EDTA依赖性假性血小板减少症一例及相关文献复习

曲正，丘军，董成林，王璇

(上海中冶医院内科1、检验科2，上海200941)

·短篇报道·

EDTA依赖性假性血小板减少症一例及相关文献复习

曲正1，丘军1，董成林2，王璇2

(上海中冶医院内科1、检验科2，上海200941)

乙二胺四乙酸盐；假性血小板减少症；血小板计数

乙二胺四乙酸盐(EDTA)偶可引起血小板体外聚集，导致EDTA依赖性假性血小板减少症(EDTA-depe ndent pseudothrombocytopenia，EDTA-PTCP)。近年来检验医学领域屡有报道，但因发生率低，临床医生认识不足，时有误诊发生，导致不必要检查或过度治疗。本文报道1例EDTA-PTCP患者，结合文献探讨病变的发生机制、临床特点和诊断以及假性血小板减少的鉴别，以提高对EDTA-PTCP的认识。

1 资料与方法

1.1 病例资料患者，男，52岁，因“头昏、左侧肢体活动乏力5个月”于2014年3月18日入院。有“脑梗死、冠心病、高血压病”病史，无齿龈出血、鼻衄，无呕血、黑便，无咯血，无腰痛、酱油色尿、肉眼血尿。查体：皮肤、黏膜未见瘀点、瘀斑、出血点，针刺部位无出血征象。患者入院后化验血常规，采用EDTA-K2抗凝血，在全自动血细胞计数仪上检测，其中血小板结果为18×109/L，重新采EDTA-K2血复检，结果为21×109/L，血细胞分析仪提示“血小板聚集？”。患者近期两次在其他医院化验血小板结果分别为182×109/L、199×109/L。结合患者病史、查体考虑EDTA-PTCP可能。

1.2 仪器、试剂BX51显微镜及成像系统(日本Olympus)、XT-1800i全自动血细胞分析仪及原装配套试剂(日本Sysmex，每日室内质控在控，历次参加上海市临检中心室间质评均符合要求)、瑞氏-姬姆萨染色液(珠海贝索生物技术有限公司)、真空采血管(EDTA-K2、3.2%枸橼酸钠、无添加剂三种，江苏康健医疗用品有限公司)、80 μl一次性自吸式医用微量吸管(上海永良医疗用品有限公司)。以上器材均在有效使用期内。

1.3 方法

1.3.1 样本采集重新采集3份样本，1份枸橼酸钠抗凝2 ml，1份EDTA-K2抗凝2 ml，另1份在无添加剂的采血管中加入0.96 ml血细胞稀释液，再用80 μl微量吸管取全血3管加入血细胞稀释液中。以上3份样本在采血后立即轻轻颠倒混匀5～6次。

1.3.2 样本检测3份样本分别在0 min、8 min、15 min、30 min、60 min、120 min、180 min上机检测。枸橼酸钠抗凝管中因液体抗凝剂与血的比例为1:9，故其结果乘以稀释倍数1.11。每份标本计数2次，取平均值。

1.3.3 血涂片染色镜检取患者EDTA抗凝血制成血涂片，并用瑞氏-姬姆萨染色液染色镜检，仔细观察整个血涂片头、体、尾各部分血小板的分布情况。

2 结果

枸橼酸钠抗凝法和血细胞稀释液法在7个不同时间点的血小板计数结果均比较一致，波动范围不大，不同时间的EDTA抗凝法血小板计数结果低于以上两种方法，且随时间的延长呈现逐渐减少趋势，前后波动范围较大，见表1。

表1 不同处理方法血液标本的血小板在不同时间内计数结果比较(×109/L)

在全自动血细胞分析仪对3份不同标本检测时，仪器提示EDTA抗凝血标本有“血小板聚集？”。取EDTA抗凝血制成血涂片，经染色后镜检，油镜下发现血涂片的头、体部位血小板异常少见(图1a)，体、尾结合部位出现血小板聚集现象(图1b)，尾部可见大量聚集成团的血小板(图1c)。

图1 EDTA抗凝血镜检结果

3 讨论

EDTA应用广泛，可与血液当中钙离子结合，起到抗凝作用，而且对红、白细胞形态影响极小。自1993年由国际血液学标准化委员会(ICSH)推广为普遍使用的血液抗凝剂，在全自动血细胞分析仪中广泛使用。假性血小板减少或假性血小板正常的检测结果也因此出现，假性血小板减少症占全部血小板减少症的15%～30%[1]，主要是由使用抗凝剂EDTA所引起。EDTA-PTCP患者采集经EDTA抗凝的标本后，血小板计数随标本存放时间的延长而减少，4 h达到最低点[2]。本例患者呈上述特点。

3.1 发生机制本病发病机制仍不清楚。目前，多数学者认为EDTA-PTCP的发生由于免疫因素造成，在EDTA作用下，抗血小板自身抗体引起血小板聚集。这些抗体可以是IgG、IgM或IgA，以IgG居多，他们直接针对血小板隐匿性抗原。EDTA的作用位点可能是血小板表面糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)，具体可能是GPⅡb片段，这个抗原平时隐藏在复合物中。在体外，EDTA与钙离子结合成螯合物可促使血小板形态发生改变，GPⅡb片段分离暴露，容易和血浆中存在的抗体结合[3]，产生一系列生物活性物质，后者活化血小板纤维蛋白原受体，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团。EDTA-PTCP的作用与温度有关，室温下出现聚集，在37℃条件下采血则不产生聚集[4]。

3.2 临床特点与诊断文献报道，EDTA-PTCP发生率为0.09%～0.11%[5]，住院患者发生率高于健康人群，为1.5%～1.9%[6]。可能与住院患者标本检测延迟有关。本病例即为住院患者，且由于患者近期两次在门诊检测血常规时，一次用EDTA抗凝法，但因采血后立即上机检测血小板检测值受影响较小，另一次采用末梢血稀释模式检测，对血小板的检测结果无影响，故两次结果均在正常范围内。目前发现的EDTA-PTCP均为散发，患者的年龄、性别、发作年龄、持续时间、用药史、疾病史、及体质等均无特征性。查体皮肤、黏膜无出血点、紫癜。化验室检查除血小板计数偏低外，其他凝血系列指标均正常；并且患者没有任何出血倾向和血液系统疾病史；此外，可引起血小板减少的疾病的相关检查指标在正常范围之内，如：血尿酸、肌酐、甲状腺功能、抗核抗体、补体C3、C4等。而且经跟踪研究发现，患者在EDTA-PTCP期间不表现出任何症状和特征[5]。

实验室检查时，若出现仪器测定值远低于人工血小板计数(为1/3～1/10倍)，并且仪器测定的血小板数值随标本放置时间的延长而持续下降时，应考虑EDTA-PTCP可能。对全自动血细胞分析仪计数结果异常的标本进行涂片，若镜下发现血小板聚集，排除抽血不当、冷凝聚等因素造成的血小板聚集后，改用其他抗凝剂时结果得到纠正且未出现血小板聚集即可诊断为EDTA-PTCP。

3.3 假性血小板减少的鉴别血小板凝集块达中性粒细胞大小，大血小板，均可引起假性血小板减少，在病理情况下，例如骨髓及骨髓外增生综合征，如白细胞大小的血小板很难鉴别，其血小板可能被误认为白细胞或红细胞[7]。冷凝集性和药物(如血小板表面糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体的药物阿昔单抗)可诱发的假性血小板减少[8]。高镁血症也可引起血小板假性减少[9]。高胆固醇和高甘油三酯血症时，低密度脂蛋白和载脂蛋白B100部分患者中可引起假性血小板减少；糖尿病、高血压患者由于血管内皮易损，血小板容易凝集而不容易解离，常导致仪器血小板计数减少[10]。

总之，造成假性血小板减少症的原因虽然较多，但是临床中如遇有全自动血细胞分析仪使用EDTA抗凝血检测血小板计数显著较少，而临床检查又无血小板减少症的体征。其他凝血指标均正常时，应立即考虑EDTA所致假性血小板减少的可能，改用枸橼酸钠抗凝、稀释检测模式或人工血小板计数作对照，大多可以避免假性血小板减少所致的误诊、误治。

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R558+.2

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1003—6350（2014）21—3261—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.21.1280

2014-03-28)

董成林。E-mail：mcc_jyk@163.com