HBV感染者病毒基因型分布特点及其与干扰素疗效的关系

江杰，黄新颜，王利红，李丽，孙文锦

HBV感染者病毒基因型分布特点及其与干扰素疗效的关系

江杰，黄新颜，王利红，李丽，孙文锦

目的研究HBV感染者病毒基因型分布特点及其与干扰素疗效之间的关系。方法选取急性乙型肝炎（Acute hepatitis B ）8例，慢性乙型肝炎（CHB）120例，乙型肝炎肝硬化60例，肝细胞癌患者32例。提取血清HBV DNA，PCR扩增S区序列，对产物直接测序并上传至斯坦福大学HBV数据库，进行基因型分析；选取78例CHB患者（B基因型38例，C基因型40例），经干扰素-α治疗48周，分析干扰素治疗不同基因型病毒感染者的疗效。结果HBV A、B、C、D基因型感染者分别为7.7%、35.9%、51.4%和5.0%，肝硬化和肝细胞癌患者B和C基因型感染者分别为95%和93.7%，显著高于A和D基因型感染的5%和6.3%（x2=11.364，P＜0.01）；在干扰素治疗48周后，B基因型感染者HBV DNA转阴率为60.5%，显著高于C基因型感染者的32.5%（x2=6.014，P＜0.05）；B基因型感染者HBeAg/HBeAb血清转换率为65.8%，显著高于C基因型感染者的27.5%（x2=10.564，P＜0.01）；B基因型感染者血清谷丙转氨酶复常率为97.6%，显著高于C基因型感染者的67.5%（x2=5.387，P＜0.05）。结论HBV基因型以B和C基因型为主，C基因型感染预示着不良的疾病预后和较差的干扰素治疗疗效。

慢性乙型肝炎；HBV 基因型；干扰素-α；疗效

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是导致人类急性和慢性肝脏疾病的重要病原体。全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染者，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝癌（Primary liver cancer，PLC）[1]。CHB可向肝硬化发展，抗病毒治疗已成为治疗CHB的共识[2]。目前，根据HBV全基因核苷酸序列异源性＞8%或者S基因区核苷酸序列异源性＞4%，将不同病毒株分为8个基因型[3]。近两年又发现了新的I基因型[4]。大量研究表明，HBV 基因型、基因亚型分布具有明显的地域性，不同的基因型和基因亚型具有其独特的流行病学特点和分子生物学特征，与乙型肝炎病毒复制、致病性、宿主免疫应答及临床表现、治疗与预后等都有一定的相关性[5]。本研究利用PCR产物直接测序法对CHB患者HBV基因型分布及其与干扰素治疗效果的关系进行了分析，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象选择2008年1月至2012年10月在我科门诊和住院的HBV感染者220例，男140例，女80例；平均年龄（52.1±15.8）岁。根据2010年中华医学会修订的《慢性乙型肝炎防治指南》标准[6，7]，其中诊断为急性乙型肝炎（A-cute hepatitis B）8例，男5例，女3例；平均年龄（31.6±11.4）岁。诊断为CHB 120例，男76例，女44例；平均年龄（47.4± 13.6）岁。诊断为肝硬化60例，男39例，女21例；平均年龄（55.2±17.8）岁。诊断为肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）32例，男20例，女12例；平均年龄（56.7±18.4）岁。

1.2 治疗方法本研究对78例CHB患者给予重组人干扰素α-1b（运德素，北京三元基因工程有限公司）治疗，50 μg皮下注射，隔日1次，疗程48周。

1.3 临床检测采用ELISA法检测HBeAg/抗-HBe（英可创新厦门科技有限公司）；采用PCR法检测HBV DNA（上海科华生物工程股份有限公司，检测灵敏度为100IU/ml）。

1.4 血清HBV DNA分型检测Taq酶（大连宝生物生物技术有限公司）；提取血清病毒DNA（德国Qiagen公司），PCR引物（上海生工生物技术公司合成）。按照文献报道设计[8]——外侧引物：5’-CCTCCTGCTGGTGGCTCCAGTTC-3’（nt22-77）；5’-GGCGGCAAACCCCAAAAGACCC-3’（nt1004-1025）。内侧引物:5’-CTAGGACCCCTGCTCGTGTTACA-3’（nt181-203）；5’-ATTACATATCCCATGAAGTTAAG-3’（nt870-892）。扩增条件:94℃5 min，94℃30 s，55℃30 s，72℃60 s，共35个循环，72℃5 min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，由北京博迈德生物技术有限公司进行测序。测序结果经BioEdit软件进行序列长度编辑及格式转换后，上传至斯坦福大学HBV数据库（http://hivdb.stanford.edu/HBV/HBVseq），进行序列比对和基因型分析。

1.5 统计学分析计数资料采用卡方检验，使用SPSS 17.0软件包，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV基因型的分布情况在220例HBV感染者中，检测出A型、B型、C型和D型分别为17例（7.7%）、79例（35.9%）、113例（51.4%）和11例（5%），即B、C基因型共192例（87.3%），显著高于A、D基因型28例（12.7%）（x2=16.365，P＜0.01）；HBV基因型在不同疾病状态的感染者中分布有显著性差异（x2=7.414，P＜0.05或P＜0.01），其中B、C基因型在肝硬化和HCC中分别为57例（95%）及30例（93.7%），显著高于A、D基因型的3例（5%）及2例（6.3%）（x2=11.364，P＜0.01，表1）。

表1 不同HBV感染者HBV基因型(%）的分布

2.2 不同HBV基因型感染的CHB患者对干扰素治疗的疗效比较在78例接受干扰素治疗的CHB患者中，B基因型感染者38例，C基因型感染者40例。在干扰素治疗48周后，B基因型感染者HBV DNA转阴率为60.5%，显著高于C基因型感染者的32.5%（x2=6.014，P＜0.05）；B基因型感染者HBeAg/HBeAb血清转换率为65.8%，显著高于C基因型感染者的27.5%（x2=10.564，P＜0.01）；B基因型感染者ALT复常率为97.6%，显著高于C基因型感染者的67.5%（x2=5.387，P＜0.05），说明干扰素治疗后，B基因型感染者疗效显著好于C基因型感染者。

3 讨论

HBV存在多种不同的基因型，而这些基因型与病毒变异和慢性肝病患者的病情严重程度有着十分紧密的关系[9]。HBV基因型的分布有高度的地区分布[10]。国内学者报道流行于我国的HBV 基因型主要为B 型和C 型，占总感染人群的95%以上，北方地区以C 基因型为主，南方地区以B 基因型较为常见[11]。C基因型与较重的病变有关，发生肝炎肝硬化、肝细胞癌较为多见[12]。本研究发现，我国常见的A、B、C、D四个HBV基因型在本地区均有感染，B和C基因型占总感染人群的绝大部分，C基因型在急性肝炎、慢性肝炎、肝炎肝硬化和肝细胞癌患者中的比例分别为37.5%、47.5%，、53.3%和65.6%，与国内的报道基本一致。

核苷类似物和α-干扰素等抗病毒药物已广泛应用于慢性乙型肝炎的治疗，并有一定的疗效[13]。IFN-α是目前国内外公认的治疗病毒性肝炎的首选药物之一[14,15]，因此本研究选取78例CHB患者，经IFN-α抗病毒治疗48周，评价B和C基因型感染者对干扰素疗效的差异。结果发现，B基因型感染者无论是HBV DNA转阴率、HBeAg/抗-HBe血清转换，还是血清ALT复常率，均显著优于C基因型感染者。

通过本研究发现，HBV感染仍以B和C基因型为主，而C基因型与不良的预后和较差的治疗疗效有关。因此，对于该类患者必须严密随访，合理地制定个体化治疗方案，以延缓和减少肝硬化及肝癌的发生。

致谢本文承蒙首都医科大学附属北京佑安医院柳雅立博士审阅和写作指导，特此致谢。

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（收稿：2013-12-27）（校对：陈宗炳）

Hepatitis B virus genotypes and its correlation to interferon-α therapy in patients with hepatitis B

Jiang Jie，Huang Xinyan，Wang Lihong，et al.Department of Infectious Diseases，Central hospital，Ezhou 436099，Hubei Province

Hepatitis B；Hepatitis B viral genotypes；Interferon-α；Therapy

10.3969/j.issn.1672-5069.2014.03.021

436099 湖北省鄂州市中心医院感染病科

江杰，男，43岁，医学学士，副主任医师。从事病毒性肝炎的临床诊治工作。E-mail:ezzxyy@vip.163.com

黄新颜，E-mail:67284839@qq.com