全自动毛细管电泳技术在筛查地中海贫血中的临床诊断价值

陈 星，初德强，梁开艳，江笑文

(广州市第八人民医院 检验科，广东 广州510060)

目前，地中海贫血已成为我国南方各省常见的由珠蛋白肽链合成障碍导致的以小细胞低色素性贫血为主要临床表现的单基因遗传性疾病[1-3]。PCR技术与其他分子生物学方法相结合作为其明确诊断的主要方法，由于其要求高、操作方法比较繁琐、费用高及对罕见突变或新突变检出率低，在人群普查时应用明显受限[4]。近年来，血红蛋白电泳分析技术已经逐渐成为诊断和分离异常血红蛋白的首选方法[5]。本研究应用琼脂糖凝胶电泳技术和全自动毛细管电泳技术对我院收治的380例病例进行地中海贫血筛查分析，旨在探讨两种不同技术在地中海贫血筛查中的诊断价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2008年9月—2012年4月我院筛查的380例病例作为研究对象，采用PCR基因诊断技术对全部病例进行确诊。

1.2 方法

采集6 ml静脉血作为标本，分装3个试管，其中1号试管注入已加EDTA-K2的血常规管中，使血细胞分析仪(希斯美康XE5000)检测血常规。另外2个试管分别采用两种不同技术进行血红蛋白电泳。①琼脂糖凝胶电泳技术:采用法国Sebia公司生产的Hydrasys LC电泳系统及配套Hyrys扫描系统，配套血红蛋白电泳试剂盒HYDRAGEL HEMOGLOBIN。按照仪器操作说明书将标本进行洗涤、溶血制作溶血液；点样；将点样梳放入电泳单元后，选择相应程序进行电泳；30 min仪器自动完成电泳、烘干等步骤；电泳完毕及时取出胶片，放入仪器染色单元，选择相应程序，仪器自动进行冲洗、染色、脱色、烘干等步骤；染色结束后取出胶片，用配套的Hyrys系统扫描出结果。②全自动毛细管电泳技术:采用法国Sebia公司生产的Capillarys 2全自动毛细管电泳仪及其配套血红蛋白电泳试剂盒CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E)。按照仪器操作说明书进行，标本不须洗涤和溶血，直接将抗凝标本离心沉淀，取红细胞加入试管中(标本量>50 μl)。把装有标本的试管按顺序放在仪器配套的检测架上(一个检测架一次可检测7个标本，7个标本为一批，可同时检测多批标本)，在检测架第八管位置加入大约4.0 ml的溶血试剂。把检测架送入Capillarys 2全自动毛细管电泳仪进行血红蛋白电泳检测，约30 min后全部检测程序完毕，查看结果。

1.3 评定指标

患者如果出现血常规异常，且MCV低于82 fl、MCH 低于27 pg，HbA2不超过3.2%，但血清铁正常，可考虑为α-地中海贫血;患者如果HbA2不小于3.5%，HbF正常或者增加，可考虑为β-地中海贫血。

1.4 统计学处理

2 结果

采用PCR基因诊断技术在380例病例中共确诊108例地中海贫血患者。对于α-地中海贫血，毛细管电泳技术的检出率为90.91%，明显高于凝胶电泳技术的检出率65.91%；对于β-地中海贫血，毛细管电泳技术和凝胶电泳技术的检出率分别为94.23%和71.15%，毛细管电泳技术检出率明显高于凝胶电泳技术，差异有统计学意义(P<0.05)。对于HbH病的检出率，两组比较无统计学差异(P>0.05)，见表1。

表1 两种电泳技术的检出率对比n(%)

对各型地中海贫血患者红细胞( RBC)、血红蛋白( Hb)、平均红细胞体积( MCV)及平均红细胞血红蛋白含量(MCH)等指标进行分析发现，地中海贫血患者的MCV及MCH均值相对于异常血红蛋白病HbE、 HbCS的均值稍低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 各型RBC、Hb、MCV、MCH指标情况对比

注：组间比较，＊P<0.05

3 讨论

地中海贫血主要是由于珠蛋白基因缺失或点突变导致组成珠蛋白的α、β、γ、δ链等4种肽链中相应肽链的合成障碍[6]，最终导致血红蛋白组分的改变[7,8]，体积减少或寿命降低。通常将地中海贫血分为α、β、δβ和δ等4种类型，其中以β和α型地中海贫血最为常见。目前，采用PCR基因诊断技术对地中海贫血基本可以确诊，但技术要求高且操作复杂，加之费用较高，使其仍然不能在我国人群筛查中普及应用。

在本研究中，以经该技术进行确诊的108例地中海贫血患者为参照，比较全自动毛细管电泳技术和琼脂糖凝胶电泳技术在地中海贫血筛查中的应用价值，结果发现，对于α-地中海贫血，毛细管电泳技术的检出率为90.91%，明显高于凝胶电泳技术的检出率65.91%；对于β-地中海贫血，毛细管电泳技术和凝胶电泳技术的检出率分别为94.23%和71.15%，毛细管电泳技术的检出率明显高于凝胶电泳技术。而对于HbH病的检出率两组比较并无统计学差异。由此可见，相对于琼脂糖凝胶电泳技术，全自动毛细管电泳技术在地中海贫血筛查中具有更强的优越性。主要由于全自毛细管电泳技术通过在充满电泳液的石英毛细管中进行电泳，使得红细胞样品在溶血试剂中被稀释后注射到毛细管的负极端进行电泳分离，通过靠近正极端的415 nm光波检测装置对血红蛋白进行检测，可以准确地对血红蛋白组分进行相对定量[9]。相对于琼脂糖凝胶电泳技术样品处理过程的繁琐复杂，人工操作步骤多，导致精确度不够等不足，全自动毛细管电泳技术样品处理简单，自动化处理可以有效地避免人工干扰，精确度明显优于琼脂糖凝胶电泳技术，并且具有持续时间短、经济实惠等优势，对于地中海贫血的筛查及诊断具有较高的特异性，可以为进一步基因诊断和遗传咨询提供一定的依据。在本研究中，地中海贫血的MCV及MCH均值处于稍微偏低的水平，相比之下，异常血红蛋白病HbE、 HbCS值则稍高，甚至处于正常范围，说明地中海贫血患者红细胞体积减少、脆性降低，在一定程度上可为其筛查提供帮助。

综上所述，应用全自毛细管电泳技术在地中海贫血的筛查和诊断中具有精确度高、操作简便、时间短、经济实惠等优点，如果应用于临床，能够为我国的诊断地中海贫血工作提供更有力的技术保障。

作者简介：陈星(1980-)，女，本科，主管技师，主要从事临床检验方向的研究。

参考文献：

[1] 毛丽华,刘军贤,陈 萍,等.拉曼光镊流式细胞仪的构建及其在地中海贫血分析中的应用[J].分析化学,2010,38(11):1578.

[2]阮丽明,周艳洁,朱茂灵,等.全自动毛细管电泳系统在地中海贫血筛查中的临床应用[J].广西医学,2012,34(2):178.

[3]王 珺,云妙英,崔箭,等.广西壮族地区地中海贫血的研究进展[J].中央民族大学学报(自然科学版),2010,19(2):92.

[4]余永雄,黄 丽,陈 唯,等.梧州婚配群体的α地中海贫血携带者筛查与基因诊断分析[J].重庆医学,2012,41(10):1002.

[5]申芫子,李哲刚,潘干华,等.广东省佛山市育龄人群地中海贫血的分子流行病学调查[J].中国计划生育学杂志,2010,3(174):160.

[6]张 莉,叶国永,黄国珍,等.深圳市地中海贫血患者基因诊断结果分析[J].中国全科医学,2012,15(23):2677.

[7]陈宏平,林国钦,林龙辉,等.地中海贫血并贫血性心脏病1例[J].辽宁医学院学报,2013,34(2):8.

[8]黄海龙,徐两蒲,林 娜,等.福州地区153例地中海贫血基因突变类型、额率及产前诊断研究[J].海峡预防医学杂志,2009,15(4):1.

[9]周玉球.地中海贫血表型筛查和基因诊断的现状及展望[J].中华检验医学杂志,2012,35(5):394-398.