鸡血藤对去卵巢豚鼠脂代谢影响的实验研究

刘仰斌，张志花

(赣南医学院，江西 赣州 341000)

随着卵巢功能的减退，绝经后的女性体内的雌激素水平明显下降，进而出现一系列生理代谢系统的改变，如:体重加重，骨质疏松，血脂增高，动脉硬化。许多疾病的发生率和死亡率也随之明显上升［1－2］。有资料研究表明，高血脂症是女性绝经后出现脑卒中、冠心病、心肌梗死、心脏猝死独立而重要的危险因素［3］。因此目前临床上常应用雌激素来治疗更年期女性患者因雌激素水平下降而引起的各种症状。但人工合成的雌激素应用时不良反应较大，限制了其在临床上的应用，因此寻找一种安全天然的雌激素就成为研究的热点。

鸡血藤是一种传统的活血化瘀中药材，全国各地均有分布，但主要产地为广东、广西、江西等南方地区，具有补血活血、调经止痛、舒经通络的作用。主治月经不调、经闭，麻木瘫痪，血虚萎黄，风湿痹痛等［4］。药理研究证实，鸡血藤具有较强的抗氧自由基、抗心律失常，降血压、改善血液系统，抑菌，增强人体免疫力，抗病毒活性及抗肿瘤等［5－9］。经研究其含有多种黄酮类化合物，如刺芒柄花素;染料木素;大豆黄酮;美皂异黄酮等。而这些黄酮类化合物，与雌激素有类似的作用，可调节生物体内代谢的活性，但毒副作用却很小。因此有些学者应用黄酮类化合物治疗因缺乏雌激素而引起的机体代谢异常［10］。本研究采用去卵巢大鼠建立大鼠骨代谢与脂代谢紊乱动物模型，观察鸡血藤提取物对去卵巢大鼠体重、血脂水平的影响。为其进一步的临床开发提供理论和实验依据。

1 材料

1.1 药品与试剂 鸡血藤购自赣南医学院第一附属医院中药房。取干燥鸡血藤中药材300g，加蒸馏水煎煮3次，每次30 min，合并煎液，用浓度95%的乙醇反复回流、过滤、浓缩，提取3次，得到鸡血藤提取物，经测定主要成份是黄酮类化合物，加蒸馏水至300mL，调整pH至7.0，最后置冰箱中备用，实验前用双蒸水稀释至实验各组所需浓度。甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白 (HDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、总胆固醇 (CHO)检测试剂盒 (均为上海酶联生物科技有限公司产品，中国上海)，水合氯醛 (批号:20101025，天津百世化工有限公司产品，中国天津)，戊酸雌二醇片(1 mg/片，批号:177A12，拜耳医药保健有限公司广州分公司产品，中国广州)。

1.2 仪器设备 HD－F2600全自动生化分析仪(济南汉方医疗器械有限公司产品，中国济南)，梅特勒托利多ME－104电子天平 (北京中仪汇丰科技有限公司产品，中国北京)，DW－86 W55超低温冰箱 (上海科菱威生物科技有限公司，中国上海)，SN－695智能放免测量仪 (北京泰亚赛福科技发展有限责任公司，中国北京)，WA－163－BXT－3不锈钢鼠兔两用解剖台 (北京亿百川科技发展有限公司产品，中国北京)，手术剪、刀、镊，烧杯，量杯，微量进样器等。

1.3 动物及分组 豚鼠30只，体质量350～400 g，清洁级，自由饮食，全部为雌性，由赣南医学院实验动物中心提供，动物中心许可证号:2008－0245。按实验动物使用的3R原则，在实验前所有豚鼠均给予人道的关怀。实验时30只豚鼠随机数字法分为5组:①正常对照组 (假手术组);②模型组 (卵巢切除组);③ 阳性药物对照组 (卵巢切除+戊酸雌二醇，80 mg/kg·d);④低剂量组(卵巢切除+鸡血藤提取物，40 mg/kg·d);⑤高剂量组 (卵巢切除+鸡血藤提取物，80 mg/kg·d)。每组6只，在实验前适应性喂养一周。

2 方法

2.1 豚鼠去卵巢模型的建立 术前豚鼠禁食一天，不禁水。用10%的水合氯醛 (0.35 mL/100 g)腹腔注射麻醉后，将豚鼠固定于解剖台上，清除干净豚鼠腹部毛，外科常规消毒，在耻骨联合上0.8～1.2 cm处正中切开皮肤、筋膜和腹膜，打开腹腔，切口大约1～1.3 cm，术中仔细寻找豚鼠一侧卵巢，确定为卵巢后，把卵巢拉出，剪取时，将卵巢下输卵管及脂肪一起用丝线结扎，再摘除卵巢，术后将子宫角送回腹腔中。用同样的方法摘除豚鼠另一侧卵巢，待双侧卵巢摘除后，关闭腹腔，消毒切口，把豚鼠置于干净的鼠笼内。正常对照组 (假手术组)不切除双侧卵巢，而是找到卵巢后，将其拉到切口外暴露数秒钟，然后重新放回腹腔内。术后1周内所有摘除卵巢的豚鼠均连续阴道涂片检查，以确定建模是否成功。

2.2 动物给药 术后1周建模成功后，阳性药物对照组用戊酸雌二醇水溶液灌胃，剂量为80 mg/kg·d，鸡血藤提取物低剂量、高剂量组分别按40 mg/kg·d、80 mg/kg·d鸡血藤提取物灌胃，正常对照组、模型组豚鼠每天等体积的生理盐水灌胃。1次/天，连续6周给药。

2.3 豚鼠Lee’s指数的测定 从给药当日开始，每周称一次体质量、量体长 (从豚鼠鼻尖至肛门的长度)，计算出每周各组豚鼠Lee’s指数。计算方法:Lee’s指数= ［(体重×1000)1/3］/体长。Lee＇s指数［11］:就是 (体重 ×1000)开三次根再除以体长，单位分别是g(体重)和cm(体长)。

2.4 血清各生化指标的测定 所有实验结束后，处死豚鼠，从腹主动脉取血2－3 mL，静置30 min后，4℃，离心10 min，3500 r/min，分离血清，于－40℃储存。严格按说明书操作，用 HDF2600全自动生化分析仪检测各组豚鼠血清中TG、LDL、HDL、CHO的含量

2.5 数据分析 实验所得数据用SPSS19.0统计软件进行分析，各组数据均值用 ()表示，对组间进行单因素方差分析，运用t检验，检验水准a=0.05。

3 结果

3.1 实验过程豚鼠状况分析 实验过程中各组豚鼠均保持平稳状态，没有出现豚鼠异常或死亡现象。术后连续一周阴道涂片检查，结果显示去卵巢豚鼠处于持续间情期，证实所有去卵巢豚鼠动情周期消失，表明建模成功。30只豚鼠实验中和实验后所取数据均有效，全部数据进入结果分析。

3.2 鸡血藤提取物对去卵巢豚鼠Lee’s指数的影响 与模型组相比，各浓度的鸡血藤提取物均可降低去卵巢豚鼠Lee’s指数，从第3周开始更明显，表明鸡血藤提取物可减轻豚鼠去卵巢后因体内雌激素缺乏所导致的肥胖，其中高剂量效果更好，见表1。

表1 各组豚鼠各周Lee’s指数的变化 (，n=6，g/cm)

表1 各组豚鼠各周Lee’s指数的变化 (，n=6，g/cm)

注:与对照组相比，*P＜0.01;与模型组相比，#P＜0.05，##P＜0.01

3.3 鸡血藤提取物对去卵巢豚鼠脂代谢的影响

应用酶法及全自动生化分析仪测定各组豚鼠血清中HDL、LDL、TG、CHO指标的含量，见表2。

与正常对照组比较，模型组豚鼠血清中LDL、TG、CHO含量均升高，有统计学差异，P＜0.05;而HDL含量则下降，也有统计学差异，P＜0.05。

与模型组比较，阳性药物对照组豚鼠血清中HDL含升高，有统计学差异，P＜0.01;而LDL、CHO含量则下降，有统计学差异，P＜0.01;TG虽降低，但无统计学差异。

与模型组比较，鸡血藤提取物各给药组豚鼠血清中HDL含量均升高，但高剂量组有统计学差异，P＜0.05;而LDL、TG、CHO含量则均下降，有统计学差异，P＜0.05或P＜0.01，并呈一定的量效关系，以高剂量效果更好。

表2 各组豚鼠血清中HDL、LDL、TG、CHO含量的变化 (，n=6，mmol/L)

表2 各组豚鼠血清中HDL、LDL、TG、CHO含量的变化 (，n=6，mmol/L)

注:与对照组相比，*P＜0.05;与模型组相比，#P＜0.05，##P＜0.01

4 讨论

随着经济的发展，我国已逐步进入到老年化国家的行列，步入绝经期的妇女也越来越多。妇女绝经后，由于体内雌激素水平的下降，很多器官的机能出现衰退，体内各种代谢也出现失常，尤其以脂代谢失常更明显。有研究发现，雌激素可以参与人体血脂的分解与代谢，妇女体内雌激素水平的高低与脂代谢密切相关，血液中雌激素浓度下降后，使妇女血脂升高，脂肪分布异常，导致妇女容易出现肥胖等高脂血症［3］。血脂的升高，由脂质过氧化产生的自由基就增多，进一步致使妇女脂代谢紊乱，进而导致其出现高血压、冠心病、糖尿病、脂肪肝等病症，严重影响妇女的健康、工作和生活［11］，因此有效控制绝经妇女的血脂，纠正其脂代谢紊乱，可以有效地预防和治疗因脂代谢紊乱引起的各种病症。目前临床多数的方法是直接给绝经妇女补充雌激素，来纠正其脂代谢紊乱，延缓绝经妇女的衰老。此方法短期内临床效果好，但长期使用会导致妇女出现严重的不良反应，而且也存在着其它的危险因素，因此找寻一种高效、不良反应低的雌激素替代药品，尤其是高效低毒的中草药物，来降低绝经妇女的血脂、延缓绝经妇女的衰老，成为目前众多医药研究人员开发和研究的热点。

为了评价各类成年动物的肥胖程度或高脂血症状态，研究人员常常采用肥胖指数 (Lee’s指数)来描述，Lee＇s指数高，动物肥胖程度或血脂就高［12］。经过多年的研究和应用，多数学者认为Lee＇s指数是一个能够比较客观地反映成年动物肥胖程度或高脂血症状态的良好指标，适用于研究人员对减肥药或肥胖病的研究。在本课题中，我们也采用了Lee＇s指数来评价豚鼠肥胖程度。

有研究发现，对于喂养高脂饲料后形成的高脂血症动物模型，黄酮类化合物能有效降低其血清中的 LDL －C、TG、CHO，增加 HDL－C［13］。而对于切除卵巢后因雌激素下降形成的高脂血症动物模型，鸡血藤提取物中的黄酮类化合物是否能产生这样的功效，目前未见有相关的报道，我们对此进行了研究。本实验中，我们只通过切除成年雌性豚鼠的卵巢，同时没有附加其它方法，模拟妇女绝经后的状态，获得了去卵巢高脂血症豚鼠模型，实验过程中各组豚鼠均保持平稳状态，没有出现豚鼠异常或死亡现象，表明本模型稳定性好，可重复操作。

在本实验中，我们观察了鸡血藤提取物对去卵巢豚鼠Lee’s指数及脂代谢的影响。实验结果发现，各浓度的鸡血藤提取物均可降低去卵巢豚鼠Lee’s指数，从第3周开始更明显，说明鸡血藤提取物可减轻豚鼠去卵巢后因体内雌激素缺乏所导致的肥胖，而且以高剂量效果更好。在脂代谢中，鸡血藤提取物可升高去卵巢豚鼠血清中HDL的含量，降低LDL、TG、CHO的含量，并呈一定的量效关系，以高剂量效果更好。有研究发现，对于肥胖或高脂血症患者，若血清中LDL、TG、CHO含量高，HDL含量低时，其患心血管疾病如高血压、冠心病、动脉硬化的危险性就较高［3］。本实验结果提示鸡血藤提取物通过调节血脂水平有预防绝经后妇女因肥胖导致心血管疾病的可能，但其具体作用机制尚需进一步探讨。

另外，有研究发现，妇女绝经后，体内的脂代谢异常与其体内的瘦素含量有关。瘦素是由脂质分泌的肽类激素，是肥胖基因的一种蛋白质产物，可调节人体内的脂代谢。在女性，血清瘦素也受雌激素水平的调节［14］，对于绝经前妇女的研究普遍认为，雌激素与血清瘦素水平呈明显的正相关关系［15］，因此雌激素对体内脂代谢的调节是否与瘦素有联系，也有待进一步的深入研究。

总之，鸡血藤提取物对去卵巢成年动物的脂代谢失衡有改善作用，表明鸡血藤提取物可能有类雌激素样功效。并且鸡血藤提取物水溶性很好，利用度高，来源天然，不良反应少，价格便宜，具有较好的应用前景。

［1］Rossouw JE，Anderson GL，Prentice RL，et al.Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women:principal results From the Women’s Health Initiative randomized controlled trial［J］.JAMA，2002，288(3):321－333

［2］Herrington DM，Reboussin DM，Brosnihan KB，et al.Effects of estrogen replacement on the progression of coronary atherosclerosis［J］.N Engl J Med，2000，343(8):522－529

［3］GONG Jue xiao，WANG Xin dong，GU Ming lin，et al.To research relationship between pre－and post－menopausal periods and number of years after menopause with blood lipid level in obese women［J］.Chin J Misdiagn，2011，11(12):2781－2783

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典(1部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:180

［5］LIN Yan，LI Ping，WANG Yan，et al.Effect of Active Part of Spatholobus Suberectus Flavonoid on Oxidative Stress of Human Pulmonary Adenocarcinoma Cell A549［J］.Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2012，18(4):190 －193

［6］CHENG Yue，FU Ying，WANG Zhi yu，et al.Determination on the Contents of Condensed Tannins in Spatholobus suberectus Dunn.Extracts and Primary Study on their Antitumor Activitiesv ［J］.Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni，2011，50(2):75 －80

［7］HU Ting jun，HE Cai mei，ZHONG Jing，et al.Preparation and Anti－bacterial Activities of Extracts from Reticulate millettia ［J］.Progress in Veterinary Medicine，2010，31(9):33－36

［8］XU Ai yu，CHEN Cong xian，XU Yong，et al.Protective effect of suberect spatholobus total flavonoids on mice with cerebral ischemia ［J］.BMU Journal，2012，35(5):339－341

［9］ZENG Fan li，CHENG Yue，CHEN Jian ping，et al.Study on in vitro Antiviral Activities of Different Extracts from Caulis Spatholobi［J］.Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2011，22(1):16－20

［10］GONG Hua fang，ZHANG Ya xing，WANG xiao dong，et al.Effects of genistein on glucose and lipid metabolism and the expression of serum leptin and resistin in ovariectomized SD rats［J］.Journal of Jinan University(Natural Science)，2011，32(3):324－327

［11］WANG Shuai，ZHAO Hong li，LI Lu，et al.Association of High－sensitivity C Reactive Protein，Homocysteine with Coronary Lesions and Traditional Cardiovascular Risk Factors in Postmenopausal Women ［J］.Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2013，19(6):301－304

［12］LIU Jian min，ZHENG Long，ZHANG Huan ling，et al.Establishment of Obesity Prone and Obesity Resistant Rats Induced by High－fat Diet［J］.Science Technology and Engineering，2012，12(28):7344－7346

［13］LIU Yang bin，Zhang Zhi hua.Experimental Research of sonchus oleracens flavonoid on atherosclerosis(AS)in rabbit with hyperlipemia ［J］.Journal of Xiang nan University(Medical Sciences)，2012，14(2):1－3

［14］Qiao Lin，Xu Liang zhi，Yang Ding zhuo，et al.A Preliminary Investigation of Relations of Fat Mass and Leptin to the Bone Mineral Density in Ovariectomic Rats［J］.Journal of Biomedical Engineering，2011，28(4):744－747

［15］GAO Li，ZHOU Wen jing，MA Yan miao，et al.Effects of Ethanol Extraction from Cassiae Semenon Leptin and NPY in Hyperlipidemia Rats［J］.Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2013，19(8):235－238