电针“三阴交穴”调节自然围绝经期大鼠雌激素及单胺类神经递质的实验研究

彭晓涛，徐玲，李由，程凯

（北京中医药大学针灸推拿学院，北京 100029）

·基础研究·

电针“三阴交穴”调节自然围绝经期大鼠雌激素及单胺类神经递质的实验研究

彭晓涛，徐玲，李由，程凯

（北京中医药大学针灸推拿学院，北京 100029）

目的研究电针“三阴交穴”对自然围绝经期大鼠单胺类神经递质的影响。方法将大鼠分为正常组、模型组与电针组，电针组大鼠在三阴交处进行电针，隔日1次，共治疗15次。其他两组大鼠进行常规饲养，不进行针刺，隔日抓取。酶免方法（Elisa）检测大鼠卵巢雌二醇（E2）水平和海马部位的单胺类神经递质含量。结果Elisa结果提示，与正常组比较，模型组大鼠卵巢E2含量降低了59.17%（P＜0.01）。与模型组比较，治疗组大鼠卵巢E2含量显著增高了65.49%（P＜0.01），但仍未恢复至正常水平（P＜0.01）。中枢神经递质的结果显示：与正常组比较，模型组大鼠海马区五羟色胺（5-HT）含量升高了34.35%，NE、DA分别下降了33.86%和34.38%（P＜0.01）。与模型组比较，治疗组大鼠5-HT含量明显降低了11.13%（P＜0.05），NE显著上调了19.18%（P＜0.05），差异有统计学意义。治疗组DA含量虽升高了7.59%，但差异无统计学意义（P＞0.05）。与正常组比较，模型组的5-HT／NE的比值显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，治疗组的5-HT／NE的比值显著降低了23.47%（P＜0.01）。结论电针“三阴交”穴可以调节自然围绝经期大鼠的性激素水平及中枢单胺类神经递质的水平。

围绝经期；电针；穴，三阴交，血清素；雌二醇；大鼠，Sprague-Dawley

围绝经期综合征过往有“更年期综合征”之称，研究发现该病的产生与中枢的神经递质紊乱关系密切［1-2］。西医治疗一般将雌激素替代疗法（hHRT）作为首选方法来延缓卵巢衰老，进而达到防治围绝经期综合征的目的［3］。但近年来关于替代疗法多种副作用的报道越来越多［4-6］，人们开始寻求安全有效的治疗方法。针灸作为传统中医疗法，在治疗围绝经期综合征方面，疗效显著，副作用小［7］，逐渐在国际上备受重视，尤其是针刺三阴交具有确切的临床疗效［8-9］。本实验选取自然围绝经期大鼠模型作为研究的对象，通过电针疗法探讨雌激素与单胺类神经递质在针刺治疗围绝经期综合征中作用规律。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级3月龄Sprague-Daw ley（SD）大鼠8只，体质量（220±20）g；清洁级11～15月龄SD大鼠32只，体质量（320±20）g。皆购于北京维通利华动物中心［SCXK（京）2012-0001］。动物置于清洁柜，实验室内温度保持（20±2）℃，湿度是65%，并且12 h光暗周期，自由摄食与饮水。

1.2 自然围绝经期大鼠模型的建立 据文献方法［10］，11～15月龄雌性SD大鼠性激素水平、子宫、等机体病理生理与妇女围绝经期相似，提示已进入围绝经期。故我们选择11～15月龄雌性SD大鼠为本实验的动物模型。本课题前期利用该模型通过阴道涂片法［11］即每日定时用碱性美蓝溶液给11～15月龄SD雌性大鼠的阴道涂片染色，并观察其在显微镜下组织学的变化，连续观察3个动情周期即15日，根据细胞形态、种类和数量来进行筛选，镜下观察大鼠阴道涂片没有成熟的脱落细胞，结果该模型符合围绝经期变化规律。

1.3 动物分组与治疗 从32只11～15月龄大鼠中筛选阴道脱落细胞涂片结果围绝经期特征符合者16只，根据随机数字表法分为：模型对照组（模型组）8只和电针治疗组（治疗组）8只。另将3月龄大鼠8只作为青年对照组（正常组），共3组。在处理后第31天的上午，统一取材，取材前12 h禁食。正常组和模型组大鼠不给予任何治疗。治疗组大鼠给予电针三阴交治疗。根据林文注主编的《实验针灸学》教材，定位三阴交位于后肢内踝尖直上10 mm。直刺3 mm，进行电针刺激，采用疏密波，频率2／100 Hz，强度以针柄轻微抖动为宜，每次留针20 min。隔日1次，共计15次。

1.4 雌二醇、5-HT、NE、DA含量测定 雌二醇酶免试剂盒：武汉华美公司。五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）的标准品均为Sigma公司产品，甲醇（色谱纯，Fisher Scientific），二正丁胺（BAS进口分装，上海化学试剂），B8离子对试剂（天津化学试剂二厂），高氯酸（HCLO4，国产分析纯），乙酸钠、柠檬酸、乙二胺四乙酸钠（国产分析纯）。

1.5 统计学处理 采用SPSS17.0的软件进行统计分析，两组以上计量资料进行单因素方差分析。

2 结果

2.1 电针三阴交对自然围绝经期大鼠卵巢中E2的含量的调节 与正常组［（162.40±49.90）pmol／L］比较，模型组卵巢E2的含量明显降低了59.17%［（66.30±21.19）pmol／L，P＜0.01］，与模型组比较，治疗组的卵巢E2含量［（109.72 ±47.39）pmol／L］显著增高了65.49%（P＜0.01），但仍未恢复至正常水平（P＜0.01）。

2.2 电针三阴交对自然围绝经期大鼠海马5-HT、NE、DA的含量及5-HT／NE的影响 与正常组比较，模型组的5-HT含量升高了34.35%，NE、DA分别下降了33.86%和34.38%（P＜0.01）。与模型组比较，治疗组大鼠5-HT含量明显降低了11.13%（P＜0.05），NE显著上调了19.18%（P＜0.05），差异有统计学意义。治疗组DA含量虽升高了7.59%，但无统计学意义（P＞0.05）。与正常组比较，模型组的5-HT／NE的比值显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，治疗组的5-HT／NE的比值显著降低了23.47%（P＜0.01），见表1。

表1 各组海马中5-HT、NE、DA的比较（s，ng／g）

表1 各组海马中5-HT、NE、DA的比较（s，ng／g）

注：与正常组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05，cP＜0.01

5-HT NE DA 5-HT／NE正常组8 451.25±51.67 134.00±19.57 75.25±23.40 3.4组别鼠数（只）3±0.63模型组8 606.25±71.50a88.63±8.73a49.38±17.82a6.86±0.68a治疗组8 538.75±30.44b105.63±13.10b53.13±10.10 5.25±0.76c

3 讨论

围绝经期综合征中医称为“绝经前后诸症”范畴，历代文献关于本病的论述散见于“脏躁”“心悸”“失眠”“眩晕”“头痛”“郁证”等病症中［12］。其病机主要为肾气虚，天癸竭，冲任脉虚，脏腑气血功能失调。三阴交是足太阴脾经经穴，又是足太阴、足厥阴、足少阴三条经脉的交会穴，具有补脾胃，助运化，化浊利湿，通经活络，调和气血，滋补肝肾之功效，且妇女的生理特点与肝脾肾三脏关系密切，因此三阴交穴在治疗妇科病症方面有着独特的优势，常作为妇科疾病的首选穴位。

围绝经期综合征的主要表现以植物神经功能紊乱为主。绝经后雌激素的水平下降，会影响脑部大脑皮层和下丘脑的神经活动，进而导致中枢神经系统的神经递质诸如NE、DA、5-HT以及阿片肽等的活性下降［13］。中枢神经递质的释放，在正常情况下，应保持在一定的水平，而且递质间的比例需相互协调以维持功能的稳定。我们发现模型组大鼠海马中NE和DA较正常组明显下降（P＜0.01），5-HT的含量异常升高，进而使5-HT／NE的比值上升，破坏了的正常生理环境，最终导致出现潮热、盗汗、抑郁、焦虑等临床症状。本实验通过电针三阴交穴可提高模型组大鼠海马中下降的NE含量，降低异常升高的5-HT水平（P＜0.05），从而使5-HT／NE的比值向正常值接近。说明电针三阴交穴可以有效纠正围绝经期大鼠中枢单胺类神经递质紊乱的作用，进而缓解围绝经期综合征的临床症状。

同时，本实验结果显示，模型组的E2水平明显低于正常组，说明自然围绝经期模型大鼠卵巢中雌激素水平明显降低，比较符合相关文献所报道的围绝经期大鼠模型的性激素水平。而作为主要由卵巢和肾上腺分泌的雌激素E2，它的缺乏是围绝经期综合征发病的重要原因。针对出现的一系列症状，雌激素治疗有效［14］。在本实验中，治疗组与模型组相比，E2水平明显高于模型组（P＜0.01），说明电针三阴交可以升高E2含量，提示针刺对雌激素指标有一定的作用。

可见，本实验针刺对大鼠神经递质及内分泌的改变均离不开神经-内分泌-免疫网络（NIM网络）的整体性调节。经前期综合征（PMS）的发生发展与NIM网络的平衡紊乱密切相关，NIM网络理论指出，神经、内分泌、免疫系统无论在结构上还是在功能上都有着密切的联系。它们之间存在着一个多维立体网络，由多种神经递质、细胞因子与激素等相互作用与调节［15］，本实验中由于雌激素也发生了有益的变化，提示可能是这些神经递质的变化改变了NIM网络的失衡状态，引起了激素的变化，进而共同作用改善了围绝经期综合征的相关症状，具体的机制尚待进一步证实。

［1］ 陈莹，李红.调体治未病预防围绝经期综合征［J］.中医药同胞，2012，11（1）：26.

［2］ Jarkova NB，Martenyi F，Masanauskaite D，et al.Mood effect of raloxifene in postmenopausal women［J］.Maturitas，2002，42（1）：71-75.

［3］ 张淞文，王军华，周红，等.北京地区围绝经期妇女激素替代疗法使用情况调查及疗效分析［J］.中国妇幼保健，2004，19（20）：45-47.

［4］ Alfred O，Ruan XY.Safety issues in hormonal therapy［J］.JCap Med Univ，2013，34（4）：483-491.

［5］ Li L，Jia J，Wang J，et al.Attributable causes of breast cancer and ovarian cancer inchina：reproductive factors，oral contraceptives and hormone replacement therapy［J］.Chin JCancer Res，2012，24（1）：9-17.

［6］ 王惠兰，徐春琳.激素补充治疗与卵巢癌［J］.中国实用妇科与产科杂志，2012，28（3）：184-186.

［7］ 赵魁平，张志梅，陈生，等.围绝经期综合征的针灸治疗概况［J］.甘肃中医，2009，22（10）：37-38.

［8］ 秦正玉，胡玲，夏晓红，等.电针三阴交对围绝经期综合征患者生殖内分泌影响的随机对照研究［J］.针刺研究，2007，32（4）：255-259.

［9］ 周军，秦正玉，李伟莉，等.电针三阴交治疗围绝经期综合征临床观察［J］.中国针灸，2006，26（9）：617-620.

［10］程化奇，熊舜华，殷新猷.大鼠更年期实验模型研究上海实验动物科学［J］.1993，13（4）：192-196.

［11］王洁，吴素慧，尚海霞.性成熟雌性SD大鼠动情周期的观察［J］.当代医学2013，19（28）：25-26

［12］靳冉，瞿建英，岳枫，等.二至百合浓缩膏对去势雌性大鼠焦虑行为学的影响［J］.中华医药科学，2013，3（12）：20-22.

［13］李贺琦.围绝经期综合征与神经递质（5-羟色胺）相关性的临床研究进展［J］.中华中医药学刊，2011，29（2）：375-377.

［14］潘美兰.围绝经期妇女激素补充治疗与性健康［J］.中国性科学，2002，11（3）：1-2.

［15］Reichlin S.Neuroendocrine-immune interactions［J］.New Engl JMed，1993，329（17）：1246.

Experimental study on regulation of estrogen and monoam ine neurotransm itters in natural climacteric ratthrough electroacupuncture at＂Sanyinjiao＂

PENGXiaotao，XU Ling，LIYou，CHENGKai（School of Acupuncture-moχibustion and Tuina，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Ob jective To investigate the effects of electroacupuncture at＂Sanyinjiao＂on estrogen and monoamine neurotransmittersof natural menopausal rats.M ethods Rats were divided into normal group，model group and electroacupuncture group randomly.Electro acupuncture group ratswere acupunctured in Sanyinjiao for 15 therapies，each therapywas given once every other day.The rats inother two groupswere fed as themodel groupbut without acupuncture.ELISA method was applied to detect the levels of ovarian estradiol（E2）and monoamine neurotransmitters in hippocampus.ResultsCompared with the normal group，the concentrationof ovarianE2 in model grouprats decreased by 59.17%（P＜0.01）.After the treatmentof theelectro-acupuncture，the level of E2 was significantly increased by 65.49%（P＜0.01）compared with themodel group，but the levelwas not restored to the normal level（P＜0.01）.The central neurotransmitterResultsshowthat compared with the normal group，the content of 5-HT in hippocampus in themodel group rats increased by 34.35%.The levels of NE，DA were decreased by 33.86%and 34.38%respectively（P＜0.01）inmodel group rats.The content of5-HT in the treatmentgroup ratswere decreased by 11.13%（P＜0.05）compared with the model grouprats.However，NE was significantly up-regulated by19.18%（P＜0.05）at the same time.DA intreatment group ratswas increased by 7.59%，but had no statistical significancewith themodel group（P＞0.05）.Compared with the normal group，the ratio of 5-HT／NE in model group ratsincreased significantly（P＜0.01）.After the treatment of the electro-acupuncture，the ratio 5-HT／NE of the treatment group decreased significantly by23.47%（P＜0.01）.Conclusion Electroacupuncture at＂Sanyinjiao＂point can regulate sex hormone levels andmonoamine neurotransmitter levels in the natural climacteric rats.

Perimenopause；Electroacupuncture；Point SP6；Serotonin；Estradiol；Rats，Sprague-Dawley

R711.51；R245.97

A

10.3969／J.issn.1672-6790.2014.05.024

2014-07-29）

彭晓涛，医师，Email：happypger＠163.com