小鼠吞噬活性实验研究

马宇亮

(黑龙江工业学院，黑龙江 鸡西 158100)

1 实验原理

在一定范围内，碳颗粒的清除速率即吞噬速度与血碳浓度成正比，而与已吞噬的碳粒量成反比。也就是说在一定范围内，碳颗粒的清除速率与其剂量呈指函数关系。

以前后时间差为横座标，对应时间点的血碳浓度对数差值为纵座标，做线性方程。此直线斜率为K(公式1)，可表示吞噬速率，亦可称为未经校正的吞噬指数。因为K值的大小受很多因素的影响，比如动物肝脾的重量不等，K值不同等。所以，一般用a(公式2)表示校正过的吞噬指数。公式如下：

公式1

公式2

其中，a反映了每单位组织重量的吞噬活性。

2 实验仪器和试剂

分光光度计(上海将来实验设备有限公司)

计时器(广州福克自动化设备有限公司)

血色素吸管(江苏省姜堰市瑞康医疗器械有限公司)

注射器(黑龙江省哈泉医疗器械制品有限公司

墨汁(市售)

黄芪水溶性粉(自制)

桦木水溶性粉 (自制)

Na2CO3(中国药品生物制品检定所)

3 实验动物

清洁级小鼠，体重30g-35g。

4 实验步骤

4.1 分组给药。

用黄芪水溶性粉和桦木水溶性粉配制浓度分别为0.5mg/ml、1mg/ml和1.5mg/ml的低、中、高剂量药液。将小鼠分为7组，分别为空白组,正常给食。黄芪[1]低剂量组，黄芪中剂量组，黄芪高剂量组，桦木[2]低剂量组，桦木中剂量组，桦木高剂量组，每组7只，一天灌胃一次，一次0.5ml，共30天。

4.2 溶液配制。

注射用墨汁的配制：将市售墨汁用0.9%NaCl溶液稀释3～4倍

Na2CO3溶液的配制：准确称量Na2CO3固体0.1g，加蒸馏水，用100ml容量瓶定容。

4.3 注射。

准确称量每只实验小鼠的体重，重复3-5次取平均。然后按每10g体重0.1ml 计量计算给小鼠尾静脉注射配制好的墨水。注入后马上开始记时。

4.4 数据的测定。

记时2min，从内眦静脉丛取血20μL，将取出的血液立即加到 2ml 配制好的Na2CO3溶液中，充分混合，以配制好的Na2CO3溶液作空白，然后用分光光度计在600nm波长处测所得样品的OD值。

然后解剖小鼠，分别取出肝和脾，用滤纸吸干表面血污，然后分别准确称出肝和脾的重量，记录数据。

5 实验数据及结论

结果判断以计算出的样品的吞噬指数与空白组吞噬指数的差值为依据，大于零的为阳性，说明吞噬活性更好，免疫力更强；反之为阴性。每组3只小鼠求平均。

表1 小鼠体重、肝重、脾重数据

表2 测得的样品OD值及对应的对数值

表3 计算得出相应的K值、a值及平均值

由以上表中数据计算出空白组吞噬指数的平均值为4.98，黄芪低剂量组的平均吞噬指数为5.57，黄芪中剂量组的平均吞噬指数为5.50，黄芪高剂量组的平均吞噬指数为5.17，桦木低剂量组的平均吞噬指数为4.40，桦木中剂量组的平均吞噬指数为4.29，桦木高剂量组的平均吞噬指数为4.49。

由数据可以看出，样品黄芪组与空白组吞噬指数的差值大于零，阳性；样品桦木组与空白组吞噬指数的差值小于零，阴性。结果说明黄芪组小鼠的吞噬活性更好，免疫力更强。

[1]罗千古, 周玖瑶，等. 黄芪丹参提取液对小鼠免疫系统的影响[J].中国医药导报, 2011,08 (2).

[2]易金娥, 袁莉芸，等. 桦木酸对小鼠淋巴细胞及巨噬细胞的影响分析[J].畜牧兽医学报, 2011,42 (1).