2型糖尿病肾病患者血清sTWEAK蛋白含量的测定及其临床意义

巢蓓，史伟峰，张丽荣，张志坚

（1.江苏大学医学院，江苏镇江212013；2.常州市第一人民医院检验科，江苏常州213003）

2型糖尿病肾病患者血清sTWEAK蛋白含量的测定及其临床意义

巢蓓1，史伟峰2，张丽荣2，张志坚1

（1.江苏大学医学院，江苏镇江212013；2.常州市第一人民医院检验科，江苏常州213003）

目的：探讨测定血清肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂（serum TNF like weak inducer of apoptosis，sTWEAK）的含量在诊断糖尿病肾病以及评价治疗效果方面的临床意义。方法：将研究对象按诊断标准分为健康对照组40例（健康组，来自体检人群），单纯2型糖尿病组60例（T2DM组），2型糖尿病合并肾病患者组103例（T2DN组）。另根据肾脏损害程度的Mogensen分级标准，将T2DN组分为3个亚组：正常白蛋白尿组（NAU）、微量白蛋白尿组（MAU）和大量白蛋白尿组（MaAU）。用ELISA法测定上述各组患者血清中sTWEAK的含量。观察T2DN组不同等级2型糖尿病肾病患者sTWEAK含量的动态变化，以及治疗后患者血清sTWEAK含量的恢复情况。结果：在上述各组人群的血清中均可测出不同水平的sTWEAK。T2DN组和T2DM组sTWEAK含量明显低于健康组（P＜0.01）；T2DN组血清sTWEAK含量明显低于T2DM组（P＜0.01）。随着肾脏损害程度的增加，T2DN组患者血清sTWEAK浓度相应降低（P＜0.01），治疗后血清sTWEAK浓度较治疗前明显提高（P＜0.05）。结论：动态检测血清内sTWEAK含量对于观察2型糖尿病肾病的病情以及评价临床治疗效果具有实际应用价值。

2型糖尿病肾病；血清肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂；Mogensen分级标准

目前糖尿病患者中肾病的发病率为30%～40%，在终末期肾病需要透析的患者中，糖尿病肾病占50%以上［1］。但是目前糖尿病肾病的发病机制尚不明确，临床上仍缺乏早期检测方法及有效防治手段。寻找新的实验室诊断和临床疗效评价指标，对于提高糖尿病肾病的诊断和治疗水平具有重要的实用价值。肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂（TNF like weak inducer of apoptosis，TWEAK）作为TNF家族的新成员，具有介导多种细胞的生长、增殖、凋亡，调节机体炎性反应和血管生成等多重生物学作用［2］，在动脉硬化［3］、炎症［4］、肿瘤［5］等疾病的发生和发展过程中，发挥重要的调节作用。动态检测患者血清中TWEAK（sTWEAK）水平的变化，对于上述疾病的早期诊断和病情监测具有重要的临床意义。但是在2型糖尿病肾病的发生和发展过程中，患者（特别是中国人群）sTWEAK水平呈现怎样的变化规律，目前尚不明确。我们通过测定sTWEAK在健康人群、单纯2型糖尿病患者和2型糖尿病肾病患者血清中的含量，比较3组间的差异，探讨其在诊断糖尿病肾病以及评价该疾病的治疗效果方面的临床意义。

1 对象与方法

1.1 对象

收集2012年1月至2013年10月住院患者中，经过临床确诊的单纯2型糖尿病合并肾病患者103例（T2DN组），其病程均为2～4期，排除心血管系统并发症；单纯2型糖尿病组60例（T2DM组），排除对肾脏排泄有影响的疾病及心血管系统并发症；正常人40例作为健康对照组（健康组），选自门诊体检的健康人群，均排除糖尿病，肾脏疾病，自身免疫性疾病，冠心病，高血压等对试验结果有影响的疾病。3组年龄30～65岁，性别不限。根据肾脏损害程度的Mogensen分级标准，再将T2DN组分为3个亚组：正常白蛋白尿组（NAU，n＝48）、微量白蛋白尿组（MAU，n＝35）和大量白蛋白尿组（MaAU，n＝20）。对T2DN组患者采用降糖、降压、调脂等综合治疗3个月后跟踪随访，选取尿蛋白指标好转者36例，测定sTWEAK浓度，并与治疗前比较。

1.2 方法

用血清管抽取各组患者早晨空腹静脉血，离心分离出血清待用。采用ELISA法检测sTWEAK；高压液相离子交换层析法检测糖化血红蛋白（HbA1c）；酶试剂法检测三酰甘油和胆固醇；快速法检测高密度脂蛋白（HDL-C）；普通法检测低密度脂蛋白（LDL-C）；尿素酶-谷氨酸脱氢酶法检测血尿素氮浓度；苦味酸法检测血肌酐浓度；葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖；免疫比浊法检测尿微量蛋白。主要检测仪器为酶联免疫分光光度仪（Multiskan MK3型，芬兰Thermo Labsystems公司产品）；血生化检测仪（日立7600）；HbAlc测定仪（日本东芝公司HLC-723型）和IMMAGE 800尿微量蛋白检测仪（美国贝克曼库尔特公司）等。

1.3 统计学处理

采用SPSS 13.0软件对数据进行统计学处理，符合正态分布或近似正态分布的计量数据用±s表示，对非正态分布数据用M（P25～P75）表示。两组定量资料的比较采用t检验，多组间定量资料比较采用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般临床资料与生化指标比较

各组平均年龄、性别之间的差异无统计学意义（P＞0.05）；3组间胆固醇、三酰甘油、HDL-C、LDLC的差异无统计学意义（P＞0.05）。与健康组比较，T2DM组和T2DN组的HbA1c和空腹血糖明显增高（P＜0.05）；T2DM组和T2DN组HbA1c和空腹血糖间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。

2.2 T2DN组、健康组和T2DM组sTWEAK含量的比较

在健康人群、单纯2型糖尿病患者及2型糖尿病合并肾病患者中均可测出sTWEAK。T2DN组sTWEAK含量［（246.8±142.1）pg／mL］及T2DM组sTWEAK含量［（598.0±209.3）pg／mL］均低于健康组［（756.9±246.7）pg／mL］；T2DN组与健康组间差异有统计学意义（t＝2.712，P＜0.01）；T2DM组与健康组间的差异无统计学意义（P＞0.05）；T2DN组与T2DM组间差异有统计学意义（t＝2.693，P＜0.01）。

表1 各组临床资料与生化指标测定结果比较

2.3 2型糖尿病合并肾病组内各亚组患者sTWEAK含量以及肾功能指标的比较

比较3个亚组患者sTWEAK含量以及肾功能指标，结果表明，随着肾脏损害程度的加重，血尿素氮和肌酐含量呈明显上升趋势；与此相反，sTWEAK的含量呈明显下降趋势。组间差异均有统计学意义。见表2。

表2 不同亚组的2型糖尿病肾病患者sTWEAK含量和肾功能指标的比较

2.4 T2DN治疗前后sTWEAK含量的变化

对选取的36例研究对象治疗前后的sTWEAK含量进行比较。结果表明，治疗后sTWEAK含量［（379.1±135.4）pg／mL］较治疗前［（237.2± 143.2）pg／mL］明显升高（t＝2.243，P＜0.05）。

3 讨论

糖尿病肾病是糖尿病常见的并发症，是糖尿病全身性微血管病变表现之一。由于该疾病患者体内存在复杂的代谢紊乱，肾脏损伤一旦发展到终末期，往往比其他肾脏疾病的治疗更加棘手。目前临床上对糖尿病肾病仍缺乏早期检测手段及有效防治方法。肾功能的常规实验室检查指标，如尿微量蛋白，血尿素氮，血肌酐等都不能及早发现糖尿病肾病。本研究数据显示在糖尿病肾病早期（NAU组）血尿素氮，血肌酐，尿微量白蛋白基本还在正常范围，而sTWEAK水平已经明显低于健康人群，提示sTWEAK可成为一种早期诊断糖尿病肾病的敏感指标。TWEAK定位于17号染色体P13.1，内皮细胞、巨噬细胞和血管平滑肌细胞都可表达TWEAK蛋白，TWEAK全长蛋白可被蛋白酶水解为可溶性的sTWEAK。sTWEAK与TWEAK具有类似的生物学活性，通过与细胞表面的特异性受体Fn14结合，激活细胞内信号通路，致血管平滑肌细胞和内皮细胞增殖和迁移，诱导巨噬细胞分泌趋化因子和炎性因子［6］。sTWEAK蛋白与血管内皮细胞功能密切相关，是其损伤的标志物［7］。而内皮细胞受损及低度炎症反应均是糖尿病肾病的可能发病机制。因此，sTWEAK极有可能以肾病的血管内皮细胞作为靶细胞，参与糖尿病肾病的发生与发展。

本研究结果表明，T2DN组sTWEAK含量明显低于健康组和T2DM组（P＜0.01）；随着肾脏损害程度的增加，sTWEAK浓度相应降低（P＜0.01）；治疗后sTWEAK浓度较治疗前有所升高（P＜0.05）。由此推测，肾脏损伤后，机体通过某些代谢途径使sTWEAK水平降低，但具体机制目前尚不明确。Winkles［8］提出，正常生理情况下，肾脏中Fn14受体表达相对较低，但病理情况下，Fn14表达增强，sTWEAK与Fn14结合增多可能导致sTWEAK浓度降低。内皮细胞损伤时sTWEAK分泌减少，也可能影响其血清含量。也有研究提出，因为sTWEAK与巨噬细胞表面的受体CD163结合，使TWEAK的清除增加，导致sTWEAK浓度下降［9］。本研究发现sTWEAK的含量随着T2DN组的Mogensen等级增高而降低，提示TWEAK在糖尿病肾病的发展进程中发挥重要作用。比较同一患者治疗前后sTWEAK含量，发现治疗后尿蛋白指标好转的患者，其含量有所回升。上述结果提示，当糖尿病肾病患者的病情进展时，因炎性反应加重，巨噬细胞活性增强，细胞表面的受体CD163表达增加，结合和清除TWEAK能力增强；与此同时，内皮细胞损伤加重，sTWEAK分泌减少。上述因素共同导致sTWEAK含量降低；反之，当通过治疗使肾功能好转时，机体炎性反应减轻，巨噬细胞活性下降，TWEAK的清除减少，同时内皮细胞得以部分修复，sTWEAK分泌相应增加，sTWEAK含量即随之增高。已有研究证实sTWEAK与肾脏疾病患者微炎症状态相关［10］，我们的研究结果进一步提示TWEAK参与肾脏微血管病变的形成过程。

综上所述，我们认为可以将sTWEAK作为监测糖尿病肾病的病理进程和评价临床治疗效果的一项敏感的实验室检测指标。关于糖尿病肾病患者sTWEAK含量发生变化的内在分子机制有待于进一步的研究。

［1］李敏州，高彦彬，马鸣飞，等.糖尿病肾病发病机制研究进展［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（22）：165－169.

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［5］高智亭，潘海洋，刘殿昌，等.肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂在原发性肝癌患者血清中的表达及其意义［J］.中国现代普通外科进展，2013，16（2）：112－116.

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Exam ination of sTWEAK in type 2 diabetic patients w ith nephropathy and its clinical significances

CHAO Bei1，SHIWei-Feng2，ZHANG Li-rong2，ZHANG Zhi-jian1
（1.School of Medicine，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013；2.Department of Clinical Laboratory，the First People′s Hospital of Changzhou，Changzhou Jiangsu 213003，China）

Objective：To explore the clinical significances of the serum TNF likeweak inducer of apoptosis（sTWEAK）in the diagnosis of diabetic nephropathy and the evaluation of the therapeutic efficacy of the disease.M ethods：The objectswere divided into 40 cases of healthy control group（group NC）；60 cases of simple type 2 diabetesmellitus group（group T2DM）；and 103 cases of type 2 diabetic patients with nephropathy group（group T2DN）.According to the Mogensen classification of kidney damage degree，the T2DN group was further divided into three subgroups：normal albuminuria group（NAU），microalbuminuria group（MAU）and macroalbuminuria group（MaAU）.The concentrations of sTWEAK in the serum of three groupswere examined by ELISA method.In addition，the concentrations of sTWEAK in T2DN patients，before and after treatment，were compared.Results：Different levels of the sTWEAK in the three groups could be detected.In T2DN group and T2DM group，the contents of sTWEAK were significantly lower than that in NC group（P＜0.01）；in T2DN group，the content of sTWEAK was significantly lower than that in T2DM group（P＜0.01）.Along with the increase of the degree of renal damage，the concentration of sTWEAK decreased（P＜0.01）；after treatment，the concentration of sTWEAK increased obviously（P＜0.05）.Conclusion：Examination of sTWEAK in type 2 diabetic patientswith nephropathy had the clinicalsignificances in the diagnosis and the evaluation of the therapeutic efficacy of the disease.

type 2 diabetic nephropathy；serum TNF like weak inducer of apoptosis；Mogensen grade standard

R587.1

A

1671－7783（2014）04－0320－04

10.13312／j.issn.1671-7783.y140120

巢蓓（1981—），女，江苏常州人，主管技师，主要从事临床医学检验工作；张志坚（通讯作者），副研究员，硕士生导师，E-mail：zzj＠ujs.edu.cn

2014－05－08 ［编辑］陈海林