腺苷及其受体激动剂对不稳定型心绞痛患者IL-18的影响

2014-07-05李永辉邢晓春

天津医药 2014年11期

李永辉邢晓春张寰

药物临床观察

李永辉邢晓春张寰△

目的观察腺苷及腺苷受体激动剂对不稳定型心绞痛（UAP）患者白介素（IL）-18的影响，探讨腺苷受体的作用机制。方法选取15例UAP患者（UAP组）及15例健康志愿者（对照组），采用腺苷及腺苷受体激动剂干预全血标本,双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测IL-18。结果低浓度腺苷(1～100 μmol/L)对UAP组IL-18表达有增强效应，高浓度(1 mmol/L)有抑制效应。腺苷A1受体激动剂与A3受体激动剂对IL-18表达有增强效应，而腺苷A2a受体激动剂对IL-18表达有抑制效应，腺苷A2b受体激动剂对IL-18表达未见明显效应。结论腺苷在低浓度时对UAP患者IL-18的表达有促进作用，可能通过腺苷A1和A3受体发挥效应；高浓度时有抑制作用，可能通过腺苷A2a受体发挥作用。

心绞痛,不稳定型；白细胞介素18；腺苷；受体,腺苷A1；受体,腺苷A2；受体,腺苷A3

腺苷是一种内源性嘌呤核苷酸，机体遭受炎症或组织缺血缺氧时，腺苷局部浓度能增至生理浓度的100倍[1]，腺苷可通过其受体对机体损伤或组织缺氧等做出适应性反应，不同腺苷受体可发挥独特甚或重叠效应[2]。白介素（IL）-18是一种免疫调节因子，研究发现腺苷对急性冠脉综合征患者外周血IL-18表达具有双向作用[3]，具体受体机制鲜见报道。本研究拟通过腺苷受体激动剂模拟腺苷观察其对不稳定型心绞痛患者IL-18表达的影响，探讨其具体的受体机制。

1 对象与方法

1.1 研究对象病例来源于我院2009年6月—2010年6月住院患者。本研究共入选不稳定型心绞痛（UAP组）及健康受试者（对照组）各15例。UAP组入选标准：UAP，典型心绞痛症状，心绞痛发作时，心电图出现暂时性ST段缺血性压低大于1 mm或ST段抬高大于3 mm，发作缓解后正常或接近正常；心肌酶正常；距末次发作12 h以内；梗死后心绞痛排除在外。排除标准：患有肝、肾功能障碍，恶性疾病，感染性疾病，风湿性、自身免疫疾病，营养不良性疾病，心肌病，心肌炎，心内膜炎，近期有手术史，有炎症、肿瘤、发热、贫血史者等情况均不入选。对照组、UAP组年龄（岁）比较（61.46± 4.42 vs 61.60±4.11，t=0.085，P=0.933）、性别（男/女）比较（8/7 vs 9/6，P=1.0）差异均无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 试剂及仪器腺苷、腺苷A1受体激动剂（CPA）、腺苷A2a受体激动剂（CGS-21680）、腺苷A2b受体激动剂（NECA）、腺苷A3受体激动剂（IB-MECA）、HEPES、RPMI1640、二甲基亚砜（DMSO）均购自Sigma公司；人IL-18诊断试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司。ELX-800型酶标仪为美国BIO-TCK公司产品，CO2孵箱（型号HF-90）为日本三洋科学仪器有限公司产品。

1.2.2 标本采集 UAP组患者在疼痛发生后12 h以内抽取肘正中静脉血，对照组于清晨空腹抽取肘正中静脉血3 mL置于肝素抗凝试管中混匀，室温下保存＜2 h。将患者外周全血分装于EP管中，每个管中加入100 μL全血，再加入100 μL RPMI1640（含有20 mmol/L HEPES使pH维持在7.3）混匀。

1.2.3 药物干预装有稀释血液的EP管分为5组：分别加入腺苷、CPA、CGS-21680、NECA、IB-MECA，使其终浓度各分别为0、1、10、100 μmol/L及1mmol/L；将处理后血样本置于CO2孵箱（37℃，5％CO2）孵育12 h。然后取出待测样本，700 r/min离心10 min，取上清保存在-20℃冰箱待检测。待测血浆中无红细胞裂解。

1.2.4 检测方法 IL-18检测采用双抗体夹心ABC-ELISA法，以标准品1 000、500、250、125、62.5、32、16、0 ng/L的OD值在半对数纸上做图，画出标准曲线。根据样本OD值在该曲线图上查出相应人IL-18水平。

1.3 统计学方法采用SPSS 16.0统计软件包进行分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，2组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多重比较用LSD法；计数资料采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同浓度腺苷对IL-18的影响当腺苷浓度0 μmol/L时，UAP组与对照组IL-18表达比较差异有统计学意义（t=14.382，P＜0.001）。对照组中，不同浓度腺苷对IL-18的表达未见明显差异；UAP组中，腺苷低浓度时（1～100 μmol/L）可增强IL-18的表达，达到一定峰值浓度（1 mmol/L）则抑制IL-18表达,见表1。

2.2 不同受体激动剂对IL-18的影响腺苷A1受体激动剂及腺苷A3受体激动剂随浓度升高促进IL-18表达的效应增强；而A2a受体激动剂随浓度升高则抑制IL-18表达的效应增强；A2b受体激动剂对IL-18的表达未见明显作用，见表2。

3 讨论

腺苷受体亲和力的差异导致其发挥不同的生理效应[4]，临床研究发现腺苷及腺苷拟似物在高浓度时可缩小梗死面积，提高心肌梗死患者的远期生存率，但在浓度较低时未见明显作用[5-6]。笔者前期研究发现腺苷对急性冠脉综合征患者外周血IL-18表达具有双向作用，高浓度腺苷对IL-18呈抑制作用，进一步探讨腺苷对IL-18的具体受体机制可能为治疗UAP提供新的思路[3]。IL-18是一种多效能炎症因子，能导致动脉粥硬化斑块增大，与动脉粥样硬化斑块脆性有关，敲除小鼠的IL-18基因可延缓动脉粥样硬化的进程[7]。Li等[8]研究发现：IL-18与急性冠脉综合征发生密切相关，Bouki等[9]采用光学相干断层成像（OCT）对急性冠脉综合征（ACS）患者的斑块进行分析，发现IL-18与冠脉粥样硬化斑块不稳定性密切相关。其机制可能是通过诱导干扰素（IFN）-γ的产生及提高基质金属蛋白酶的活性使胶原蛋白降解增多等多个途径，促使斑块的不稳定[10]。大量研究证实IL-18可预测冠脉事件的发生，可能是稳定动脉粥样硬化斑块的治疗靶点[11]。

Tab.1 Effects of different concentrations of adenosine on the expression of IL-18 in UAP group and control group表1 不同浓度腺苷对UAP和正常人IL-18的影响 (ng/L，±s)

＊＊P＜0.01；a与0 μmol/L组比较，b与1 μmol/L组比较，c与10 μmol/L组比较，d与100 μmol/L组比较，P＜0.05；表2同

组别对照组UAP组0 μmol/L 3.74±0.87 18.96±4.01 1 μmol/L 3.81±0.66 24.47±3.81a10 μmol/L 4.16±0.55 35.11±4.16ab100 μmol/L 4.31±0.71 46.04±4.31abc1 mmol/L 3.87±0.62 18.96±3.87bcdF 1.871 101.364＊＊

Tab.2 Effects of different concentrations of adenosine receptor agonists on the expression of IL-18 in UAP group表2 不同浓度腺苷受体激动剂对UA患者IL-18的影响(ng/L，±s)

组别0 μmol/L 1 μmol/L 10 μmol/L 100 μmol/L 1 mmol/L F CPA 18.961±3.869 20.711±4.209 26.136±3.481ab36.513±3.955abc36.909±3.518abc69.696＊＊CGS-21680 18.961±3.869 15.130±2.007a12.180±1.997ab9.839±1.608abc6.827±1.316abcd56.381＊＊NECA 18.961±3.869 18.269±1.849 18.874±1.628 18.106±1.798 18.227±2.063 0.100 IB-MECA 18.961±3.869 21.844±3.711 27.669±4.095ab36.980±4.008abc38.843±3.731abc72.842＊＊

本研究发现，UAP组IL-18表达明显高于对照组，提示炎症和免疫学机制可能参与了动脉粥样斑块破裂的病理生理学过程。腺苷对正常对照组外周血IL-18表达未见明显影响，而对UAP组发挥明显作用，提示斑块破裂时患者单核细胞活化，从而增强IL-18的表达，进而加剧疾病进程。采用不同浓度腺苷对UAP患者外周血进行干预后发现，腺苷可对IL-18表达发挥双向作用，在腺苷浓度100 μmol/L以内，随浓度增高而表达增加，而腺苷浓度达到一定峰值（1 mmol/L）后，IL-18表达降低，提示腺苷在临床治疗时，应采用较大浓度。这与AMISTAD-Ⅱ研究结果一致[6]。腺苷A1受体、A3受体激动剂可促使UAP患者IL-18表达增加，而腺苷A2a受体激动剂可促使IL-18表达降低，腺苷在低浓度对IL-18表达的增强效应可能是通过腺苷A1及A3受体发挥作用，而高浓度时对IL-18表达的抑制效应可能是通过腺苷A2a受体发挥作用，而腺苷A2b受体与此无关。腺苷A2a受体在改善心肌缺血、稳定易损斑块、改善预后方面发挥重要作用，可能为临床治疗提供新的思路。

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（2014-02-09收稿 2014-07-07修回）

（本文编辑李国琪）

Effects of Adenosine and the Selective Adenosine Receptor Agonist on the Expression of Interleukin-18 in Patient with Unstable Angina

LI Yonghui,XING Xiaochun,ZHANG Huan△
Department of Cardiology,Fourth Central Hospital of Tianjin,Tianjin 300140,China
△

E-mail:huan_cn@126.com

ObjectiveTo observe the effects of adenosine and adenosine receptor agonist on the expression of interleukin-18(IL-18)in patients with unstable angina(UAP),and the mechanism of adenosine receptor agonists thereof.MethodsFifteen UAP and 15 healthy volunteers were included in this study.The effects of adenosine and the selective adenosine receptor agonists on the expression of IL-18 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).ResultsThe lower concentration of adenosine(1-100 μmol/L)increased the expression of IL-18 in UAP group;whereas the higher concentration of adenosine(1 mmol/L)inhibited the expression of IL-18.The adenosine A1receptor agonist and A3receptor agonist increased the expression of IL-18,while the adenosine A2areceptor agonist inhibited the expression of IL-18.There was no significant effect for A2breceptor agonist on the expression of IL-18.ConclusionThe lower concentrations of adenosine can enhance the expression of IL-18 through adenosine A1and A3receptors in UAP.The higher concentrations of adenosine can inhibit the expression of IL-18 through adenosine A2areceptors.Adenosine can promote IL-18 expression in lower concentrations.

angina,unstable;interleukin-18;adenosine;receptor,adenosine A1;receptor,adenosine A2;receptor, adenosine A3

R541.42

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.11.024

天津市卫生局科技基金资助项目（09KZ21）

天津市第四中心医院心内科CCU（邮编300140）△

E-mail:huan_cn@126.com