抗表皮棘细胞桥粒抗体、抗桥粒芯糖蛋白1、3抗体(Dsg1、Dsg3)在天疱疮中的诊断价值

陈祯祥, 王晓东, 郑庆虎, 邓淑文, 帕丽达·阿布利孜, 董晓阳,哈地利亚·哈斯木，惠 艳

(1新疆医科大学第一附属医院皮肤科， 乌鲁木齐 830054; 2中国人民解放军第153中心医院皮肤科, 郑州 450042)

天疱疮(Pemphigus)是一组皮疹累及皮肤黏膜的自身免疫性大疱性皮肤病 。至今病因尚未阐明，可能与感染、紫外线照射、某些药物(如青霉胺等)等多种因素都有一定的关系。在多种致病因素作用下，导致机体出现针对角质形成细胞表面桥粒成分的特异性抗体，从而引起棘层细胞松解为特征。根据临床表现，天疱疮分为寻常型、增殖型、落叶型和红斑型4种典型类型。寻常型天疱疮(Pemphigus vulgaris，PV)是天疱疮中发病率最高、临床症状最严重的亚型，目前认为其临床症状主要是由桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)和/或桥粒芯糖蛋白3(Dsg3) IgG抗体引起的[1]，抗Dsg1抗体的出现预示着除了口腔表现，还涉及到皮肤及其他黏膜的病损[2]。通常开始发生于口腔(50%～70%的病例)[3]，且发生在其他皮损之前，可以是本病唯一临床表现，因此口腔科医师在PV的早期发现、早期诊断中起着重要作用。血清中有抗表皮棘细胞间物质抗体(天疱疮抗体)。检测杭体滴度可监测患者病情的变化，指导临床治疗。目前认为天疱疮主要抗原为角质形成细胞间的桥粒芯蛋白(desmoglein, Dsg)3和Dsg1，国内外有关天疱疮的发病机制、临床诊断方面的研究甚多，但新疆地区尚缺少系统研究。为此，本研究于2011年2月-2013年2月对新疆医科大学第一附属医院皮肤科诊治的34例天疱疮患者行相关抗体检测，以探讨抗表皮棘细胞桥粒抗体、Dsg1、Dsg3在天疱疮中的诊断价值,丰富新疆地区对天疱疮的研究资料，为临床诊治提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2011年2月-2013年2月在新疆医科大学第一附属医院皮肤科诊治的明确诊断为天疱疮的34例患者(试验组)，其中29例寻常型天疱疮，3例红斑型天疱疮，2例落叶型天疱疮。男性16例，女性18例，年龄21～74 岁，平均年龄44.1岁，病程0.7～180个月，平均18.7个月，经临床表现、组织病理和间接免疫荧光确诊为天疱疮。选择同期36例患者为对照组，其中大疱性类天疱疮 20例，大疱性表皮松解症5例，皮炎湿疹6例，其它慢性病5例。男性19例， 女性17例，年龄5～90 岁，平均年龄59.9岁，病程0.23～60个月，平均20.5个月，均为已排除天疱疮的患者。

1.2 方法

1.2.1 间接免疫荧光(IIF)法检测血清中总循环抗体 采用欧蒙公司间接免疫荧光法检测抗表皮棘细胞桥粒抗体试剂盒。抗原基质采用猴食管上皮。严格按照说明书方法操作。阳性判定值为滴度≥1∶10为阳性。阳性者进一步进行血清稀释，进行抗体滴度检测。

1.2.2 酶联免疫吸附(ELISA)法进行具体靶抗原确认 采用MBL 公司(日本株式会社医学生物学研究所)酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测抗Dsg1 和 Dsg3 抗体试剂盒。Rayto RT-3900全自动洗板机。全自动定量酶标仪(ST-360,上海科华实验系统有限公司)450/620 nm处读取吸光度值(OD值)，严格按照说明书方法操作。抗Dsg 1阳性界值(U/mL)为≥20，抗Dsg 3阳性界值(U/mL)为≥20 。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0 统计软件包对数据进行处理。计算Dsg1和Dsg3及抗表皮棘细胞桥粒抗体的阳性率、敏感度、特异度、PPV、NPV和诊断符合率，采用四格表χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Dsg1、Dsg3和抗表皮棘细胞桥粒抗体总体检出情况

试验组、对照组中抗Dsg1抗体阳性率分别70.6%(24/34)、0.0%(0/36)，抗Dsg3抗体阳性率分别为79.4%(27/34)、5.6%(2/36)，试验组、对照组中抗表皮棘细胞桥粒抗体的阳性率分别为73.5%(25/34)、2.8%(1/36)，两组抗表皮棘细胞桥粒抗体、抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体阳性率差异均有统计学意义(P<0.01),见表1。

表1 两组患者检测结果分析/例(%)

注:*χ2=38.67,P<0.01;**χ2=39.31,P<0.01;***χ2=37.49,P<0.01。

2.2 血清Dsg1和Dsg3及抗表皮棘细胞桥粒抗体试验评价

试验组患者，抗表皮棘细胞桥粒抗体试验的敏感度、特异度、PPV、NPV、诊断符合率分别为73.5%、97.2%、96.2%、79.5%、85.7%。 Dsg1分别为70.6%、100.0%、100.0%、78.3%、85.7%。Dsg3分别为79.4%、94.4%、93.1%、82.9%、87.1%。3种指标在天疱疮患者中灵敏度和特异度的差异无统计学意 义(P>0.05) 。经配对资料的卡方检验，3种指标在天疱疮患者中的差异无统计学意义(P>0.05),见表2。

表2 试验组血清Dsg1和Dsg3及抗表皮棘细胞桥粒抗体试验的评价/%

3 讨论

天疱疮临床上分为寻常型、增殖型、落叶型、红斑型4型，目前天疱疮的发病机制尚不清楚。致病性靶抗原Dsg3及其对应抗体在天疱疮发病过程中发挥重要作用。在寻常型天疱疮(PV)患者血清中常可检测出抗Dsg3抗体。寻常型天疱疮(PV)皮肤病损严重程度与Dsg1抗体水平呈正相关，即皮肤病损越严重Dsg1抗体水平越高。

目前临床上利用IIF法检测的只是患者血清中总的循环抗体，包括抗棘细胞间桥粒抗体和抗基底膜带抗体，但是并不能明确究竟是哪一种致病性靶抗原引起水疱的发生。如今已经明确靶抗原Dsg1、Dsg3和BP180、BP230能直接导致大疱性皮肤病的发生。对于临床上难以诊断的不典型疱病患者，这些靶抗原的检测不仅能帮助临床进行诊断和鉴别诊断，还能进行疾病的临床分型。

本研究两组患者血清中的抗Dsg1抗体、抗Dsg3抗体和表皮棘细胞间桥粒抗体检测结果显示：试验组、对照组中抗Dsg1抗体阳性率分别为70.6%(24/34)、0.0%(0/36)，抗Dsg3抗体分别为79.4%(27/34)、5.6%(2/36)，抗表皮棘细胞桥粒抗体分别为73.5%(25/34)、2.8%(1/36)，经检验两组抗表皮棘细胞桥粒抗体、抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体的阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)。本研究中，抗表皮棘细胞间桥粒抗体、抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体之间有交叉重叠现象，其互相联合可提高确诊率，可以更有效地指导疾病的诊治，对预后也有一定的指导作用。

目前采用ELISA 法检测Dsg1、Dsg3逐年上升，且该法有高敏感性及高特异性的特点。Kulkollakarn等[4]报道在新诊断的PV患者Dsg3 ELISA敏感度为100%，特异性为92.3%。英国Harman等[5]检测了82例PV患者，Dsg3 ELISA敏感度为95%，IIF敏感性为79%。Sharma等[6]报道活动期PV患者27例及对照患者26例检查结果ELISA法敏感度为85.2%，特异性为100%。闫言等[7]研究结果显示Dsg3ELISA试剂盒敏感度为77.4%，特异性为94.3%，其敏感性低于其他研究。本研究中70例患者中 Dsg1试验的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断符合率分别为70.6%、100%、100%、78.3%、85.7%。Dsg3分别为79.4%、94.4%、93.1%、82.9%、87.1%。抗表皮棘细胞桥粒抗体分别为73.5%、97.2%、96.2%、79.5%、85.7%。经配对资料的卡方检验， 3种指标在天疱疮患者中的差异无统计学意义(P>0.05)。本结果和文献[8-9]报道的结果一致，提示试验结果阴性者排除天疱疮的价值较大，阳性结果确诊天疱疮的价值较大。血清Dsg1和Dsg3及抗表皮棘细胞桥粒抗体试验检测可用于临床诊断天疱疮，并适合临床实验室的开展，ELISA试验以20为折点，其敏感度和特异度均达到较满意值。

天疱疮致病性靶抗原作为一种近10年来出现的新的诊断指标，具有高度的敏感性和特异性，操作简单，结果判定客观，是一种较好的临床辅助诊断方法，同时将患者血中循环自身抗体与靶抗原结合检测，有利于得到可靠的诊断依据和疗效的监测。

参考文献：

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[2] Harman KE,Gratian MJ,Bhogal BS,et al.A study of desmoglein 1 autoantibodies in pemphigus vulgaris:racial differences in frequency and the association with a more severe phenotype[J]. Br J Dermatol, 2000, 143(2):343-348.

[3] Becker BA, Gaspari AA. Pemphigus vulgaris and vegetans[J]. Dermatol Clin, 2003, 11(3):429-453.

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[5] Harman KE, Gratian MJ, Seed PT, et al. Diagnosis of pemphigus by ELISA:a critical evaluation of two ELISAs for the detection of antibodies to the major pemphigus antigens, desmoglein 1 and 3[J]. Clin Exp Dermatol, 2000, 25(3):236-240.

[6] Sharma VK, Prasad HR, Khandpur S, et al. Evaluation of desmoglein enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in Indian patients with pemphigus vulgaris[J]. Int J Dermatol, 2006, 45(5):518-522.

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[8] 张红梅，林琴，华红. 等 两种检测方法在寻常型天疱疮诊断中的作用[J]. 中华口腔医学杂志, 2011, 46(Suppl 1):45-49.

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