ER、PR、VEGF及WT-1在子宫肌瘤中的表达及分析

张凤荣，程玲瑗

(甘肃省天水市第一人民医院，天水 741000)

子宫肌瘤是女性生殖系统中最常见的一种良性肿瘤，子宫切除是最常见的治疗方案。近年来，子宫肌瘤的发病率不断增高，但其发病原因和机制仍然不明确。有学者认为雌激素诱发并促进子宫肌瘤生长，而孕激素可能是通过增加生长因子或受体来促进肌瘤的生长，因此生长因子在肌瘤中的表达是目前研究的热点。子宫肌瘤是本地区高发疾病，本文通过观察雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及Wilms瘤基因(Wilm’s tumor-suppressor gene, WT-1)在子宫肌瘤中的表达情况，探讨本地区子宫肌瘤的发病机制和治疗措施。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2012年1月至2013年8月于我院手术切除、病理诊断明确的子宫肌瘤病例686例，排除合并腺肌症、子宫内膜癌、腺瘤样瘤、卵巢肿瘤、宫颈癌及合并妊娠切除子宫者后，随机选择75例手术前至少3月内没有经过任何激素治疗的单纯子宫肌瘤切除者的病理组织作为病例组，并随机选择其中25例子宫肌层组织作为对照组，各切片4张，做ER、PR、VEGF及WT-1标记并比较。

1.2 试剂及方法 所有标本均采用4%的甲醛固定，石蜡包埋、H-E染色。免疫组化采用SP法，切片厚4 μm，各切片4张，高温修复或酶消化，一抗4℃过夜，以PBS缓冲液代替第一抗体作阴性对照，已知的阳性组织作阳性对照。免疫组化试剂ER、PR、VEGF、WT-1及SP试剂盒购自迈新公司，操作按试剂盒上的要求进行。

1.3 结果判读 ER、PR及WT-1阳性表达定位在细胞核，VEGF定位在细胞质，以看到棕黄色颗粒分布为阳性，分级方法为:① 选染色均匀有表达的区域，阳性细胞占视野的多少分级。0：<5%;1级：6%～25%;2级：26%～50%;3级：>50%。②按着色强弱分。0：阴性;1：弱，淡黄色;2：中等，黄色;3：强，棕褐色。①、②相加为判读结果：0～2为(-)，3～4为(+)，5～6为(++)。

1.4 统计学方法 所有数据均采用SPSS 18.0软件进行处理，等级资料采用秩和检验进行分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 子宫肌瘤患者在不同年龄段的分布和并发症情况 子宫肌瘤患者686例，<40岁患者113例，占16.47%，40～49岁患者454例，占66.18%，围绝经期及绝经后(>50岁)患者119例，占17.35%。因子宫内膜癌、腺肌病、宫颈癌、卵巢肿瘤等切除者196例，占28.57%，其中宫颈癌25例，合并子宫内膜癌15例，合并腺肌病65例，合并腺瘤样瘤10例，合并妊娠52例，合并卵巢肿瘤28例，合并侵袭性葡萄胎1例；单纯子宫肌瘤切除者490例，占71.43%。

2.2 ER、PR、VEGF及WT-1在子宫肌瘤组织中的表达情况 ER、PR、VEGF、WT-1在病例组和对照组中的表达比较见表1，两组各指标比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。

3 讨 论

子宫肌瘤是女性生殖道最常见的良性肿瘤，多见于30～50岁妇女，其中40～50岁妇女的发病率高达51.2%～60.0%[1]。美国的一项资料显示：77%的子宫切除的标本中发现有子宫肌瘤[2]。本组资料中，子宫肌瘤以40～49岁占比最高，占66.18%。目前子宫肌瘤的病因和发病机制仍不确切，依据其多见于育龄期妇女，妊娠期增大，分娩或绝经后肌瘤停止发育甚至萎缩、消失，可推断子宫肌瘤具有激素依赖性。有资料显示，雌、孕激素水平在肌瘤组织中的表达高于正常肌层组织，说明二者在肌瘤的发生、发展中起促进作用[3]，本组资料亦显示ER、PR在肌瘤中高表达，明显高于周围肌层组织，尤其是孕激素阳性强度更明显，这与文献报道相一致。

表1 ER及PR在子宫肌瘤中的表达情况

研究发现，雌、孕激素促进肌瘤生长可能是通过生长因子介导，生长因子通过与细胞膜上相应的受体结合，发挥其促进有丝分裂及生长的作用[4]。在子宫肌层、子宫内膜、肌瘤中均可鉴定出VEGF的存在[5]，VEGF主要作用于血管内皮细胞，促进内皮增殖、迁移、诱导新生血管的形成，并可显著水解基底膜，增加微血管的通透性，有支持血管内皮细胞生长的作用，而雌激素能增加血管的通透性，孕激素可以通过促进血管生成，达到促进肌瘤生长的目的。本组资料显示，VEGF在部分肌瘤中阳性表达，说明其具有促进肌瘤生长作用，与对照组比较差异有统计学意义，与文献报道[6]一致。

胰岛素样生长因子2(IGF-2)、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1受体)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子β(TGF-β)、Bcl-2和c-myc等基因，在子宫平滑肌瘤的发生中，通过抑制细胞凋亡或通过子宫平滑肌瘤分泌或旁分泌的方式，促进子宫平滑肌瘤细胞增殖和生长[7]。WT-1基因是1990年在肾的Wilm肿瘤中作为抑癌基因被分离克隆，其染色体位于11P13，而且能与IGF-1、TGF-β、EGF、Bcl-2、C-myc等生长调控因子及其受体结合，调节这些生长因子的转录的激活和抑制[8]。我们研究发现：WT-1在子宫肌层和子宫平滑肌瘤中均过表达，证明子宫肌层和肌瘤中均有WT-1基因的存在，而肌瘤中WT-1的表达与肌层有一定差异，提示WT-1参与了肌瘤的发生。资料显示WT-1能与上述调控因子及其受体结合，激活或抑制生长因子的转录，因此我们推测：子宫局部雌、孕激素水平的增高，导致部分生长因子及其受体含量增加，WT-1基因可能以不同的异构体形式与以上调控因子结合，激活了其转录作用，导致子宫平滑肌瘤的发生、发展。WT-1可以与多种生长因子结合，而其在女性的胃壁和肠壁的平滑肌组织中均呈阴性，在正常子宫肌壁内高表达，提示WT-1过度表达可能与雌、孕激素水平有关。因此，选择使用激素拮抗剂，不仅可以有效控制肌瘤的生长，而且可以通过降低或抑制WT-1的表达，抑制上述生长因子，阻止肌瘤生长，甚至使其萎缩、消失；或通过选择干预位点，进行靶点治疗，达到治疗子宫平滑肌瘤的目的，为平滑肌瘤的药物治疗提供了理论依据。

参考文献

[1]回允中, 主译. 妇产科诊断病理学[M]. 北京:北京大学医学出版社,2007:623-625.

[2]曹泽毅, 主编. 中华妇产科学[M]. 北京:人民卫生出版社,2000:1804.

[3]李卫东. 孕激素对子宫平滑肌瘤生长的影响[J]. 实用医技杂志,2007,14(20):2744-2745.

[4]李卫平, 严隽鸿, 林其德, 等. 米非司酮对子宫肌瘤组织中雌孕激素受体和表皮生长因子受体的影响[J]. 中国实用妇科及产科杂志,2002,18(1):4-6.

[5]Anderson J. Growth factors and cytokines in uterine leiomyomas[J].SeminReprodEndocrinnol, 1996, 3(14):269.

[6]文华清, 邓继红, 普 苹, 等. 血管内皮生长因子、微血管密度在子宫平滑肌瘤中的表达及其意义[J]. 临床肿瘤学杂志, 2007,121(11):839-842.

[7]纪 巍, 辛晓燕, 陈必良. IGF-1及其受体在子宫平滑肌瘤中的表达以及与雌、孕激素关系[J]. 临床军医杂志,2009,37(6):1062-1064.

[8]Call K M, Glaser T, Ito C Y,etal. Isolation and characterization of zine finger polypeptide gene at the human chromosome 11 wilms’ tumor locus[J].Cell, 1990, 60(3): 509-520.