超微粉碎技术用于脾胃宝外敷散制备工艺的优化研究*

张晶蓉，王 莘，林 英，丛向梅，胡晨旭，姜 佳

(1.天津市中医药研究院附属医院，天津300120;2.中恩(天津)医药科技有限公司，天津300308)

药物制剂

超微粉碎技术用于脾胃宝外敷散制备工艺的优化研究*

张晶蓉1，王 莘1，林 英1，丛向梅1，胡晨旭2，姜 佳2

(1.天津市中医药研究院附属医院，天津300120;2.中恩(天津)医药科技有限公司，天津300308)

目的:对经微粉化与常规粉碎法制备的脾胃宝外敷散进行溶出情况对比研究，探索超微粉碎对外敷散质量的影响。方法:采用HPLC法测定两种粉碎方法制备的脾胃宝外敷散中主要有效成分阿魏酸、丁香酚的溶出情况。结果:超微粉碎工艺可使脾胃宝外敷散中当归和丁香的有效成分溶出量增加，最优工艺均为超微粉碎5 min，过200目筛。结论:超微粉碎技术可应用于脾胃宝外敷散中当归和丁香的制备，且均接近于生药材含量。

超微粉碎工艺，脾胃宝外敷散，阿魏酸，丁香酚，含量测定

超微粉碎技术是利用碾磨、冲击和剪切等作用力，将物料粉碎至10～25 μm，从而改善物料的溶解性、分散性、吸附性，甚至生物活性和化学活性也能得以改善［1］。应用这一技术使原生药制成的制剂作用强度显著高于传统粉碎技术加工的同处方制剂，且有节省药材、质量可控等特点，为进一步开发和应用中药医院制剂提供技术保障。

脾胃宝外敷散由当归、丁香等24味中药组成，经分别粉碎至细粉，过筛混匀而成，具有健脾胃、温肾和血、消胀止痛的功效。阿魏酸是当归有机酸部分的主要成分之一，具有抗氧化、抗血栓、抗血脂、抑菌消炎等功能。丁香富含挥发油，普通药材粉末须经细胞壁浸润、溶胀和浓缩梯度的作用下缓慢释放有效物质，严重影响挥发油在体内的吸收。本试验目的在于应用高效液相色谱法对阿魏酸和丁香酚超微粉碎前后含量进行对比研究，从而探求脾胃宝外敷散的优化工艺。

1 实验试药与仪器

1.1 药材与试剂当归、丁香饮片购自亳州饮片厂，经天津中医药大学生药教研室李天祥副教授鉴定，分别为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根和桃金娘科植物丁香Eugenia caryophyllata Thunb的干燥花蕾。阿魏酸对照品(含量≥98%，中国药品生物制品检定所，批号110773－200611);丁香酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号110725－200209);甲醇(天津精细化工有限公司，色谱纯);水为超纯水，其他试剂均为分析纯。冰醋酸AR级(北京化工厂);5%的炭末混悬液(自制)。

1.2 仪器BFM－6L型贝利超微粉碎机(济南倍力粉技术工程有限公司);FW型高速万能粉碎机(武汉理科光电技术有限公司);岛津LC－20AT型高效液相色谱仪(LC－20AT溶液传输单元，SPD－M20A二极管阵列检测器，CTO－20A柱温箱，LC solution色谱工作站);KQ－100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);LD4－2型低速离心机(北京医用离心机厂)。

2 常规粉碎法和超微粉化对阿魏酸溶出量的比较

2.1 粉体制备取当归药材1 kg，真空干燥2 h，常规粉碎，过100目筛，得当归普通粉;取当归药材1 kg，置超微粉碎机中粉碎(1、2和5 min)，过200目筛(平均粒径小于25 μm，粒径分布范围为15～28 μm)，得当归超微粉［2］。

2.2 色谱条件YWG－C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，10 μm);流动相为甲醇－1%冰醋酸水溶液(1∶1);检测波长为320 nm;柱温35℃;流速1.0 ml/min;进样量10 μl;理论板数按阿魏酸峰计应不低于3 000。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的配制精密称取阿魏酸对照品4.997 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品的浓度为199.88 μg/ml，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得阿魏酸对照品储备液。

2.3.2 供试品溶液的制备精密称取传统粉碎后的当归粉末及各不同处理时间的超微粉碎样品各2.0 g，置100 ml三角瓶中，加甲醇50 ml，密塞;室温超声提取30 min，放凉后，置离心机中4 000 r/min离心10 min，滤过;残渣同法再处理1次，合并2次上清液，定容100 ml，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3.35 %的炭末混悬液(自制)取15 g炭末，加明胶15 g(稳定剂)，加蒸馏水配成300 ml混悬液。

2.4 线性关系考查取上述阿魏酸对照品储备液，配成系列浓度，各进样10 μl，按色谱条件测定。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得回归方程为Y= 28 126．15 X+19．38(r=0．999 9)，线性范围为0.199 88～4.997 00 μg/L。

2.5 精密度试验取对照品溶液1份，进样10 μl，重复5次，RSD为2.0%。

受当时时尚杂志上大量美图的吸引以及视觉大环境的影响，时尚元素开始越来越多地进入到人像摄影的创作中，占据了摄影镜头。很多片子在走时尚化的路线时，更注重形式、构成、光影的变化，时尚、唯美、精致的视觉感成了主角。

2.6 稳定性试验取供试品溶液1份，分别于放置0、1、2、4、8和24 h后测定，其测定结果的相对标准偏差RSD为1.5%，表明本样品在24 h内测定稳定。

2.7 加样回收率试验精密称取当归超微粉碎粉末样品6份，每份2.0 g，分别精密加入阿魏酸对照品1.199 28 mg，按“2.3.2”项下供试品溶液制备方法制备，按“2.2”项下方法测定，结果平均回收率为99.03%，RSD为0.67%，见表1。

表1 __阿魏酸加样回收率试验结果

2.8 样品测定结果按供试品溶液制备方法操作，测定普通粉碎后的当归及不同条件制备的微粉中阿魏酸溶出量进行测定，结果超微粉碎1 min和2 min与普通粉碎比较，差异显著(P＜0.05);超微粉碎5 min与普通粉碎比较，差异非常显著(P＜0.01)。见表2。

表2 __不同粒度的当归中阿魏酸溶出量

3 常规粉碎法和超微粉化对丁香酚的溶出量影响

3.1 粉体制备取丁香药材1 kg，真空干燥2 h，常规粉碎，过100目筛，得丁香普通粉;取丁香药材1 kg，置超微粉碎机中粉碎(1、2和5 min)，过200目筛，得丁香超微粉(平均粒径小于25 μm，粒径分布范围为15～28 μm)。

3.2 色谱条件［3］YWG－C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，10 μm);流动相为甲醇－水(60∶40);检测波长为280 nm;柱温30℃;流速1.0 ml/min;进样量10 μl;理论板数按丁香酚峰计应不低于3 000。

3.3 溶液的制备

3.3.2 供试品溶液的制备取普通粉约0.02 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理40 min，放冷，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，得丁香普通粉供试品溶液;超微粉同法处理得丁香超微粉供试品溶液。

3.4 线性关系考查取丁香酚对照品溶液，分别进样配成系列浓度，各进样10 μl，按色谱条件测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标。回归方程Y= 8 140 X+23．132(r=0．999 9)，在0.813 0～40.650 0 μg范围内线性关系良好。

3.5 精密度实验取对照品溶液1份，进样10 μl，重复5次，RSD为0.9%，表明该方法精密度良好。

3.6 稳定性实验取供试品溶液1份，分别于放置0、1、2、4、8和24 h后按“3.2”项下色谱条件测定，记录峰面积，RSD为1.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

3.7 加样回收率实验精密称取丁香超微粉末6份，每份0.02 g，分别精密加入丁香酚对照品4.065 0 mg，按“3.3.2”项下供试品溶液制备方法制备，依“3.2”项下色谱条件测定，结果平均回收率为98.82%，RSD为1.89%，见表3。

表3 _丁香酚加样回收率试验结果

2.8 测定结果按供试品溶液制备方法操作，测定普通粉碎后的丁香及不同条件制备的微粉中丁香酚含量进行测定，结果超微粉碎1、2和5 min与普通粉碎比较，丁香酚的溶出量均有所增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表4。

表4 不同粒度的丁香中丁香酚溶出量

4 讨论

中药生药粉末在中医临床治疗中有着悠久的应用历史，粉碎是中药生药材加工和制剂生产过程中重要的环节之一。本研究以脾胃宝外敷散中当归和丁香为研究对象，以当归中阿魏酸和丁香中的丁香酚为指标，考查常规粉碎和超微粉碎对指标成分的影响。结果表明，药材经超微粉碎后，阿魏酸和丁香酚的溶出量分别是普通粉末的1.50～1.86倍和1.12～1.20倍。不同粉碎时间的微粉样品中，5 min的阿魏酸和丁香酚的提取率最高，且接近于药材含量。

超微粉碎技术可以大大缩短药材的粉碎时间，并可使细胞壁破碎，其物理状态的变化亦可引起药效学等方面的变化［4，5］。虽然超微粉碎技术应用于中药复方制剂有待于进一步研究，粉碎过程中带来的金属离子等污染物给药品质量带来很多问题，但超微粉碎技术是中药现代化的必然趋势。相信随着研究的不断深入，超微粉碎技术将越来越规范和完善。

1王爱武，吕文海，耿晖.超微粉碎在中药生产中应用概况及展望［J］.时珍国医国药，2000，11(7):669－670

2陈绪龙，赵国巍，廖正根，等.当归超微粉体和普通粉体的粉体学性质比较［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(18):1－5

3刘莉，刘强，吴伟健.丁香普通粉与超微粉中丁香酚体外溶出度的比较［J］.时珍国医国药，2010，21(5):1070－1071

4袁清照，张水寒，杨璞，等.超微粉碎技术在枳术丸中的应用及其溶出影响研究［J］.中国实验方剂学杂志，2009，15(9):10－13

5张祥伟，罗志奇，伍彪，等.小柴胡汤超微饮片与常规饮片化学成分溶出特性的对比研究［J］.时珍国医国药，2009，20(11):2750－2752

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