反相高效液相色谱法测定保婴镇惊丸中甘草苷含量

2014-07-14巩长芹李学红周利章

中国药业 2014年2期

巩长芹，李学红，周利章

（山东省临沂市药品检验所，山东临沂 276001）

保婴镇惊丸收载于部颁标准第八册，由大黄、甘草、朱砂组方，原质量标准中只有性状和检查项目而无含量测定，不能有效地控制该产品的质量。方中甘草是常用药，甘草苷为甘草的主要活性成分。因此，选择测定甘草药材中甘草苷的含量作为本品质量控制定量指标，并建立了准确、简便、可靠的甘草苷分析方法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，包括四元泵、在线脱气机、柱温箱、自动进样器、G1315D 1260DAD VL检测器（美国Agilent公司）；XS205DU型电子分析天平（梅特勒－托利多公司）；电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）。甘草苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为111610－201106，含量以93．7%计）；保婴镇惊丸（济南宏济堂制药有限责任公司，批号分别为 1012001，1012002，1012003）；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Agilent C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm），填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈－0．2%磷酸溶液（14∶86）；流速：1．0 mL ／min；柱温：40 ℃；检测波长：276 nm。理论板数按甘草苷峰计算应不低于3 000。在此条件下，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

精密称取甘草苷对照品5．19 mg，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。参考2010年版《中国药典（一部）》中快胃片的含量测定方法[1]。取本品，剪碎，取约0．7 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，用50%甲醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验：按保婴镇惊丸中处方比例精密称取全方中除甘草外的其他药材，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。照样品测定方法测定，结果在主成分出峰处无干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液 1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以对照品进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝1 609．09X＋4．850 7，r＝0．999 6（n＝6），结果表明，甘草苷进样量在 0．097 3～0．973 0 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：取甘草苷对照品溶液5 μL，分别进样6次，按拟订色谱条件测定，以峰面积计算。结果的RSD为0．24%（n＝6），表明仪器的精密度良好。

重复性试验：取同一样品（1012002）6份，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件分别进样测定，计算含量。结果甘草苷含量的RSD为1．26%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一份供试品溶液（1012002），分别于0，1，2，4，8，12，24 h 时进样测定。结果甘草苷含量的RSD为 1．37%（n＝7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：取6份已知含量的样品（1012002，甘草苷的含量为3．12 mg／g），精密称定，共取6份，每份中精密加入甘草苷对照品溶液，依法制备成供试品溶液，按拟订色谱条件测定。结果见表1。