尿畅舒胶囊对卵巢切除后大鼠膀胱结构的影响

曾文彤,田 英,梅雪峰,夏雨果,赵 娟,邹四海

(1.成都中医药大学附属医院 泌尿外科，成都 610072；2.成都中医药大学，成都 610075)

膀胱过度活动症(overactive bladder,OAB)是指逼尿肌无意识收缩, 以尿急、尿频、夜尿增多为主要特点，伴有或不伴急迫性尿失禁等症状[1]。在世界范围内发病率较高，且对患者生活质量影响较大，逐渐受到国内外学者的重视[2]。膀胱过度活动症可归属于中医“淋证”“劳淋”范畴。绝经后女性肾气渐衰、天癸将竭，阴阳失调，致膀胱气化不利，开阖失司，若兼情志不舒，肝气郁结，则气滞血瘀。故绝经后女性更容易出现膀胱过度活动症。西医认为其发病原因可能与激素代谢失调等有关。绝经后女性因卵巢功能衰竭，体内雌激素水平缺乏，导致膀胱、尿道结构发生改变，协同功能失调，尿路上皮细胞功能障碍而出现膀胱敏感性增高，容量减少，残余尿量增加及逼尿肌不稳定等尿路症状。补充雌激素是其治疗的主要方法。中药复方制剂尿畅舒胶囊具有雌激素样作用，临床用于治疗绝经后膀胱过度活动症能有效缓解患者症状，改善其排尿情况。本实验采用去卵巢方法制作大鼠雌激素缺乏模型，用尿畅舒胶囊进行治疗，观察比较去势雌鼠膀胱重量、膀胱壁黏膜及肌层厚度变化，研究尿畅舒胶囊对大鼠膀胱结构的影响，从而探讨尿畅舒胶囊治疗绝经后膀胱过度活动症的作用机制。

1 材料与方法

雌性SD大鼠30只，体质量150～200 g，由成都达硕生物科技公司提供。随机分为空白组、模型组、尿畅舒胶囊治疗组，每组10只。适应性饲养3 d后，除空白组外，其余2组大鼠均给予卵巢切除(造模参照邓虹珠等[3]的造模方法)。造模成功后开始给药。空白组、模型组灌服生理盐水1 mL/100 g,1次/d，连续4周。治疗组每只灌服尿畅舒药液1 mL/100 g(16.0 g生药/kg体质量)，1次/d，连续4周。所有动物均在同一条件下用普通鼠料饲养，实验期间动物每周称重1次，根据体质量变化调整给药量(药品用量根据实验动物与人体表面积等效剂量换算)。尿畅舒胶囊由黄芪、王不留行、葛根等中药制成，药粉呈棕色，每粒含药粉0.47 g(2.5 g原药材/粒)，成都中医药大学附属医院药剂科提供，批号121107。根据急性毒性试验结果、临床用量及前期动物实验，将尿畅舒胶囊内药粉用蒸馏水配成0.5 g/mL(1.6 g原药材/mL)的药液。戊巴比妥钠[中国医药(集团)上海化学试剂公司]；羧甲基纤维素钠(CMC,国药集团化学试剂有限公司)；SARTORIUS电子分析天平，d=0.1-0.01；OLYMPUS显微镜；mias病理图像采集分析系统；LEICA 2245切片机。

实验数据测定:颈椎脱臼法处死大鼠，完整获取大鼠膀胱组织称重。膀胱称重后，用10%的甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，行HE染色，光镜观察膀胱壁组织结构改变，每张膀胱组织切片随机取5处,测量膀胱黏膜及肌层厚度，求取平均值，观察模型组和治疗组的差异。

2 结果

2.1 大鼠膀胱重量的比较 参加实验的大鼠为30只，实验过程中因造模不成功剔除2只,因灌胃死亡3只，实验结束时大鼠保持为3组，共25只。其中空白组10只，模型组7只,尿畅舒胶囊治疗组8只。每组随机选取7只提取标本进行检测。进入统计分析的大鼠实际为3组，每组7只。见表1。

表1 大鼠膀胱重量的比较(n=7)

空白组、治疗组大鼠膀胱重量均高于模型组；空白组与治疗组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗组与模型组相比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 大鼠膀胱壁黏膜及肌层厚度比较 见图1、图2。

40倍光镜下观察，治疗组大鼠膀胱肌层厚度为(295.52±22.26)μm，模型组膀胱肌层厚度为(167.48±12.06)μm。差异有统计学意义(P<0.05)。图1 大鼠膀胱壁肌层

100倍光镜下观察，治疗组大鼠膀胱黏膜层厚度为(28.60±4.69)μm,模型组膀胱黏膜层厚度为(22.54±4.98)μm。差异有统计学意义(P<0.05)。图2 大鼠膀胱壁黏膜

3 讨论

中药复方制剂尿畅舒胶囊由黄芪、葛根、王不留行等组成，具有益气补肾、活血通淋之功。临床用于治疗女性绝经后膀胱过度活动症，能够增加患者膀胱容量，提高膀胱顺应性，降低膀胱敏感性[4]，有效缓解排尿症状[5]。动物实验证明[6]，尿畅舒胶囊具有雌激素样作用，大剂量用药时能够增加幼年小鼠子宫重量。并且能促进体内NO的合成,通过NO/cGMP途径作用于下泌尿道平滑肌，发挥其雌激素样作用[7]。

女性下泌尿道与生殖道均起源于尿生殖窦，同为雌激素依赖性器官，在发生发育过程中受着雌激素的影响[8]。雌激素缺乏后，膀胱及尿道黏膜血流供应减少,通透性增加，继而导致膀胱及尿道黏膜萎缩变薄；泌尿道上皮细胞、平滑肌细胞萎缩，甚至凋亡[9];横纹肌及血管数量相对减少，结缔组织数量相对增加，尿道平滑肌弹性组织与纤维组织比例发生改变[10]。本实验结果显示，大鼠双侧卵巢切除后，膀胱重量减轻，膀胱肌层明显萎缩、变薄，肌束间隙增大，纤维结缔组织明显增多，肌束排列紊乱(见图1A)；膀胱黏膜层萎缩、变薄，细胞密度减小，间隙增大，排列不规整(见图2A)。提示在缺乏雌激素作用下，膀胱壁结构发生改变。陈军等[11]认为这可能是绝经后女性出现膀胱容量减少、残余尿量增加及逼尿肌不稳定等尿路症状的结构基础。冯凤芝等[12]研究发现，雌激素能改善上皮营养，促进血液循环，增加膀胱血流量，促进组织生长；可通过作用于位于膀胱、尿道的雌激素受体，促进逼尿肌生长[13]，还可刺激成纤维细胞，促进胶原蛋白的合成，维持盆底组织的支持功能[14]。本次实验中，尿畅舒组较模型组大鼠膀胱重量增加，肌层增厚，肌细胞排列紧密，肌束排列较整齐，肌束间纤维结缔组织较少(见图1B)，黏膜层细胞排列紧密，层次清楚(见图2B)。提示尿畅舒胶囊可逆转雌激素缺乏导致的膀胱黏膜及平滑肌萎缩，促进逼尿肌生长，改善膀胱壁的结构。其治疗绝经后膀胱过度活动症可能通过作用于泌尿道雌激素受体，发挥雌激素样作用，修复雌激素缺乏出现的尿路上皮及组织损害，维持膀胱、尿道组织结构完整及功能协调的途径达到治疗目的。

实验进一步证实了尿畅舒胶囊具有雌激素样作用，但实验样本量较小，仅能初步揭示尿畅舒胶囊雌激素样作用对膀胱结构的影响，未能观察膀胱壁肌层的超微结构，未能明确尿畅舒胶囊对泌尿道肌层细胞的影响及其作用靶点，有待进一步研究证实。

[1]Teloken C,Caraver F,Weber F A,et al.Overactive bladder:Prevalence and implications in Brazil [J].European Urology,2006,49(6):1087-1092.

[2]Lam S,Hilas O.Pharm acologic management of overactive bladder[J].ClinInterv Aging,2007,2(3):337 345.

[3]邓虹珠,梁磊,武金宝,等.益妇宁软胶囊对去势大鼠骨组织雌激素受体表达的影响[J].中药材,2005,28(5):400-402.

[4]张永华,田英,田大力.尿畅舒胶囊对绝经后尿道综合征尿流动力学的影响[J].中国中医药信息杂志,2009,16(9):16-18.

[5]张永华.自拟尿畅舒方治疗绝经后尿道综合症40例分析[J].中医杂志(英文版),2004,24(1):14-15.

[6]张永华,李涓,杨剑,等.尿畅舒胶囊对动物雌激素样作用的实验研究[J].中国中医药信息杂志,2005,12(12):22.

[7]田英,毛创杰,蒋荣伟,等.尿畅舒胶囊对去势雌鼠血清NO、GnRH及膀胱cGMP含量的影响[J].中国中医药信息杂志,2008,15(11),25-26.

[8]Maloney C.Estrogen in urinary incontinence treatment:an anctomic and physiologic approach[J].Urol Nurs,1997,17(3):88-91.

[9]余燕岚.雌激素对女性下尿路的作用研究进展[J].国外医学泌尿系统分册,2005,25(5):596-598.

[10]曹宁生,郝丽娜,黄琼.女性尿道综合征动力学病因分析[J].中华泌尿外科杂志,1995,16(11):658-660.

[11]陈军,周云晓,雨燕岚,等.性激素对卵巢切除后大鼠膀胱结构和功能的作用[J].中华医学杂志,2008,88(26):1851-1854.

[12]冯凤芝.女性尿道综合征的诊治进展[J].现代妇产科进展,2005,14(2):147-148.

[13]Rosenweig B,Bolina P,Birch L,et al.Location and concentration of estrogen,progestin and androgen receptors in the bladder and urethra of the rabbit[J].Meuyourol Urodyn,1995,11:525-530.

[14]Miller K L.Hormone replacement therapy in the elderly[J].Cliobste Gynecol,1996,39(4):912.