顶空毛细管气相色谱法测定血栓通注射液中有机溶剂残留量

2014-08-11张赟赟严赟罗佚

中医药信息 2014年4期

张赟赟，严赟，罗佚

(1.广西中医药研究院，广西南宁 530022;2.广西壮族自治区食品药品检验所，广西南宁 530021)

血栓通注射液，又名田七人参注射液，可改善缺血心肌供血，建立侧支循环，增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量，提高心肌耐缺氧力，具有活血祛瘀，通脉活络功效。临床用于瘀血阻络，中风偏瘫，胸痹心痛及视网膜中央静脉阻塞等症。其主要成分为三七总皂苷，由于三七总皂苷在提取精制过程中使用了有机溶剂提取、大孔树脂分离纯化等手段，可能会带来醇类、烷烃类和苯类等残留物，给用药安全带来隐患。本实验参考《中国药典》2010年版一部“三七总皂苷”项下及“大孔吸附树脂分离纯化中药提取液的技术要求(暂行)”对多批次市售血栓通注射液中可能存在的甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯和二乙烯苯等有机溶剂进行研究并测定。

1 仪器与试药

岛津GC－2010气相色谱仪;Agilent 7864E顶空进样器;甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯、二乙烯苯(分析纯);N，N－二甲基甲酰胺(色谱纯);水为二次重蒸水;血栓通注射液为市售随机抽取6个企业15批样品。

2 实验方法

2.1 色谱条件

DB－624毛细管柱(柱长30m，内径0.25mm，膜厚度1.40μm);柱温为程序升温，初始温度60℃，保持2min，以每分钟3℃的速率升温至130℃，保持3min，再以每分钟40℃的速率升温至200℃，保持6min;进样口温度230℃;检测器温度250℃;顶空进样，顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30min;进样量:1μl;分流进样，分流比为1∶1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备精密称取甲醇0.2g、乙醇 0.2g、丙酮 0.2g、正己烷 0.2g、乙酸乙酯0.2g、正丁醇 0.2g、苯 0.02g、甲苯 0.2g、二甲苯 0.2g、1，2 －二乙基苯 0.2g、二乙烯苯 0.2g，置同一 100ml量瓶中，加N，N－二甲基甲酰胺至刻度，摇匀，再精密量取1ml置50ml量瓶中，加25%N，N－二甲基甲酰胺至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备精密量取血栓通注射液1.0ml，置20ml顶空瓶中，精密加入25%N，N －二甲基乙酰胺溶液4ml，密封，摇匀，即得。

2.3 线性关系考察

精密称取甲醇0.2g、乙醇 0.2g、丙酮0.2g、正己烷0.2g、乙酸乙酯 0.2g、正丁醇 0.2g、苯 0.02g、甲苯0.2g、二甲苯 0.2g、1，2 －二乙基苯 0.2g、二乙烯苯0.2g，置同一50ml量瓶中，加N，N－二甲基甲酰胺至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。分别精密量取混合对照品储备液 5.0、2.5、1.0、0.50ml，置 50ml量瓶中，加25%N，N－二甲基甲酰胺至刻度，摇匀，得线性1～4号混合对照品溶液;再分别精密量取线性2号混合对照品溶液 10.0、5.0ml置 100ml量瓶中，加 25%N，N－二甲基甲酰胺至刻度，摇匀，得线性5、6号混合对照品溶液。再精密量取线性6号混合对照品溶液1.00ml置10ml量瓶中，加25%N，N－二甲基甲酰胺至刻度，摇匀，得线性7号混合对照品溶液。分别精密吸取1～7号混合对照品溶液5ml，置20ml顶空进样瓶中，混匀，吸取1μl，注入气相色谱仪测定，结果见表1。以进样浓度C(mg/ml)为横坐标X、对照品峰面积为纵坐标Y，进行回归计算，得回归方程。结果以上溶剂在相应浓度范围内线性关系良好。

表1 11种溶剂的回归方程和检出限

2.4 精密度试验

取2.2.1项下的混合对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次。分别记录甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯、二乙烯苯的峰面积，RSD分别为2.8%、1.3%、2.1%、2.6%、2.8%、1.7%、2.6%、1.9%、2.5%、2.6%、2.3%。结果表明，本法的精密度良好。

2.5 重复性实验

由于样品中只有部分批次中有乙醇和丙酮被检出，其他溶剂均未检出，故重复性试验未做。试验精密度可参考回收率试验数值。

2.6 准确度试验

精密量取已知含量的血栓通注射液1ml，置20ml顶空进样瓶中，精密加入2.2.1项下混合对照品溶液4.0ml，摇匀，按上述色谱条件，平行测定6次，计算加样回收率。结果甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯、二乙烯苯平均回收率和 RSD分别为 99.5%(RSD=2.9%)、101.8%(RSD=1.8%)、103.4%(RSD=2.1%)、100.2%(RSD=3.3%)、102.8%(RSD=1.0%)、102.4%(RSD=2.2%)、104.2%(RSD=2.9%)、103.2%(RSD=4.0%)、101.9%(RSD=2.9%)、103.7%(RSD=3.9%)、100.6(RSD=1.8%)。表明本方法准确度较高。

3 结果与讨论

按拟订的测定方法，共随机抽取6个企业15批血栓通注射液，测定甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯和二乙烯苯的含量。结果显示，有5个企业部分批次检出乙醇和丙酮2种有机溶剂，乙醇含量在0.001% ～0.033%、丙酮含量在0.0002% ～0.0008%，其他有机溶剂均未检出。

本法能有效地控制血栓通射液中的残留溶剂。由于血栓通注射液的质量标准形成年代较早，对于生产工艺及很多关键的技术参数都未细化，2010版《中国药典》也未有对该品种有机溶剂残留量的控制方法，为了避免造成生产企业在生产上的随意性，有必要建立对血栓通注射液中残留溶剂的测定项目。

附图: