猪感染牛病毒性腹泻病毒研究进展

陶 洁，廖金虎，张 倩，张信军，朱国强*

(1.扬州大学兽医学院，江苏 扬州 225009；2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009)

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)和猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)、绵羊边界病毒(Border disease virus，BDV)同属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)[1]，而且在血清学上具有一定的交叉反应，它们所引起的传染性疾病给各国养牛、养猪和养羊业造成了严重的危害。牛病毒性腹泻病(BVD)呈世界性流行，给各国养殖业造成了严重的经济损失[2]。但直到2012年，世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties，OIE)才将该病列为必须通报的疾病。BVDV的宿主谱非常广，除了感染牛，还可以引起猪、羊、鹿、骆驼和多种野生动物发病[3-6]。感染宿主的不同及病毒株遗传背景的不同，可使BVDV感染引起相应不同的临床症状。CSFV仅感染本地猪和野猪，通常引起以高热、昏睡、黄痢、耳部、腹部和腿部皮肤坏死等为特征症状的致死性疾病。而猪感染BVDV不表现出临床症状，或出现类似于猪瘟的症状，因而不仅给猪瘟的预防和控制带来了很大的困难，也使BVDV的防控难上加难。目前，很多国家已经开始重视这个问题。

1 猪源BVDV的流行史

猪感染BVDV的历史悠久，早在二十世纪六十年代，在澳大利亚进行猪瘟检疫时，从一些亚临床症状的猪群内检测到CSFV琼扩抗体，当时认为可能是由于猪群感染低毒力CSFV引起的。但后来在其他地区不表现猪瘟症状及病理变化的猪体内也能检测到琼扩抗体，因此人们开始怀疑利用琼扩试验进行猪瘟检疫的可靠性，并认为可能是BVDV感染所致[7]。1968年，Snowdon等用不同的BVDV株实验性感染猪，结果发现部分猪体内产生BVDV抗体，而有些猪体内能同时产生BVDV和CSFV交叉抗体，并能够抵抗CSFV强毒的攻击[8]。由此推测，澳大利亚猪群中检测到的CSFV抗体很有可能就是BVDV感染的结果。直到1973年，Fernelius等证实了这种推测，他们从自然感染发病的猪体内分离到BVDV，首次证实BVDV可以自然感染猪[9]。随后陆续有BVDV自然感染猪的报道，Terpstra等自1976年以来总共检测出19起由BVDV自然感染猪引起的类似猪瘟的病例[10]。Wensvoort等(1988)报道了8例由于使用污染有BVDV疫苗而引起猪发病的病例[11]。1992年，Paton等通过血清学检查，证实了英国的一起曾被诊断为“猪瘟”的疾病其实是由于BVDV自然感染猪而引起的。国内也在1996年由王新平等通过RT-PCR手段从疑似猪瘟病料中扩增出了BVDV的基因片段；将病料处理后接种细胞，出现BVDV典型的拉网状病变，从而首次证实了BVDV可自然感染猪并引起类似猪瘟的临床症状及病理变化[12]。近年来，各国猪群中感染BVDV的趋势日益增加，澳大利亚、爱尔兰和德国等地区猪群中BVDV的抗体阳性率达3%～40%，荷兰为15%～20%，挪威和丹麦分别约2.2%和6.4%，北美达2%～43%[5,13-14]。1997～1998年在新西兰暴发的猪瘟，也由于BVDV抗体的存在很大程度上干扰了CSFV的血清学筛查[15]。

目前，国内猪群中BVDV的感染现状也相当严重，已经成为一个不容忽视的问题。最早是1996年王新平等分离到的1型猪源BVDV分离株ZM-95。吴文辉等在2007年和2008年对上海奉贤地区疑似猪瘟样品及不同批次的猪瘟弱毒苗进行BVDV检测，发现两者的阳性率分别为35.1%和64.1%[16]；在2009年和2010年又对该地区及邻近区域的疑似猪瘟送检生猪样品进行检测，发现BVDV阳性率分别高达 80.39%和 80.72%[17]。2004～2007年，戴益民等报道江西省猪群中BVDV感染率为10%～15.8%[18]。宋永峰等在2006年利用RT-PCR对浙江等6个省市的43份猪病料进行检测，结果检出BVDV阳性率达16.3%，而且主要为BVDV-1a和BVDV-1b亚型[19]。在2005～2009年间，对国内20多个省市300多个规模化养猪场进行了BVDV的流行病学调查，发现各年度的BVDV阳性率分别为22.2%、43.1%、46.4%、66.7%和80.8%[20-22]，呈逐年扩增的趋势且势态严重。此外，利用套式RT-PCR在2007～2010年对国内部分地区的临床样品进行筛查，检出BVDV的阳性率分别为23.1%(2007年)、27.7%(2008 年)、33.6%(2009 年)和 23.6%(2010年)，并且主要归属于BVDV-1a、BVDV-1b、BVDV-1m和BVDV-1o亚群[23]。梁晟等对2010～2012年广西部分地区猪病进行调查，结果表明BVDV的检出率为26.92%[24]。而2012年闽西地区部分猪场的BVDV阳性率高达94.4%，其中种猪、育肥猪、保育猪和仔猪的阳性率分别为38.5%、17.3%、2.1%和27.4%[25]。以上数据已表明目前各国猪群中BVDV感染程度相当严重，应引起广足够的重视，并及时做好防控工作。

2 猪感染BVDV的临床症状

一般情况下，猪感染BVDV呈亚临床感染，不表现出明显症状，也有的猪出现轻微发热症状。BVDV自然感染猪出现类似于猪瘟临床症状。母猪自然感染BVDV可致受孕率降低、产仔数下降、流产和产死胎等症状。仔猪先天性感染BVDV可以产生抗体，也有的发展为持续性感染，持续性感染猪终身排毒并成为传染源。一般2～4周龄仔猪对BVDV易感，多数于出生后4个月内死亡，也有的在出生后数天内便死亡。猪感染BVDV会出现的临床症状主要包括被毛粗乱、生长迟缓、贫血，有的还可见结膜炎、多发性关节炎和腹泻；病理变化主要以慢性胃肠炎和败血症为特征，类似于慢性猪瘟。实验性感染猪常出现一过性白细胞减少症、充血、慢性胃肠炎和以淋巴结、心外膜和肾脏出血为特征的败血症。由于猪瘟感染也常见充血和白细胞减少症症状，因此容易将猪群中得BVDV感染与CSFV感染相混淆。猪感染BVDV表现出的临床症状和病例变化差异很大，主要取决于感染的BVDV株种类和怀孕母猪感染BVDV时所处的阶段。在新西兰和法国曾有一病例，母猪怀孕4个月内接种了污染有瘟病毒的猪瘟疫苗，产下的仔猪表现出类似于低毒力CSFV感染引起的症状[26]。我国长岭地区曾发生过10日龄仔猪感染BVDV的病例，出生后5 d～6 d的仔猪发病，表现为震颤、站立不稳和腹泻；病理剖检可见败血症变化，浆膜和皮下有出血点，肾皮质有雀斑状出血点，淋巴结肿大及周边性出血[27]。

3 猪源BVDV的传染源

一直以来人们都认为牛是猪感染BVDV的主要传染源，周边地区有牛群存在的猪场中猪的BVDV血清阳性率往往比较高[28]。Stewart等从与接种过BVDV疫苗的牛密切接触的猪体内检测到BVDV抗体[29]。此外，通过饲喂污染BVDV的牛奶或牛内脏等食料也可引起猪感染。值得重视的是污染BVDV的猪瘟疫苗也是一个非常重要的感染源。由于BVDV的筛查达不到100%，因此在猪瘟疫苗制作过程中极易使用一些污染BVDV的血清和细胞系而导致猪瘟疫苗污染[30-32]。范学政等对23批次的猪瘟疫苗进行BVDV检测，发现BVDV污染率达21.74%[33]；叶兆美等对19份猪瘟和蓝耳病活疫苗进行BVDV检测，发现BVDV污染率为10.53%[34]。Vannier等报道法国一猪场由于使用了污染BVDV的假狂犬病疫苗而导致母猪低产仔率和高产畸形胎率[35]。Woods等从接种了污染BVDV的猪传染性胃肠炎疫苗的小猪体内分离到了一株BVDV-C[36]。Yang等报道某猪场接种过猪瘟疫苗后，在猪体内检测到较高的CSFV抗体，同时还可以检测到BVDV抗体，表明使用的猪瘟疫苗内肯定污染有BVDV[37]。这些数据足以证明，生物制品生产管理和安全的重要性，只有从源头上控制了感染来源的可能性，才有可能预防和控制BVDV在牛群和猪群中的感染。

4 猪感染BVDV和CSFV的鉴别诊断

瘟病毒属成员的抗原结构具有一定的相似性，因此现有的血清学检测不能有效的将它们区分开。猪瘟检疫时，常常会将BVDV感染误认为CSFV感染，从而给CSFV的流行病学调查及其防控带来困难。但有报道根据血清中BVDV和CSFV中和抗体滴度的高低，可区别猪的这两种病毒感染；通常同源病毒感染产生的抗体滴度会明显高于异源病毒感染产生的抗体滴度，即猪感染BVDV后，其血清内BVDV的抗体滴度明显比CSFV的抗体滴度高。由于目前临床上的猪瘟感染病例很少会出现典型症状，因此必须通过实验室手段进行诊断。采用单克隆抗体技术可以将BVDV和CSFV进行鉴别诊断，如病毒中和试验、间接免疫荧光(IFA)及ELISA等。

在众多检测方法中，病毒分离仍是灵敏度高、特异性较强的一种手段。组织匀浆物、血清、血浆、白细胞层和红细胞等均可用于病毒的分离。扁桃体、脾脏、肾脏、回盲肠淋巴结和咽后淋巴结等组织中的病毒含量较高。但该方法费时、费力，所以不适合用于临床样品的快速检测诊断。相对而言，RT-PCR是一种快速、特异、敏感的手段。许多学者建立了套式PCR等方法来鉴别诊断BVDV和CSFV[38-40]。邓宇等建立了猪源BVDV的实时荧光定量PCR检测方法[41]。最近，Zhang等建立了一种三重Taq-Man荧光定量RT-PCR，用于区分野毒CSFV、猪瘟兔化疫苗和BVDV-1[42]。这些分子生物学技术也可用于筛查处于病程早期的病猪。此外，由于持续性感染猪体内缺乏相关中和抗体，因此用血清学方法检测容易造成漏检，而分子生物学技术可以避免这一问题。但在实际诊断时，建议配合使用多种检测方法。

5 小结与展望

近年来，BVDV在鹿群、羊群、猪群中感染率越来越高，特别是猪群中BVDV的感染。由于BVDV和CSFV在血清学上存在一定的交叉反应，因此常常混淆了猪瘟的监测，给猪瘟的防控带来了严重的困难。最近，陆续有从猪瘟疫苗中检出BVDV的报道。这种生产制度上的管理缺陷，直接或间接地给养猪业带来了不可计量的经济损失。由于牛血清和细胞系也极易污染BVDV，因此为了提高BVDV流行病学调查的可靠性，每次使用新批次的牛血清培养细胞前或用细胞进行病毒分离时，都必须对血清和细胞进行严格的BVDV筛查，以防由于实验室操作原因而误报BVDV的检出率。

一般认为猪源BVDV主要来源于牛，周边有BVDV流行的牛群存在时，猪群中BVDV的抗体阳性率会偏高，但这种理论至今为止没有足够、确切的数据来证实。相反，大量调查研究数据表明生物试剂的污染特别是猪瘟疫苗、牛血清及细胞系的污染，造成了BVDV在牛群和猪群中的广泛流行。因此，我们认为猪源BVDV来源于污染的生物试剂的可能性要远大于来源于牛的可能性。所以，有效预防和控制BVDV在猪群和牛群中的感染，就要加强生物试剂的生产和安全管理，从源头上遏制BVDV污染的可能性，这一点应该引起广大兽医界人士的重视。

[1]Ridpath J F,Neill J D,Vilcek S,et al.Multiple outbreaks of severe acute BVDV in North America occurring between 1993 and 1995 linked to the same BVDV2 strain[J].Vet Microbiol,2006,114(3-4):196-204.

[2]Van Campen H.Epidemiology and control of BVD in the U.S[J].Vet Microbiol,2010,142(1):94-98.

[3]Juliá S C M,Craig M I,Jiménez L S,et al.First report of BVDV circulation in sheep in Argentina[J].Prev Vet Med,2009,90(3):274-277.

[4]Intisar K S,Ali Y H,Khalafalla A M I,et al.The first report on the prevalence of pestivirus infection in camels in Sudan[J].Trop Anim Health Pro,2010,42(6):1203-1207.

[5]Lφken T K J,Larsen I L.Pestivirus infections in Norway:Serological investigations in cattle,sheep and pigs[J].Acta Vet Scand,1990,32(1):27-34.

[6]Passler T,Walz P H,Ditchkoff S S,et al.Experimental persistent infection with bovine viral diarrhea virus in white-tailed deer[J].Vet Microbiol,2007,122(3):350-356.

[7]Flynn D M,Jones T E.The position regarding swine fever in Victoria[J].Aust Vet J,1964,40(4):131-137.

[8]Snowdon W A,French E L.The bovine mucosal disease-swine fever virus complex in pigs[J].Aust Vet J,1968,44(4):179-184.

[9]Fernelius A L,Amtower W C,Lambert G,et al.Bovine viral diarrhea virus in swine:characteristics of virus recored from naturally and experimentally infected swine[J].Can J Comp Med,1973,13(1):8-12.

[10]Terpstra C,Wensvoort G.Natural infections of pigs with bovine viral diarrhoea virus associated with signs resembling swine fever[J].Res Vet Sci,1988,45(2):137-142.

[11]Wensvoort G,Terpstra C.Bovine viral diarrhoea virus infections in piglets born to sows vaccinated against swine fever with contaminated vaccine[J].Res Vet Sci,1988,45(2):143-148.

[12]王新平，涂长春，李红卫，等.从疑似猪瘟病料中检出牛病毒性腹泻病毒[J].中国兽医学报，1996，16(4)：341-345.

[13]Graham D A,Calvert V,German A,et al.Pestiviral infections in sheep and pigs in Northern Ireland[J].Vet Rec,2001,148(3):69-72.

[14]Liess B,Moennig V.Ruminant pestivirus infection in pigs[J].Rev Sci Tech OIE,1990,9(1):151-161.

[15]De Smit A,Eble P,de Kluijver E,et al.Laboratory experience during the classical swine fever virus epizootic in the Netherlands in 1997-1998[J].Vet Microbiol,2000,73(2):197-208.

[16]吴文辉，余红梅，刘婧怡.对生猪感染BVDV的实验检测[J].上海畜牧兽医通讯，2009，(4)：25.

[17]吴文辉，卫秀余，余红梅，等.猪群BVDV感染状况调查及成因初步分析[J].上海畜牧兽医通讯，2011，(4)：35-37.

[18]戴益民，张文波，刘文峰，等.江西部分地区猪瘟疑似病例中牛病毒性腹泻病毒感染情况的初步调查[J].中国兽医杂志，2010，46(7)：12-14.

[19]宋永峰，张志，张燕霞，等.猪源牛病毒性腹泻病毒的流行初探[J].中国动物检疫，2008，25(7)：25-27.

[20]卫秀余.2006年猪病诊断回顾[J].养猪，2007，(2)：25-26.

[21]卫秀余，曹玉良.2007年猪病诊断回顾和2008年流行趋势预测[J].养猪，2008，(2)：44-45.

[22]卫秀余，沈强，余红梅，等.2009年猪病诊断回顾[J].今日养猪业，2010，(1)：34-35.

[23]邓宇，蔺涛，张荣，等.猪源牛病毒性腹泻病毒套式PCR检测方法的建立[J].中国兽医学报，2012，32(5)：654-657.

[24]梁晟，郑敏，郑列丰，等.猪群常见疫病混合感染情况调查[J].中国畜牧兽医，2013，40(6)：221-223.

[25]戴爱玲，魏春华，黄思琼，等.福建龙岩规模化猪场BVDV感染的血清学调查[J].龙岩学院学报，2013，31(2)：50-53.

[26]Kulcsar G,Soos P,Kucsera L.Pathogenicity of a bovine viral diarrhoea virus strain in pregnant sows:short communication[J].Acta Vet Hung,2001,49(1):117-120.

[27]李娇，祖立闯，王金良，等.警惕猪群中牛病毒性腹泻病毒感染[J].养猪，2013，(5)：102-104.

[28]王新平，周绪斌.猪感染牛病毒性腹泻病毒的研究进展[J].动物医学进展，1998，19(1)：1-4.

[29]Stewart W C,Carbrey E A,Jenney E W,et al.Bovine viral diarrhea infection in pigs[J].J Am Vet Med Ass,1971,159(11):1556-1563.

[30]Bolin S R,Ridpath J F.Prevalence of bovine viral diarrhea virus genotypes and antibody against those viral genotypes in fetal bovine serum[J].J Vet Diag Invest,1998,10(2):135-139.

[31]Levings R L,Wessman S J.Bovine viral diarrhea virus contamination of nutrient serum,cell cultures and viral vaccines[J].Dev Biol Stand,1990,75:177-181.

[32]Uryvaev L V,Dedova A V,Dedova L V,et al.Contamination of cell cultures with bovine viral diarrhea virus(BVDV)[J].B Exp Biol Med,2012,153(1):77-81.

[33]范学政，宁宜宝，王琴，等.用RT-PCR方法检测猪瘟细胞苗中污染牛病毒性腹泻病毒[J].中国兽医杂志，2010，(1)：8-10.

[34]叶兆美.猪瘟和蓝耳病疫苗中BVDV和PCV污染情况调查[J].四川畜牧兽医，2012，39(3)：32-33.

[35]Vannier P,Leforban Y,Carnero R,et al.Contamination of a live virus vaccine against pseudorabies(Aujeszky's disease)by an ovine pestivirus pathogen for the pig[J].Ann Rech Vet,1988,19(4):283-290.

[36]Woods R D,Kunkle R A,Ridpath J F,et al.Bovine viral diarrhea virus isolated from fetal calf serum enhances pathogenicity of attenuated transmissible gastroenteritis virus in neonatal pigs[J].J Vet Diag Invest,1999,11(5):400-407.

[37]林燕清，朱礼倩，陶洁，等.牛病毒性腹泻病毒基因2型代表株全基因组序列分析[J].中国预防兽医学报，2011，33(1)：23-27.

[38]Wirz B,Tratschin J D,Müller H K,et al.Detection of hog cholera virus and differentiation from other pestiviruses by polymerase chain reaction[J].J Clin Microbiol,1993,31(5):1148-1154.

[39]Katz J,Ridpath J,Bolin S.Presumptive diagnostic differentiation of hog cholera virus from bovine viral diarrhea and border disease viruses by using a cDNA nested-amplification approach[J].J Clin Microbiol,1993,31(3):565-568.

[40]Sullivan D G,Akkina R K.A nested polymerase chain reaction assay to differentiate pestiviruses[J].Virus Res,1995,38(2):231-239.

[41]邓宇，张荣，丛雁方，等.猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量 PCR检测方法的建立[J].畜牧兽医学报，2011，42(7)：1046-1050.

[42]Zhang Xing-juan,Han Qiu-ying,Sun Yuan,et al.Development of a triplexTaqMan real-time RT-PCR assay for differential detection of wild-type and HCLV vaccine strains of classical swine fever virus and bovine viral diarrhea virus 1[J].Res Vet Sci,2012,92(3):512-518.