高致病性猪蓝耳病灭活疫苗和弱毒疫苗的免疫效果试验

陈玉华

(杭州市畜牧兽医局，浙江杭州310020)

高致病性猪蓝耳病(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性传染病，以怀孕母猪流产、死胎、木乃伊胎、早产、产弱仔等繁殖障碍和仔猪呼吸困难、高死亡率为特征。该病传播速度快、发病面广，仔猪发病率可达100% ，死亡率可达40%以上，母猪流产率可达35%以上，生长猪和育肥猪病情较为缓和，但感染率和死亡率仍然很高［1-3］。

近年来，国家有关部门全面推广应用高致病性猪蓝耳病疫苗免疫，目前在学术界和养猪行业虽对PRRS 疫苗免疫问题存在较大争议，但在临床上PRRS 疫苗免疫对缓解临床症状、控制该病疫情仍不失为主要应对措施之一［4-6］。为此，笔者以不同厂家生产的商品化PRRS 弱毒苗和灭活苗、不同剂量的PRRS 弱毒苗进行免疫效果试验，以评价PRRS疫苗的安全性及免疫效果，以探讨适合杭州地区PRRS 免疫的疫苗种类、免疫程序，降低免疫反应，完善免疫技术方案，为临床防控高致病性猪蓝耳病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 疫苗 选择杭州某兽用生物制品有限公司生产的高致病性猪蓝耳病疫苗灭活苗NVDC-JXA1 株及北京某实业股份有限公司生产的高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗JXA1-R 株、哈尔滨某生物技术开发公司生产的高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗CH-1R 株、上海某生物制品有限公司生产的高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(HuN4-F112 株)进行免疫效果试验。

1.2 试剂 蓝耳病抗体监测试剂盒购自美国爱德士(IDEXX)公司，生产批号为40959-V931，盒内包括已包被好重组PRRS 抗原包被板，标准阴性、阳性对照血清，HRPO 标记抗猪IgG 抗体，样品稀释液，TMB 底物溶液，终止液、10x 浓缩洗液等。

1.3 试验分组

1.3.1 高致病性猪蓝耳病灭活苗和弱毒苗免疫效果比较 选用高致病性猪蓝耳病疫苗灭活苗NVDC-JXA1 株、高致病性猪蓝耳病弱毒苗JXA1-R株进行分组免疫试验，免疫程序按疫苗说明书进行，灭活苗NVDC-JXA1 株于25日龄时首免，55日龄二免，弱毒疫苗CH-1R 株为对照样品，免疫剂量均为1头份。

1.3.2 不同厂家高致病性猪蓝耳弱毒疫苗免疫效果比较 选用不同厂家生产的高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗JXA1-R 株(组1，组2，组3)进行免疫试验，于仔猪25日龄进行免疫接种，剂量为1 头份。

1.3.3 同一厂家高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗不同免疫剂量免疫效果比较 选用同一厂家生产的高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗JXA1-R 株进行分组试验，组1 剂量为1 头份，组2 为2 头份，于仔猪25日龄时进行免疫接种。

1.4 血清样品 上述各试验组分别于免疫前、免疫后20 d、60 d、90 d 采集血样，分离血清，分别编号，置－20℃冰箱中保存，抗体检测备用。

1.5 PRRS 抗体检测 将待检样品(血清)进行40倍稀释，取100 μL 稀释好样品(血清)分别加入酶标板反应孔，各加阴阳性对照血清100 μL 两孔，室温培养30 min。用洗涤液洗涤3～5 次，甩尽孔内液体，并在滤纸上拍干。每孔加入HRPO 标记抗猪IgG 抗体100 μL，室温作用30 min，用洗涤液洗涤3～5 次，甩尽孔内液体，并在滤纸上拍干。每孔加入100 μL 底物(TMP)溶液，室温作用15 min，然后每孔加入100 μL 终止液，混匀，于BIO-RAD680 型酶标仪上650 nm 处读数，利用XCHEK 软件系统处理数据。

2 结果与分析

2.1 高致病性猪蓝耳病灭活苗和弱毒苗免疫效果比较 详见表1，表2。

表2 乙猪场PRRS 弱毒苗和灭活苗免疫效果比较

由表1、表2可见，高致病性猪蓝耳病灭活疫苗免疫后20 d 和60 d，甲猪场和乙猪场的PRRS 抗体均为阴性，免疫后90 d，PRRS 抗体水平开始转阳，甲猪场有7 头猪PRRS 抗体检测为阳性，S/P 均值为1.78，乙猪场试验猪的免疫抗体检测均为阳性，S/P 均值为2.025。

采用高致病猪蓝耳病弱毒疫苗免疫后，甲、乙两猪场在免疫后20 d 猪群PRRS 抗体检测均为阳性，甲猪场S/P 均值为2.0 以上，且持续到免疫后60 d以上，免疫后90 d S/P 均值有所下降;乙猪场S/P均值在1.1 以上，抗体水平均一性较好。

2.2 不同厂家生产的高致病性猪蓝耳病弱毒苗免疫效果比较 详见表3。

表3 不同厂家生产的PRRS 弱毒苗免疫效果比较

由表3可见，采用不同厂家生产的高致病性蓝耳病弱毒疫苗进行分组免疫后20 d PRRS 抗体水平检测均转阳，免疫后90 d 抗体水平仍保持较高水平，免疫60 d 组1 S/P 均值明显高于组2 和组3 水平，其中组2 免疫后20 d 猪群全部转阳，S/P 均值均在1.1 以上，经方差分析(P ＞0.5)，3 组组间差异不显著。

2.3 同种疫苗不同免疫剂量的免疫效果比较 详见表4。

表4 同种疫苗不同免疫剂量的免疫效果比较

由表4可见，采用不同剂量的PRRS 疫苗进行免疫，免疫后20 d 抗体水平均转阳，且S/P 均值均大于1，至免疫后90 d 以上，其中组2 抗体水平明显高于组1，标准差小，离散度均衡，t 检验，二者差异极显著(P ＜0.01)。

3 小结与讨论

本试验表明，PRRS 弱毒疫苗的免疫效果明显优于灭活苗;不同厂家生产的弱毒疫苗，在使用相同免疫剂量的情况下，总体比较理想，且免疫安全性较好。经不同剂量的PRRS 弱毒疫苗免疫效果比较，2头份免疫剂量效果较1 头份免疫剂量好，且抗体水平较均衡，离散度较小。与曹斌等(2010)［7］、母安雄等(2008)［8］对PRRS 进行进口弱毒疫苗、国产弱毒疫苗、普通灭活疫苗、灭活疫苗的免疫效果试验比较，认为国产弱毒疫苗与进口弱毒疫苗均优于灭活疫苗，可产生较高的抗体水平。目前市场上提供的PRRS 抗体检测试剂盒虽对检测不同PRRS 毒株的敏感性较高，但只能评估猪只是否感染PRRSV，无法区分是自然感染或人工免疫疫苗。因此在临床实践中，还需结合临床观察，包括发病死亡情况，特别是母猪繁殖障碍和早产、流产情况来确定PRRS 场内控制情况。

PRRSV 属披膜病毒科动脉炎病毒属的RNA 病毒，新生仔猪肺泡巨噬细胞是PRRSV 最易感部位，通过感染组织巨噬细胞和单核细胞及局部淋巴组织向全身扩散，严重降低机体免疫机能，诱发各种形式(如细菌病或病毒病)的继发感染，导致临症的复杂化［9］。从我国目前PRRS 流行情况看，适宜的高致病性猪蓝耳病疫苗免疫，在预防该病发生和减轻临床症状上具有一定作用，若坚持长期、科学、规范的免疫和抗体监测，发生PRRS 疾病的几率将大幅下降。因此，定期对PRRS 病毒感染情况进行监测和免疫接种仍是控制该病流行的主要措施［10－11］。2007年开始农业部把PRRS 纳入国家强制免疫疫病范畴，同时逐步加大了对PRRS 疫病监测和流行调查。目前，杭州市对所有猪场实施高致病性猪蓝耳病疫苗强制免疫，效果明显。

基于PRRS 弱毒疫苗较灭活苗具有免疫效果好、免疫期长等优点，且目前杭州地区尚难找出PRRS 阴性场，选择PRRS 弱毒苗进行免疫注射是可取的，同时有针对性的开展高致病性猪蓝耳病的流行病学调查和疫苗免疫效果评价，寻找切合自身场户的科学免疫程序及实施综合防控措施才是预防和控制该病的重要手段。

［1］严玉霖，高洪.猪繁殖与呼吸综合征诊断技术研究进展［J］.动物医学进展，2008，29(7):81－85.

［2］文利新，丁小波，罗维.猪高致病性蓝耳病的发病特点及其防治技术［J］.湖南农业科学，2008(4):153－154.

［3］王斌，张智鹏，范陆.高致病性猪蓝耳病的综合防制［J］.中国畜牧兽医，2008(11):137－140.

［4］郭宝清，陈章水，刘文兴，等.从疑似PRRS 流产胎儿分离PRRSV 的研究［J］.中国畜禽传染病，1996(2):1－4.

［5］王君玮，徐天刚，吴延功，等.山东部分地区猪繁殖与呼吸综合征的流行病学调查［J］.畜牧与兽医，2004(4):32.

［6］鲁杏华.猪繁殖呼吸综合征血清学调查［J］.中国动物检疫，2000(8):41.

［7］曹斌，王海燕，周广生，等.不同类型猪蓝耳病疫苗的体液免疫效果比较［J］.中国动物检疫，2010(8):51－52.

［8］母安雄，杨宗照，严惠群，等.仔猪PRRS 母源抗体消长规律及疫苗免疫效果观察［J］.浙江农业科学，2008(1):110－112.

［9］吴东来，郭宝清，李桂芝，等.猪生殖呼吸道综合症病毒抗原在死胎及新生仔猪体内的分布［J］.中国预防兽医学报，1999，2 (21):128－129.

［10］池海蓬，于闯，赵崇，等.高致病性猪蓝耳病现场诊断及预防措施［J］.现代畜牧兽医，2009(8):15.

［11］纪海旺，王亚超.高致病性猪蓝耳病特点及其防控措施［J］.当代畜牧，2007(9):17－18.