虎耳草颗粒的质量控制方法

郑 岩 王红霞 陈随清*

（河南中医学院，河南 郑州 450008）

虎耳草颗粒的质量控制方法

郑 岩 王红霞 陈随清*

（河南中医学院，河南 郑州 450008）

目的建立虎耳草颗粒的质量控制方法。方法色谱柱为hypersil ODS(250 mm×4.0 mm、5 μm)，流动相为甲醇-水（20∶80），流速为1.0 mL/min，检测波长275 nm，柱温30 ℃。结果岩白菜素的进样量在0.0202～0.202 μg之间与峰面积呈良好线性关系（R2=0.9998），平均回收率为100.33%，RSD=1.92%。结论本方法灵敏、准确、重现性好，可用于虎耳草颗粒的质量控制。

虎耳草颗粒；HPLC；质量控制；岩白菜素

虎耳草，为虎耳草科虎耳草属植物虎耳草（Saxifraga stolonifera Curt.）的干燥全草，微苦、辛、寒、有小毒，能祛风清热，凉血解毒，用于治疗风热咳嗽、风疹、湿疹、急性中耳炎等[1]。收载于《贵州省中药材、民族药质量标准》2003年版，是常用的民族药[2]。为贵州省著名制剂“咳速停胶囊”、“胆炎康胶囊”和“咳平胶囊”等的主要原料药[3]。药理实验表明虎耳草有抗炎、抑菌、镇咳等作用[4]。虎耳草中所含化学成分主要有岩白菜素、槲皮素、槲皮苷、丹皮酚、没食子酸等[5]。其中，岩白菜素具有镇咳祛痰作用，临床已应用于治疗慢性支气管炎[6]。虎耳草颗粒为河南中医学院三附院自制制剂，用于治疗咳嗽痰多。为保证虎耳草颗粒的质量及疗效，本文以岩白菜素含量为指标，建立虎耳草颗粒的质量控制方法，为虎耳草颗粒进一步的药理、药代动力学及临床疗效研究提供科学依据。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器

高效液相色谱仪（LC-20AT，Shimadzu），紫外检测器（SPD-20A，Shimadzu），色谱工作站（CBM-102，Shimadzu）；循环水式多用真空泵（SHZ-95B，巩义市予华仪器有限责任公司）；分析天平（BS2242S，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；十万分之一天平（梅特勒，Mettler Toledo AB 135-S）；数控超声波清洗器（KQ-500DV，昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂

甲醇（为色谱纯，天津四友精细化学品有限公司，20110909）；提取用甲醇为分析纯（北京化工厂，20110518）；水为娃哈哈纯净水。

1.3 对照品

岩白菜素为中国生物制品检定所提供，批号（742-2000111），经HPLC检测，含量＞99%。

1.4 样品

所用虎耳草颗粒样品为河南中医学院三附院自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：phenomenex hydro ODS C18（250 mm×4.6 mm，4 μm）色谱柱，流动相：甲醇-水(20∶80)，流速：1.0 mL/min，检测波长：275 nm，柱温：30 ℃。

2.2 对照品溶液制备

精密称取岩白菜素对照品，置于容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，得浓度为0.0101 mg/mL的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

精密量取1 g虎耳草颗粒，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，浸泡30 min，超声提取45 min，放置至室温，补足重量，摇匀，用减压真空泵抽滤，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品，备用。

图1 岩白菜素标准品HPLC图

图2 供试品溶液HPLC图

图3 阴性对照溶液HPLC图

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方比例配成不含虎耳草的阴性对照样品，按2.3项下供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液，分别精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液各10 µL，按2.1项下色谱条件进样测定，结果表明，阴性对照溶液色谱图中与对照品相同保留时间处无吸收峰干扰。对照品、供试品及阴性对照对照溶液色谱图见图1～3。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系的考察

取浓度为0.0101 mg/mL的岩白菜素对照品溶液，分别进样2、4、6、10、14、20 μL，按2.1项下色谱条件测定。以岩白菜素的峰面积（×10E5）为纵坐标，进样量（μg）为横坐标进行线性回归，回归方程为：y=14.72x+0.0106，R2=0.9998，表明岩白菜素的进样量在0.0202～0.202 μg之间与峰面积线性关系良好。

2.5.2 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24、48 h进样测定岩白菜素峰面积，计算RSD=1.67%。结果表明，供试液在本实验条件下48 h内较为稳定，试验结果见表1。

表1 虎耳草颗粒稳定性试验结果

2.5.3 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液，重复进样5次，分别测定岩白菜素峰面积，计算RSD=0.68%，表明本方法精密度良好。试验结果见表2。

表2 虎耳草颗粒精密度实验结果

2.5.4 重现性试验

按供试品溶液制备方法平行制备5份供试品溶液，分别测定岩白菜素平均峰面积，计算RSD=1.78%，表明本方法重现性良好。试验结果见表3。

表3 虎耳草颗粒重现性实验结果

2.5.5 加样回收率试验

取六份已知岩白菜素含量的虎耳草颗粒各0.5 g，精密称定后，分别精密加入每1 mL含岩白菜素3.857 mg的标准品溶液0.5 mL，其余按照2.3项下供试品溶液的制备方法制备，进样测定，计算回收率，平均回收率100.33%，RSD=1.92%，表明本方法回收率较好。结果见表4。

表4 虎耳草颗粒中岩白菜素加样回收率实验结果

2.6 样品含量测定

按上述方法，制备供试品溶液，测定3批虎耳草灌注剂中岩白菜素的含量，结果见表5。

表5 虎耳草颗粒含量测定结果

3 讨 论

测定结果表明，本实验建立的HPLC法测定虎耳草颗粒中岩白菜素的含量方法，快速、灵敏、准确、重现性好，可有效控制虎耳草颗粒质量，保证其临床疗效，并为今后虎耳草的药理、药代动力学及临床疗效研究提供科学依据。

[1] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:科学技术出版社,1997:1335.

[2] 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药质量标准[M].贵阳:贵州科技出版社,2003:235.

[3] 徐昌艳,张丽艳,李燕,等.黔产苗药虎耳草的HPLC指纹图谱研究[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(15):73-76.

[4] 李亨东,李英伦,范巧佳,等.四川宝兴虎耳草活性部位筛选[J].中草药,2009,40(S1):187-189.

[5] 罗厚蔚,吴葆金,陈节庵,等.虎耳草有效成分的研究[J].中国药科大学学报,1988,19(12):1-3.

[6] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].2010版.北京:中国医药科学出版社,2010.

A Quality Control Method for the Saxifraga Granules

ZHENG Yan, WANG Hong-xia, CHEN Sui-qing
(Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450008, China)

ObjectiveTo establish a quality control method of Saxifraga granules.MethodsThe analysis was performed on phenomenex hydro C18column (250 mm×4.6 mm, 4 μm), the mobile phase was MeOH-H2O (20∶80) with a flow rate at 1.0 mL/min, and detectional wavelength at 275 nm under column temperature 30 ℃.ResultsThere was a good linear relationship when the sample size of bergenin was at a range of 0.0202-0.202 μg(R2=0.9998), the recovery was 100.33%, with RSD at 1.92%.ConclusionThis method was sensitive, exact, and reproducible to be used for the quality control of the Saxifraga granules.

Saxifraga granules; HPLC; Quality control; Bergenin

R9

B

1671-8194（2014）23-0046-02

*通讯作者