高效液相色谱法测定肤舒宁喷雾剂中大黄素和芦荟苷含量*

2014-07-14宫丽，袁兵，卞俊

中国药业 2014年2期

宫丽，袁兵，卞俊

（中国人民解放军第411医院药学科，上海 200081）

肤舒宁喷雾剂为医院制剂，主要成分为虎杖、芦荟、冰片等药物，用于治疗轻中度烧烫伤。其研究目前还处于试验阶段，动物烫伤试验结果表明，可加速结痂，且有一定的抗炎、促进组织生长和抑制瘢痕产生的作用。本试验中采用高效液相色谱法测定了肤舒宁喷雾剂中大黄素和芦荟苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－10AT／LC－ATVP型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；AB104－N型电子分析天平（梅特勒－托利多上海仪器有限公司）；SK3300H型超声波清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）；R206型旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）。大黄素对照品（批号为 110756－200110）、芦荟苷对照品（批号为 110787－200504），均购自中国药品生物制品检定所；肤舒宁喷雾剂，由本实验室自制；甲醇（上海化学试剂研究所）为色谱纯；乙腈（Merck公司）为色谱纯，水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件[1]与系统适用性试验

2．1．1 大黄素

色谱柱：C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－0．1%磷酸（80 ∶20）；检测波长：254 nm；流速：1．0 mL ／min；柱温：30℃；进样量为20 μL。理论板数按大黄素峰计算不低于3 000。在上述色谱条件下，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2．1．2 芦荟苷

色谱柱：C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流动相：以乙腈－水（25 ∶75）；检测波长：355 nm；流速：1．0 mL ／min；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。理论板数按芦荟苷峰计算不低于2 000。在上述色谱条件下，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

取虎杖90．0 g、芦荟20．0 g等药材，用75%乙醇1 L密封浸泡7 d，每天搅拌1次，过滤，照上法重复浸泡2次，合并3次滤液，回收乙醇，再加入1．5 g冰片，加水至500 mL即得肤舒宁药液。取大黄素对照品0．002 4 g，精密称定，加甲醇溶解，定容至50 mL，即得大黄素对照品溶液。称取芦荟苷对照品0．005 0 g，精密称定，加甲醇溶解，定容至50 mL，即得芦荟苷对照品溶液。精密量取肤舒宁药液1 mL，置100 mL圆底烧瓶内，精密加入三氯甲烷25 mL和2．5 mol／L硫酸溶液20 mL，精密称定，置80℃水浴中加热回流2 h，冷却至室温，再精密称定，用三氯甲烷补足减少的质量，摇匀。分取三氯甲烷液，精密量取10 mL，蒸干，残渣甲甲醇稀释至刻度，摇匀，取适量，过0．45 μm滤膜，即得大黄素供试品溶液。精密量取肤舒宁药液10 mL置100 mL容量瓶内，加入甲醇适量，超声处理（功率 250w，频率 33Hz）30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，取适量，过0．45 μm滤膜，即得芦荟苷供试品溶液。分别取缺虎杖、芦荟药材各3份样品，按比例同供试品溶液制备方法制得缺大黄素阴性对照品溶液。分别取缺芦荟药材，按比例同供试品溶液制备方法制得缺芦荟苷阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察[2]：分别精密量取大黄素与芦荟苷对照品溶液各 0．5，1．0，2．0，4．0，8．0 mL，置 10 mL 容量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL。以峰面积（Y）为纵坐标、对照品质量浓度为（X）为横坐标进行线性回归，得大黄素回归方程Y＝ 23 151X－3 768．2，r＝0．999 9（n＝5），线性范围为 2．400 ～48．00 μg／mL；芦荟苷回归方程为Y＝7 220．4X－ 2 476，r＝0．999 9（n＝5），线性范围为 5．000 ～100．0 μg／mL。

精密度试验：分别精密吸取同一大黄素和芦荟苷对照品溶液20 μL，按拟订色谱条件连续进样5次。结果大黄素峰面积的RSD为 0．46%（n＝5），芦荟苷峰面积的RSD为 0．50%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：分别取同一大黄素和芦荟苷供试品溶液，于制备 0，2，4，6，8，10 h 时按拟订色谱条件进样 20 μL，记录峰面积。结果大黄素峰面积的RSD为1．26%（n＝6），芦荟苷峰面积的RSD为0．49%（n＝6），表明大黄素和芦荟苷供试品溶液在12 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一肤舒宁药液样品5份，分别依法制备大黄素和芦荟苷供试品溶液，按拟订色谱条件，分别进样20 μL。结果样品中大黄素含量的RSD为0．48%（n＝5），芦荟苷含量的

RSD为1．56%（n＝5），表明方法重复性良好。

加样回收试验[3－4]：精密量取已知大黄素含量的肤舒宁药液（含量为0．304 mg／mL）1 mL 6份，分别加入已知含量的大黄素对照品溶液（48．00 μg／mL）2，4，6 mL，同法重复一组。依法制备大黄素供试品溶液，按拟订项色谱条件进样20 μL，计算回收率，结果见表1。精密量取已知芦荟苷含量的肤舒宁药液（0．341 g／L）2 mL 6份，分别加入已知含量的芦荟苷对照品溶液（100．0 μg／mL）1，2，3 mL，同法重复一组。依法制备芦荟苷供试品溶液，按拟订色谱条件进样20 μL，计算回收率。结果见表1。

表1 大黄素和芦荟苷加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

分别精密吸取大黄素对照品溶液（48．00 μg／mL）与 3份大黄素供试品溶液、芦荟苷对照品溶液（100 μg／mL）与 3 份芦荟苷供试品溶液各 20 μL，按拟订色谱条件进样分析，外标法以峰面积计算大黄素和芦荟苷的含量。结果见表2。

3 讨论

虎杖的阴性对照试验中，先前制备的是缺虎杖阴性对照品溶液，但随后发现芦荟中也含有大黄素，则改成缺虎杖及芦荟的阴性对照品溶液。

芦荟苷对照品试验中，发现芦荟苷前面有一峰，估计为其分解产物，且随着存放时间越长，产物峰面积越来越大，而芦荟苷峰面积则变小。该溶液见光不稳定后，立即新配对照品溶液且改用棕色瓶避光保存，缩短存放时间，并加快试验进度。在此过程中，还发现芦荟峰稍有拖尾现象，本试验色谱条件参考《中国药典（一部）》，因试验效果良好及时间紧张，未深究其色谱条件。