布地奈德对鼻息肉中核因子κB和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

朱华斌，张建华，刘仲娟，徐颖，丁俊杰，蒋燕飞，郑逸品

（江苏大学附属上海第八医院耳鼻咽喉科，上海200235）

布地奈德对鼻息肉中核因子κB和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

朱华斌，张建华*，刘仲娟，徐颖，丁俊杰，蒋燕飞，郑逸品

（江苏大学附属上海第八医院耳鼻咽喉科，上海200235）

目的：观察布地奈德鼻腔雾化治疗对鼻息肉中核因子κB（NF-κB）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响。方法：对40例鼻息肉患者行布地奈德鼻腔雾化治疗，并以10例正常中鼻甲组织作为对照，应用免疫组化的方法检测鼻息肉中NF-κB和b-FGF的表达。结果：经布地奈德治疗后鼻息肉中NF-κB和b-FGF的表达较治疗前明显降低（P＜0.05），且二者呈显著的正相关性（r＝0.53，P＜0.01）。结论：布地奈德鼻腔雾化治疗鼻息肉可下调NF-κB和b-FGF的表达。

鼻息肉；布地奈德；核因子κB；碱性成纤维细胞生长因子

目前认为鼻息肉是多环节多途径引起的炎症性病变，其形成与炎症反应密切相关。核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）是一种核转录调控因子，对多种细胞因子和炎症介质具有调节功能，是炎症反应途径中的重要介质。碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，b-FGF）具有促进细胞的增殖分化作用和促血管生成及参与细胞外基质形成等作用，且作为较强的NF-κB激活剂，可促进炎症的发生发展。本研究通过布地奈德鼻腔雾化治疗鼻息肉，观察鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表达变化，来探讨鼻息肉局部治疗的可行性。

1 对象与方法

1.1 对象

选取40例鼻息肉患者为治疗组，年龄27～59岁，平均（39±12）岁，按慢性鼻窦炎、鼻息肉的分型、分期标准［1］，均为Ⅱ型1－3期。治疗组予布地奈德（阿斯利康公司）混悬液1 mg，2次／d鼻腔雾化治疗，共7 d。治疗组40例患者在治疗前及治疗后各取鼻息肉组织做标本，对照组10例正常中鼻甲标本在鼻中隔手术同期取得。要求入选病例均无变应性鼻炎、哮喘等变应性疾病史，且前1个月内未使用过糖皮质激素和抗组胺药及无上呼吸道感染病史。

1.2 方法

所有标本用4%低聚甲醛固定，石蜡包埋、切片，并常规行HE染色。采用Envision二步法（丹麦Dako公司）行免疫组化染色，兔抗人NF-κB抗体和b-FGF抗体（武汉博士德生物工程有限公司）工作浓度为1∶100，DAB显色。同时，PBS取代一抗作阴性对照，以排除非特异性的染色。

在光学显微镜下观察，若细胞质和（或）细胞核内出现清晰的颗粒状棕黄色物质即为NF-κB、b-FGF蛋白阳性细胞。对每一张免疫组化切片的阳性染色区域随机选取5个视野（10×40倍），采用高分辨率图像分析仪自动检测阳性区域的光密度值，将5个值平均后，即为该片NF-κB、b-FGF的参考值。以上实验操作，在不知切片分组的情况下均请一位病理科主治医师重新操作。

1.3 统计学分析

所测实验数据以均数±标准差表示，用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，布地奈德治疗前后的NF-κB和b-FGF表达强度差异采用配对t检验，NF-κB和b-FGF的相关性用Pearson相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表达情况

治疗组鼻息肉中NF-κB蛋白的免疫组化染色表达强度较对照组（1.09±1.07）明显增强，b-FGF蛋白的表达也较对照组（0.51±0.43）明显增强。且经布地奈德治疗后NF-κB、b-FGF的表达强度均较治疗前明显减少（P＜0.01）。见表1。

表1 治疗组鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表达

2.2 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的免疫组化结果

在鼻息肉黏膜上皮细胞、血管内皮细胞、腺上皮细胞及间质中散在的炎症细胞的胞质和细胞核内有NF-κB蛋白的阳性表达，其中以细胞质内的表达为显著。经布地奈德鼻腔雾化治疗后NF-κB蛋白的表达减少。见图1。

在鼻息肉黏膜上皮细胞、血管内皮细胞、腺上皮细胞及间质中散在的炎症细胞胞质内有b-FGF蛋白的阳性表达。经布地奈德雾化治疗后b-FGF蛋白的表达减少。见图2。

图1 鼻息肉中NF-κB的表达（DAB染色10×20）

图2 鼻息肉中b-FGF的表达（DAB染色10×20）

2.3 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白表达的相关性

经Pearson相关分析，鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表达呈显著正相关（r＝0.53，P＜0.01）。

3 讨论

近年研究表明，鼻息肉的发生发展过程与炎症密切相关，有多种重要的细胞因子参与。而NF-κB是介导细胞内信号传递的重要核转录因子，在炎症和免疫反应中起到中枢作用。NF-κB被激活时进入核内，与DNA上特异的启动位点结合促进细胞因子转录，其活化可引起大量炎症介质分泌，参与和调节多种炎症蛋白基因的表达［2］，形成炎症级联反应，并持续增强。国内外的研究表明，NF-κB在鼻息肉组织中呈阳性表达［3］，NF-κB通过调控IL-1、IL-2、IL-8、IL-10、TNF-α、NO等细胞因子的转录而作用于鼻息肉形成过程的级联炎症反应，促进鼻息肉的发生发展［4－5］。目前认为糖皮质激素是治疗鼻息肉的有效药物［6－7］，其抗炎能力主要是抑制NF-κB和促炎基因DNA的结合，或增加合成IκB，使NF-κB激活的信号转导途径被阻断，最终减少鼻黏膜中多种炎性细胞的数量，并抑制炎症细胞因子的表达。而布地奈德是一种新型的非卤化糖皮质激素，具有高受体结合力和较强的抗炎作用。本实验结果显示，鼻息肉组织中NF-κB蛋白有较强的表达，主要位于鼻息肉上皮细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞和炎症细胞的胞质和胞核中，以胞质中表达更强，明显高于正常中鼻甲组织的表达，且经布地奈德鼻腔雾化治疗后可减轻其表达强度。这提示鼻息肉的炎症反应中，转录因子NF-κB的激活可能是一个中心环节，其激活可介导炎症介质的释放和活化，形成炎症级联反应，使得炎症的损伤持续放大，导致鼻息肉的发生发展。但可通过布地奈德来抑制NF-κB蛋白的活性，以减少炎症介质的产生，达到治疗鼻息肉的目的。

b-FGF是一种多效能的细胞生长因子，具有促进细胞的增殖、分化、黏附作用和促血管生成及参与细胞外基质形成等作用。Powers等［8］在鼻息肉组织中检测到b-FGF mRNA，并且发现在鼻息肉上皮细胞层基底膜存在b-FGF强免疫染色，提示b-FGF在鼻息肉组织中促进了内皮细胞及上皮细胞的增殖分化。本实验结果显示，鼻息肉组织中的b-FGF蛋白较正常中鼻甲组织的表达明显增强，且布地奈德鼻腔雾化治疗可减轻其表达强度。实验结果同时发现，鼻息肉中b-FGF和NF-κB的表达具有明显的正相关性（r＝0.53，P＜0.01）。这表明鼻息肉组织中的NF-κB对b-FGF活化具有一定的正作用。

本研究结果显示，布地奈德鼻腔雾化治疗鼻息肉，可抑制鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表达，同时可起到清理鼻腔的作用，并可减轻糖皮质激素全身使用所引起的不良反应［9］，是一种可行的鼻息肉局部治疗的措施。

［1］中华耳鼻咽喉科杂志编辑委员会.慢性鼻窦炎、鼻息肉临床分型、分期及内窥镜鼻窦手术疗效评定标准［J］.中华耳鼻咽喉科杂志，1998，33（3）：134.

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［5］Frᶏczek M，Rostkowska-Nadolska B，KapralM，etal.Microarray analysis of NF-κB-dependent genes in chronic rhinosinusitis with nasal polyps［J］.Adv Clin Exp Med，2013，22（2）：209－217.

［6］Mygind N，Andersson M.Topical glucocorticosteroids in rhinitis：clinical aspects［J］.Acta Otolaryngol，2006，126（10）：1022－1029.

［7］Valera F，Brassesco MS，Castro-Gamero AM，et al.In vitro effect of glucocorticoids on nasal polyps［J］.Braz J Otorhinolaryngol，2011，77（5）：605－610.

［8］Powers MR，Qu Z，LaGesse PC，et al.Expression of basic fibroblast growth factor in nasal polyps［J］.Ann Otol Rhinol Laryngol，1998，107（10 Pt1）：891－897.

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R765.25

B

1671－7783（2014）04－0366－03

10.13312／j.issn.1671-7783.y140069

*：通讯作者，E-mail：hndxzhjh＠sina.com

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2014－03－12 ［编辑］何承志