mL，密塞后，超声提取30min，滤过，将滤液转移至250mL容量瓶中，残渣用45%甲醇水溶液洗涤3次，每次10mL,洗涤液滤过后一并转移至容量瓶中，继续添加45%甲醇水溶液至刻度，摇匀后取出适量并以0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3.4 阴性对照溶液的配制 按处方比例称取除雷公藤提取物之外的试剂与辅料，照“2.1”项下方法制备阴性样品，按“2.3.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3.5 标准曲线的制备 精密量取“2.3.2”项下对照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，分别置于10mL容量瓶中并继续添加45%甲醇水溶液至刻度，摇匀，即得雷公藤甲素系列对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各20μL，按照“2.3.1”项下色谱条件进行HPLC含量测定。以雷公藤甲素的浓度(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y=38.583X+0.4088，r=0.9999；结果表明，雷公藤甲素在0.5～10μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.3.6 精密度试验 精密吸取上述系列对照品溶液中的6μg/mL雷公藤甲素对照品溶液20μL，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样6次。结果平均峰面积为233.75，RSD=0.48%(n=6)，表明精密度良好。

2.3.7 稳定性试验 精密吸取“2.3.3”项下制备的供试品溶液，照“2.3.1”项下色谱条件分别在0，2，4，6，8，10，12 h进样20μL，测定其峰面积。结果峰面积均值为115.56，RSD值为1.10%，说明样品稳定性良好。

2.3.8 重复性试验 取同一批次制备的贴剂样品，照“2.3.3”项下方法制备6份供试品溶液，分别精密吸取20μL按“2.3.1”项下色谱条件进行含量测定。结果计算RSD值为0.68%，表明重复性良好。

表1 加样回收率试验结果(n=9)

表2 贴剂中雷公藤甲素含量测定结果(n=6)

2.3.9 加样回收率试验 精密称取已经测定雷公藤甲素含量的同批样品约0.15g共9份，每三份分别精密加入雷公藤甲素对照品溶液(精密称取已干燥至恒重的雷公藤甲素对照品，加甲醇溶解并制备成100μg/mL的溶液)1.28，1.6，1.92mL，照“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，并照“2.3.1”项下色谱条件测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

2.3.10 样品含量测定 分别取6个批次的雷公藤粘胶分散型贴剂样品各1g，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，并测定不同批次贴剂中的雷公藤甲素含量，结果见表2。

3 讨论

在雷公藤粘胶分散型贴剂的制备过程中，静置脱气的时间和温度的控制很关键。经过考察发现，一般控制在25℃、2h效果较好，如果温度过高或者时间过长很容易致使压敏胶混合物粘性太大而无法涂布。

在雷公藤粘胶分散型贴剂质量标准的制订中，雷公藤甲素是雷公藤药材中的主要有效成分，以雷公藤甲素作为鉴别与含量测定指标。对于雷公藤甲素的薄层鉴别，参考雷公藤片的部颁标准[8]，显色剂需要临用前配置且显色后应立即置于干燥器中保存，否则显色斑点很快就会淡化消失。对于贴剂中雷公藤甲素的含量测定，采用HPLC含量测定方法，该方法精确、专属性强、可靠。

雷公藤甲素含量测定结果显示，1g贴剂中含有1.045mg雷公藤甲素，故暂定贴剂中雷公藤甲素的含量不得低于0.1%。

[1]郭艳红,谭垦.雷公藤的毒性及其研究概况[J].中药材,2007,30(1):112-117.

[2]李玉洁,王强状,郑晓俊.雷公藤治疗类风湿性关节炎的机制研究现状[J].中国药师,2004,7(8):639-641.

[3]童静,马瑶,吴建元,等.雷公藤长期毒性作用及其时间节律性研究[J].中草药,2004,27(12):933-935.

[4]张文娟,涂胜豪,胡永红,等.正常人外周血单个核细胞对雷公藤内酯醇的耐药特征和机制的研究[J].中草药,2009,40(4):601-605.

[5]钱丽萍,阙慧卿,林绥,等.雷公藤贴剂中雷公藤内酯醇释放度的测定[J].现代药物与临床,2011,26(5):403-405.

[6]阙慧卿,钱丽萍,林绥.均匀设计优化雷公藤内酯醇透皮贴剂的处方研究[J].中草药,2012,42(12):2 468-2 470.

[7]钱丽萍,阙慧卿,林绥,等.雷公藤内酯醇生物贴的稳定性研究[J].药物评价研究,2012,35(3):182-184.

[8]雷公藤片质量标准.卫生部颁中药标准[S].中药成方制剂第十六册,WS3-B-3120-98.