黑木耳不同培养温度出耳期耐高温比较*

高 娃，韩增华**，戴肖东，马银鹏，王玉文

(1.黑龙江省科学院微生物研究所，黑龙江 哈尔滨 150010；2.黑龙江省科学院高技术研究院，黑龙江 哈尔滨 150090)

黑木耳不同培养温度出耳期耐高温比较*

高 娃1,2，韩增华1,2**，戴肖东1,2，马银鹏1，王玉文1

(1.黑龙江省科学院微生物研究所，黑龙江 哈尔滨 150010；2.黑龙江省科学院高技术研究院，黑龙江 哈尔滨 150090)

为研究菌丝培养温度对菌丝生长生理的影响及出耳期耳片的高温抗性，提高黑木耳出耳抗性和产品品质，实验设计5组不同发菌温度，对黑木耳菌丝培养温度、菌丝生理与出耳期耳片耐高温性展开研究，结果表明，15℃、20℃发菌菌丝生长速度较对照组(25℃)慢，但菌丝粗壮，培养期感染杂菌少，酶活性高。低温培养的菌丝出耳期抗杂菌污染能力强，耳片不易流耳。低温发菌有利于提高黑木耳出耳耐高温性。

黑木耳；培养温度；出耳；耐高温性

黑木耳是中温型菌，菌丝体在5℃～35℃都可生长，一般以22℃～28℃为适宜[1]。黑木耳发菌温度愈低，发育速度愈慢，菌丝体营养吸收越充分，菌丝体健壮，生活力旺盛，子实体结实色深肉厚，抗逆境性能强。相反，温度愈高，发育速度愈快，但菌丝体徒长脆弱，常易衰老，生活力不强，子实体色淡、质薄，商品价值低，抗性减弱[2]，因此控制好发菌温度至关重要。研究不同温度对菌丝体生长和不同温度对子实体结实的报道较多[3，4]，而研究发菌温度对出耳影响及出耳期耳片生长耐高温性的研究报道极少[5]，本实验设计5组不同发菌温度，对不同培养温度菌丝生理进行分析，并对出耳期耳片抗高温性进行比较，试验在室内智能出菇箱中进行，具体实施如下。

1 材料和方法

1.1 供试菌种

黑耳2号(国认品种)，黑龙江省科学院微生物研究所菌种保藏中心提供。

1.2 培养基

母种培养基：土豆 200 g(煮汁 1 000 mL)、琼脂粉 14.0 g、葡萄糖 20.0 g、磷酸二氢钾 3.0 g、硫酸镁 1.5 g、蛋白胨 0.5 g、维生素B110.0 mg，pH自然。原种培养基及栽培种培养基：硬杂木屑78%、麦麸20%、石膏1%、石灰1%。

1.3 实验方法

1.3.1 菌种制作

原种和栽培种培养料分别装 500 mL 葡萄糖玻璃瓶和 16.5 cm×35 cm 聚乙烯折角袋，原种每瓶装入培养料合干料约 175 g(湿料 500 g)，栽培种每袋装入培养料合干料 420 g(湿料 1 200 g)，121℃下灭菌 120 min，取 3 cm2的在母种培养基上活化菌种2块接种于原种培养料，25℃培养至菌丝发满。以120的原种接种量接入栽培种培养料中，不同温度下培养。

1.3.2 不同温度发菌及菌丝长势

于2012年3月5日同时生产接种栽培种菌袋100袋，每组20袋，分别于15℃、20℃、25℃(对照)、30℃、35℃的恒温培养箱中进行不同温度下菌丝培养，记录菌丝生长势，至满袋后于10℃保存至开口。

1.3.3 不同发菌温度酶活性比较

粗酶液制备和酶活性测定，按韩增华2008方法进行[6]。

1.3.4 实验室出菇箱出耳管理

于2012年5月10日开口，室内(20℃)放置 3 d 后，于2012年5月14日摆放于实验室的HM-216出菇箱(山东莘县格润菌业公司)中，每个培养温度选取15袋，菌袋间隔5 cm，出菇箱温度调控在(20±5)℃，通风间隔 30 min 通风 5 min，光照自然光，湿度90%～95%，待耳芽分化后，每天喷壶浇水2次，每次 10 min，耳片展片5分熟(约 3 cm～5 cm)时，观察各组耳片生长情况。

1.3.5 抗高温实验

不同培养温度耳片生长5分熟时，出菇箱其他条件不变，出耳温度增加至35℃，继续进行出耳管理，观察黑木耳出耳期高温对耳片生长的影响。

2 实验结果

2.1 菌丝生长情况

菌丝生长速度见表1、图1。

表1 菌丝生长势

处理4菌丝生长速度最快，菌丝细弱，颜色黄白，长满菌丝的培养料松软，弹性差。处理5菌丝生长速度前期快，后期缓慢，菌丝纤细，产色素，培养料松软无弹性。处理2、处理3菌丝生长速度较快，菌丝洁白、浓密、成束，培养料坚实有弹性。处理1菌丝生长缓慢、菌丝灰白，各处理菌丝生长速度差异极显著(p<0.01)。

2.2 菌丝营养生长阶段胞外酶活

菌丝营养生长阶段胞外酶活变化情况见图2。

如图2，处理1、处理2、处理3胞外漆酶、多酚氧化酶活性较处理4、处理5酶活性高；处理1、处理2滤纸纤维素酶活性较高，处理1羧甲基纤维素酶活性也较高，仅次于处理5；半纤维素酶各处理组差异不大，处理5略高于其他处理。处理4、处理5淀粉酶活性较高，处理2蛋白酶最高，处理3次之。

2.3 催耳芽及前期耳片生长

不同发菌温度出耳芽及耳片生长结果见表2、图3。

从表2、图3可见，处理1和处理2出耳芽快、大小均一，出芽率达100%，耳片生长速度快、整齐，颜色黑，耳型好，处理2表现更佳，处理3耳片生长速度较快但长势不齐。处理4和处理5耳芽形成慢，出芽率低，耳片生长缓慢，颜色浅，耳片薄，处理5表现最差，出耳芽率较其他组差异极显著(p<0.01)。

2.4 耳片生长高温抗性

不同发菌温度高温抗性情况见表3、图4。

由表3、图4可见，不同发菌温度耳片耐高温表现不同，处理1、处理2在35℃放置 10 d 耳片完整，20 d 后，耳片开始长白毛，流耳，已经感染斑点性杂菌，但大部分耳片完整，有弹性。处理3、处理4大部分流耳，部分已近脱落。处理5在35℃放置 7 d 耳片开始长白毛，10 d 产生褐斑，20 d 后，流耳严重，耳片全部脱落。杂菌污染率处理1、处理2相对较低，较处理3差异显著(p<0.05)，较处理4、处理5差异极显著(p<0.01)。

3 讨论

食用菌营养生长所需温度基本相近(20℃～30℃)，而生殖生长所需温度差别较大，不同种类的食用菌、同一种类不同品种的食用菌生长发育所需的温度也不同。滑菇、猴头、杏鲍菇一般认为是低温菇种，而草菇、香菇、姬松茸等则需较高温度才能结实，温度的高低可直接影响食用菌菌丝的生长速度和子实体的产量和质量。菌丝在不同温度下的生长差异反映了构成菌丝的细胞在不同温度下的生长分裂速度，也间接反应了菌丝生长代谢酶活性，研究不同温度下菌丝长势和酶活性变化，可为研究温度对食用菌子实体生长发育和高温抗性的影响奠定基础。

表2 不同发菌温度出耳芽及耳片生长

表3 不同发菌温度高温抗性

处理白毛出现时间∕d流耳耳片韧性杂菌耳片完整程度污染率∕%120Aa少较硬，有弹性褐斑少大部分完整60cC218Aab较多软，有弹性斑点多大部分完整65cBC314ABbc多软，无弹性斑点流耳少部分完整80bAB410BCcd很多软腐斑点严重流耳大部分残耳90abA57Cd全部软腐全部流耳根部留有残耳98aA

在适当范围内增加温度可促进菌丝快速生长，通常以菌丝在PDA培养基上生长速度最快的温度为生产中的发菌温度。温度对食用菌子实体生长的影响报道较多[7-9]，但高温导致的菌丝徒长对子实体生长发育的影响研究报道很少，而子实体生长阶段高温虽然有利于生长周期的缩短，但是却会导致产量降低、品质下降以及污染率升高，因而应采取比最快生长温度稍低的温度进行生产较为适宜。

本研究通过比较不同培养温度处理对黑木耳菌丝长势、酶活变化、现耳芽、出耳性状及出耳期高温抗性的影响，筛选出了合适的黑木耳培养温度为20℃，此温度下培养的菌丝，对后期出耳及抗高温均有显著的效果，该研究为黑木耳菌丝培养，黑木耳出耳品质的改良提供实验数据。

[1]曾绩.黑木耳高产栽培技术[J].农村科技，2012(11):56-57.

[2]陈影，姚方杰，刘桂娟，等.黑木耳代用料栽培的注意事项和建议[J].中国食用菌，2010，29(2)：55-58.

[3]李文武，薛菲菲，周建方.香菇生长对温度要求及调控措施[J].食用菌，2013，35(2)：51-52.

[4]唐利华，郭倩，于海龙，等.培养时间和温度对工厂化瓶栽杏鲍菇出菇的影响[J].食用菌学报，2010(增刊)：66-69.

[5]韩增华，张丕奇，张介驰，等.黑木耳菌丝生理后熟与栽培特性的关系[J].食用菌学报，2012，19(2)：45-49.

[6]韩增华，张丕奇，孔祥辉，等.黑木耳胞外酶活变化与栽培性状比较的研究[J].食用菌学报，2007，14(4)：41-46.

[7]杜双田，周锋利，陈德育.温度对蛹虫草生长的影响[J].西北农林科技大学学报：自然科学版，2007，35(5)：159-162.

[8]陈兴.温度对杨树菇栽培性状影响的统计学分析[J].中国食用菌，2004，23(4)：16-19.

[9]冯志勇，潘迎捷，程继红，等.低温胁迫对香菇转色和原基形成的影响[J].中国食用菌，2004，22(4)：20-22.

2014上半年全国香菇出口数量同比增长9.5%

从商务部对外公布数据中了解到，2014年1月～6月，全国出口香菇数量为47 453.9 t，同比增长9.5%，金额为6.7亿美元，同比增长20.8%，平均单价为14033.5美元·t-1，同比增长10.3%。2014年6月，我国出口香菇数量为9 108.4 t，环比下降0.4%，金额为1.4亿美元，环比增长3.6%，平均单价为15 238.7美元·t-1，环比增长4%，同比出口数量增长2.8%，金额增长9.8%，平均单价增长6.8%。

易菇网

2014.10.10

Comparison of Different Culture Temperature on the High-temperature Resistance in Ear Formation ofAuriculariaauricula-judae

GAO Wa1,2, HAN Zeng-hua1,2, DAI Xiao-dong1,2, MA Yin-peng1, WANG Yu-wen1

(1.Institute of Microbiolog, Heilongjiang Academy of Sciences, HarbinHeilongjiang150010; 2.Institute of Advanced Technology, Heilongjiang Academy of Sciences, HarbinHeilongjiang150090)

To improve the resistance of the ear formation and the product quality ofA.auricula-judae, the effect of mycelial culture temperature on mycelial growth and the high-temperature resistance in the period of ear formation was carried out in our study. Five treatments(15℃, 20℃, 25℃, 30℃, 35℃)were designed to compare the differences of mycelia culture temperature, mycelia physiology and the resistance to high temperature. The results showed that the mycelial growth rate of both 15℃ and 20℃ treatments was lower than that of the control group (25℃), however, the hyphae were thicker and stronger, the infectious microbes infect less, and the enzyme activity was higher. Furthermore, the hyphae owned a higher ability to resist other microorganism, and the rotting ears possessed a very low rate when it cultured in a lower temperature. So we deduced that a lower culture temperature was beneficial to increase the high-temperature resistance in the period of ear formation ofA.auricula-judae.

A.auricula-judae; Culture temperature; Ear formation; High-temperature resistance

*项目来源：黑龙江省科学院科技成果中试与熟化项目“黑木耳优质高产栽培管理技术推广”(YZS13GWV14)；现代农业产业技术体系建设专项资金“黑木耳栽培技术”(CARS-24)。

高娃(1970-)，女，高级工程师，主要从事食用菌菌种保藏、分类、鉴定研究。

**通信作者： 韩增华，研究员级高级工程师。E-mail：hanzenghua77@126.com

2014-09-24

S646.6

A

1003-8310(2014)06-0026-03