马齿苋乙醇提取物对3种植物油的抗氧化活性比较

陈 凌 张俐勤 张建群 陶 昆 贺伟强 张正红 沙 琳

(嘉兴职业技术学院生物与环境分院1，嘉兴 314036)

(嘉兴市嘉源给排水有限公司2，嘉兴 314000)

马齿苋(Portulaca oleracea L.)为马齿苋科一年生草本植物，又名蚂蚁菜，长寿菜等，它在我国分布很广，资源丰富。近年的药理研究表明:马齿苋具有抗菌、降血脂、抗衰老、松弛肌肉、抗炎、镇痛以及促进伤口愈合等功效［1－8］。马齿苋既可入药，又可食用，是我国卫生部划定的78种药食同源的野生植物之一。国外许多学者研究了马齿苋的抗氧化作用［9－12］，国内也有不少学者对马齿苋提取物的研究表明它具有抗氧化活性。按照中医“药食同源”的原则，从膳食中摄取抗氧化剂，是预防疾病的最佳途径，而通过食用油脂补充抗氧化剂就是一条理想途径。因此选取合适的富含抗氧化剂的提取物添加到食用油脂中，不仅可以满足商品食用油对抗氧化剂的需要，而且可以使食用油脂具有保健功能。本研究以野生马齿苋为原料，用乙醇溶液浸提马齿苋黄酮类化合物，并进行油脂抗氧化性试验，以油脂的过氧化物值为指标评价其抗氧化活性，以期为马齿苋黄酮及其功能性食品的开发提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

野生马齿苋，核桃油、花生油、芝麻油新鲜压榨。95%酒精、葡萄糖、浓硫酸、苯酚、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、碳酸氢钠均为国产分析纯:上海联试化工试剂有限公司;维生素E(天然型):浙江医药股份有限公司新昌制药厂;芦丁:国药集团化学试剂有限公司。

JP－500B－2型多功能粉碎机:上海市久品工贸有限公司;RE－52C型旋转蒸发仪:巩义市英峪高科仪器厂;DK－S24型恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司;KQ－100B超声波清洗器:昆山市超声仪器公司;722分光光度计:上海海争电子科技有限公司;赛多利斯电子天平:上海精密科学仪器有限公司;202－2A数显电热恒温干燥箱:杭州蓝天化验仪器厂;FD－4冷冻干燥机:北京博医康实验仪器有限公司;D－Q－3超纯水仪，Smartpark DQ3纯水柱:苏州赛恩斯仪器有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 超声波辅助乙醇浸提马齿苋活性成分

野生马齿苋，采于嘉兴职业技术学院校园内。将新鲜马齿苋全草洗净，晾至表面无水分，于80℃恒温干燥，取出后粉碎，石油醚脱脂，35℃烘干至恒重备用。在料液比1∶30，提取温度为60℃，乙醇浓度为70%，超声30 min后，浸提2次，4 h/次，合并滤液。经抽滤，得马齿苋乙醇提液。将乙醇提取液入旋转蒸发仪浓缩至黏稠膏状，冷冻干燥，得马齿苋乙醇提取物固体，以供分析测试用。

1.2.2 马齿苋总黄酮的测定

1.2.2.1 芦丁标准曲线的绘制

用NaNO2－A1(NO3)3－NaOH法测定总黄酮:精密称取芦丁对照品200 mg，用70%乙醇溶解，定容于100 mL容量瓶中，摇匀。精密吸取10 mL，置于100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容，得到0.2 g/L的标准溶液。

用移液管准确吸取 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL的芦丁标准液分别置于10 mL的比色管中，加入水1 mL，加入5%亚硝酸钠0.4 mL，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝0.4 mL，摇匀，放置6 min，加入4.3%氢氧化钠4.0 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以试剂空白为参比，用分光光度计在500 nm波长处测定吸光度，用最小二乘法做线性回归，求得芦丁浓度(c)与吸光度(A)的关系曲线。

1.2.2.2 黄酮含量的测定

配制一定浓度的马齿苋乙醇提取物溶液，吸取1.00 mL并置于10 mL比色管中。按芦丁标准曲线的绘制方法测定吸光度，代入回归方程，计算即得。

总黄酮含量=(提取物中总黄酮质量/干提取物质量)×100%

1.2.3 抗氧化性能试验

称30 g油脂7份置于锥形瓶中，1份为空白对照组，5 份分别按油重的 0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%添加马齿苋乙醇提取物固体粉末，另1份按油重的0.02%添加维生素E为对比组。混合均匀，置于(50±0.5)℃的恒温烘箱中，每隔24 h搅拌1次，定时取样检测花生油、核桃油和芝麻油的过氧化物值(POV)。

1.2.4 抗氧化活性的测定

按照GB/T 5009.37—2003规定的比色法定期测定过氧化值(POV)，并以此来衡量油脂的氧化程度，评价马齿苋黄酮的抗氧化活性。

2 结果与讨论

2.1 马齿苋醇提物中总黄酮含量的测定

按2.2的方法及步骤测定马齿苋醇提物中总黄酮类物质的含量，以芦丁为标准物测得醇提物的吸光度 A=0.166，根据线性回归方程:A=0.792 2c+0.072 6，R2=0.999 1，计算出醇提取物中马齿苋黄酮类的质量分数为53.67%。

2.2 马齿苋醇提物对花生油的抗氧化性能

油脂过氧化值(POV)是判断油脂及其制品酸败程度的主要指标，对其测定已成为国家食品卫生检验强制规定的项目［13］。马齿苋乙醇提取物(EE)不同添加浓度对花生油的抗氧化效果见图1。

图1 不同浓度马齿苋醇提物对花生油的抗氧化性

由图1可知，空白花生油样在测定期内自动氧化速度很快，添加马齿苋醇提物和维生素E后，油样氧化速度变慢，尤其是0.03%马齿苋醇提物对花生油具有非常好的抗氧化作用，在50℃恒温9 d后POV值为0.463 mmol/kg，是空白对照组的21.4%。0.04%和0.05%的马齿苋醇提物所表现出的抗氧化活性较VE好，0.01%和0.02%的与VE相当(添加VE的POV值为0.812 mmol/kg)。

油脂的自动氧化是链式反应，天然维生素E抗氧化作用机制有2种类型:一种是通过释放活泼氢与ROO·或者RO·自由基结合，从而抑制脂质过氧化的自由基链式反应;另一种是通过生育酚自由基氧杂萘满环上O—C键断裂，结合·OH，直接清除自由基［14－15］。而多数情况下，维生素E的抗氧化作用是与脂氧自由基或脂过氧自由基反应，向它提供H，使脂质过氧化链式反应中断，从而实现抗氧化效果。

2.3 马齿苋醇提物对核桃油的抗氧化性能

不同添加浓度的马齿苋乙醇提取物对核桃油的抗氧化效果如图2所示，添加0.01%的氧化速度最慢，在50℃恒温9 d后POV值为1.05 mmol/kg，是空白对照组的18.5%。添加0.02%马齿苋醇提物对核桃油的抗氧化效果和维生素E相当，而0.04%的抗氧化作用比VE差的多。空白核桃油样自动氧化速度很快，9 d后其POV值为5.65mmol/kg，而添加VE核桃油的POV值则为1.12 mmol/kg。

图2 不同浓度马齿苋醇提物对核桃油的抗氧化性

马齿苋醇提物对核桃油的抗氧化效果比在花生油中的抗氧化效果要差，这主要有2个原因:一是马齿苋醇提物在核桃油中的溶出度比花生油中的小(核桃油中醇提物添加量为0.01%时抗氧化效果最好，而花生油是0.03%);二是核桃油中脂肪酸组成主要是亚油酸、油酸和亚麻酸等不饱和脂肪酸质量分数高达为87%［13］，不饱脂肪酸含量越高越容易被氧化。

2.4 马齿苋醇提物对芝麻油的抗氧化性能

由图 3 看出，添加 0.01%、0.02%、0.03%、0.04%和0.05%的马齿苋醇提物在测定期内对芝麻油的抗氧化性都强于VE，氧化速度都远远小于空白芝麻油样。添加0.02%的马齿苋醇提物的芝麻油在50℃恒温9 d后POV值为0.613 mmol/kg，是空白对照组的47.9%，而此时添加VE的芝麻油POV值为0.856 mmol/kg。

图3 不同浓度马齿苋醇提物对芝麻油的抗氧化性

马齿苋醇提物对芝麻油的抗氧化活性处于花生油和核桃油之间，原因是:芝麻油的不饱和脂肪酸的含量比核桃油少，与花生油相当;马齿苋醇提物在芝麻油中的溶出度比核桃油大，而比花生油小(同样从这3种油中马齿苋醇提物的最佳添加量可以看出)。相同的结果同样在添加维生素E的这3种油中得到了验证。

黄酮类化合物对油脂的抗氧化机理与维生素E相似，黄酮(AH)将氢供给脂肪自由基(ROO·、RO·)，自身转变为酚基自由基，酚基自由基的稳定性降低了自动氧化连锁反应的传递速度，从而抑制油脂的进一步氧化［16］。其机理如下:

AH+ROO·→ROOH+A·

AH+RO·→ROH+A·

酚类自由基A·没有活性，它不能引起链式反应，却能参与一些终止反应。如:

A·+A·→AA

A·+ROO·→ROOA

简而言之，黄酮类化合物是作为自由基吸收剂而起到抗氧化作用。

3 结论

马齿苋醇提物对花生油、核桃油和芝麻油有显著的抗氧化作用，马齿苋醇提物在花生油中添加量为0.03%、核桃油中为 0.01%、芝麻油中为 0.02%时其抗氧化活性最大，在此最佳添加量下其抗氧化活性强于维生素E。马齿苋醇提物在不同油脂中的抗氧化活性是不同的，与维生素E在不同油脂中的抗氧化活性一致。这主要与油脂的不饱和脂肪酸、维生素及微量元素的含量有关，不饱和脂肪酸含量高，马齿苋醇提物对其的抗氧化活性低;另外还与马齿苋醇提物在油脂中的溶出度有关，溶出度越高其抗氧化活性就越大。马齿苋醇提物为天然的抗氧化剂，其安全性好，是一种非常有开发价值的天然抗氧化剂。

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