阻断式PRRSV免疫抑制试验

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(浙江省缙云县动物疫病预防控制中心，浙江 缙云 321400)

近年来，我国各地对猪瘟和猪蓝耳病的预防和扑灭做了大量工作，曾经的“高热发红急性致死”的“高热病”已不复存在，但以免疫抑制为主要危害的PRRSV隐性持续性感染却依然严重。表面“平静”的临床现象，往往容易混淆人们的视线，从而忽视了猪蓝耳免疫的重要性。猪瘟是国家强制免疫的传染病，众所周知，猪瘟的免疫效果与PRRSV的自然感染及它的免疫效果密切相关。为能比较深入地揭示PRRSV对猪瘟免疫抑制危害的严重性及蓝耳防疫的重要性，故特做本试验。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1免疫疫苗 猪蓝耳疫苗：杭州佑本批号：20170605；猪瘟疫苗：杭州佑本批号：20170527。

1.1.2实验用猪 随机选取缙云某猪场30日龄仔猪40头(体态正常，无可见临床症状)。

1.1.3猪瘟诊断试剂 猪瘟间接血凝抗体检测试剂盒，中国农业科学兰州兽医研究所批号：20180615202。

1.1.4抗PRRSV-IG和琼扩抗原的制备 用猪蓝耳弱毒活疫苗(NVDC-JXA1株)首免100日龄育成猪，肌注2头份。免后2周再以猪蓝耳灭活疫苗(NVDC-JXA1株)加强免疫2次，间隔21 d，第1次剂量2 mL/头，第2次剂量4 mL/头，末次免疫后21 d ，经采血分离血清-盐析沉淀-脱盐浓缩而成。将提取的蛋白溶液稀释后用UV-170紫外分光光度计测定，记录λ=280 nm和λ=260 nm的光密度，按Lowry-Kalokar公式计算蛋白浓度，蛋白浓度(mg/mL)=1.45×1.116-0.74×1.041得0.84786乘以稀释倍数134为113.6 mg/mL。

1.1.5山羊免疫球蛋白的制备 以猪抗PRRSV-IG免疫健山羊，采血分离血清-盐析沉淀-脱盐浓缩而成。用琼扩法检验：中间孔为猪抗PRRSV-IG抗原，周边孔为倍比稀释的山羊免疫球蛋白，结果见图1所示。

图1 山羊抗猪PRRSV球蛋白琼扩图

1.2试验方法

1.2.1试验设计 分A、B、C、D 4个试验组，每组10头，A组为蓝耳疫苗+山羊免疫球蛋白1次，B组为组为蓝耳疫苗+山羊免疫球蛋白2次，C组仅免猪瘟疫苗，D组为只用蓝耳苗。

1.2.2免疫方法 A、B两组30日龄首免蓝耳和山羊免疫球蛋白，D组只免蓝耳疫苗，剂量为2 mL/头。首免后2 d，四组各免疫猪瘟苗2 mL/头。首免后21 d，B组和D组与首次相同剂量加强免疫1次。二次免疫3周后，经腔静脉采血分离血清，用正向间接血凝法检测猪瘟免疫抗体。

2 试验结果

2.1山羊免疫球蛋白对蓝耳疫苗免疫抑制影响

试验A组使用一次免疫抑制剂后，猪瘟免疫效价下降为3，B组使用免疫抑制剂二次后即可下降至2以下(见表1)。

表1 山羊免疫球蛋白对蓝耳疫苗免疫抑制的猪瘟抗体效价

2.2免疫蓝耳疫苗对猪瘟抗体效价的影响

未经蓝耳免疫的C组，因受PRRSV的免疫抑制作用其平均猪瘟效价为1.8，经蓝耳疫苗免疫的D组因PRRSV受到了控制，其平均猪瘟效价达到8(见表2)。

表2 蓝耳免疫对猪瘟抗体效价的影响

以PRRSV自然感染猪的猪瘟免疫抗体水平为参照，以山羊免疫球蛋白为猪蓝耳疫苗的免疫抑制剂，能有效地阻断猪蓝耳疫苗的防疫作用，从而明晰出PRRSV对猪瘟疫苗的免疫抑制作用，进一步揭示了猪PRRSV对猪瘟免疫抑制危害的严重性(图2)。

图2 各处理组别猪瘟抗体效价

3 小结与讨论

3.1山羊球蛋白为免疫抑制剂能有效地阻断猪蓝耳疫苗的防疫作用，使B组的猪瘟抗体水平与C组的水平相当，从而进一步证实PRRSV对猪瘟免疫抑制的重要作用及严重性。

3.2试验提示：PRRSV是影响猪瘟免疫的一个重要因素，猪瘟的免疫抗体水平高低与猪蓝耳的防疫与否存在密切相关性，因此做好蓝耳的免疫是预防猪瘟的重要手段之一。

3.3在PRRSV隐性感染被彻底清除之前，评判猪瘟免疫抗体效价一定要与蓝耳病毒的感染程度结合起来，这对于指导猪瘟的防疫实践十分重要。