软骨凝集蛋白与C-myc在人非小细胞肺癌中的表达及其意义

文 浩，刘明建，曾湘宁

（镇安县人民医院胸外科1、病理科2，陕西 镇安 711500）

软骨凝集蛋白与C-myc在人非小细胞肺癌中的表达及其意义

文 浩1，刘明建2，曾湘宁1

（镇安县人民医院胸外科1、病理科2，陕西 镇安 711500）

目的探讨软骨凝集蛋白（Chondrolectin,CHODL）与C-myc在人非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测53例非小细胞肺癌石蜡标本以及43例癌旁对照组织标本，并进行相关分析。结果CHODL主要分布在胞质与胞膜中，其在癌组织中的阳性表达率为79.25%，明显高于在癌旁组织中的表达（18.60%），C-myc在癌组织中的表达率为60.37%，明显高于其在癌旁组织中过度表达（30.23%），且差异均具有统计学意义；CHODL在癌组织中的表达与淋巴结转移有关，而与年龄、性别、组织分化、TNM分期、肿块大小均无关；C-myc在非小细胞肺癌组织中的表达与淋巴结转移、组织学分化、TNM分期有关（P＜0.05），与年龄、性别、肿块大小无关（P＞0.05），且差异具有统计学意义；CHODL与C-myc在肺癌组织中的表达呈正相关。结论CHODL在肺癌组织中的作用可能与C-myc呈某种程度的相关性，并与肿瘤淋巴结转移相关，为CHODL在肿瘤转移方面打下基础。

肺癌；软骨凝集蛋白；C-myc；肿瘤标志物

肺癌为目前全世界最常见的恶性肿瘤之一，随着环境污染的加重，其发病率亦呈逐年上升趋势发展[1]。肺癌的发展为多因素、多阶段、多基因变异的结果，发病较为隐匿，早期发现就诊的患者极少，往往发现时都已经进展为晚期阶段，预后较差。因而寻找一种特异性的分子靶点，进行针对性的早期诊断与靶向治疗为近年来研究热点。软骨凝集蛋白(Chondrolectin，CHODL)为新发现的蛋白，之前研究主要集中在其在人体正常组织中表达情况，如睾丸血管平滑肌、前列腺平滑肌等[2]，然而新近研究发现CHODL在人肺癌组织中高表达，且与肿瘤的侵袭相关[3]。C-myc为一种原癌基因，其在核内表达一种特异性DNA结合蛋白[4]，研究发现C-myc在人类乳腺癌[5]、胃癌[6]、肾癌[7]、结肠癌[8]、弥漫性大B细胞瘤[9]等多种恶性肿瘤中高表达，参与到细胞分化、凋亡、周期与增值等过程。本研究首次探讨CHODL在非小细胞肺癌组织中的表达情况，并且进一步研究其与C-myc在非小细胞肺癌组织中表达的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究所用标本均来自我院2007年12月至2012年12月期间手术切除，并经病理学确诊为非小细胞肺癌石蜡标本，共计53例。其中男性35例，女性18例；年龄39～74岁，中位年龄58岁；伴淋巴结转移43例，不伴淋巴结转移10例；高分化18例，中分化22例，低分化13例。TNM分期标准：局限于黏膜或黏膜下层的早期胃癌定为T1；侵及胃壁肌层，但大小不超过一个分区的1/2者为T2；肿瘤侵及胃壁浆膜层，或虽未侵及浆膜层，但病变已大于一个分区的1/2，但未超出一个分区定位者为T3；肿瘤占一个分区以上或已累及周围脏器定位者为T4。TNM分期T1期和T2期共34例，T3期与T4期共19例；其中T1+T2组28例，T3+T4组39例。肿瘤≥3 cm者31例，＜3 cm者22例。另取自距癌组织边缘5 cm以上的组织，均经HE染色证实无肿瘤细胞浸润，无明显细胞增生等病变的癌旁组织43例。所有的病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。

1.2 方法 所有切片均使用4%的多聚甲醛固定，然后进行石蜡包埋，常规制备4 μm厚度连续切片，使用免疫组化SP法进行检测。严格按照说明书依次进行二甲苯脱蜡，柠檬酸缓冲液进行抗原修复，10%正常羊血清室温孵育，一抗-4度过夜(CHODL抗体购自Santa Cruz公司，货号：sc-54867，稀释为1:200；C-myc抗体购自Santa Cruz公司，货号：sc-40，稀释为1:300)，进而常温二抗孵育、DAB显色等步骤。使用PBS代替一抗作为阴性对照。SP试剂盒与DAB显色剂均购自中山金桥生物有限公司。

1.3 结果判定 根据参考文献[10]，采用半定量积分方法，每张切片选择5个高倍视野，计数不少于1 000个细胞，依据视野下阳性细胞数进行评分：阳性细胞数为0～24%为1分，25%～49%为2分，50%～74%为3分，＞75%为4分。依据染色强度评分：细胞未着色或呈淡黄色为0分，棕黄色为1分，棕褐色为2分。采用将显色深浅与显色范围评分相乘的方法进行综合评分，而为便于统计分析，统一将0～3分为阴性，4～8分为阳性。

1.4 统计学方法 使用SPSS18.0统计软件对结果进行处理，计数资料的组间比较采用χ2检验或Fisher精确检验，配对资料采用Spearman秩相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 CHODL与C-myc在人非小细胞肺癌中的表达情况 结果显示，CHODL主要分布在胞质与胞膜中，53例癌组织中有42例高表达CHODL，其高表达率为79.25%，明显高于CHODL在癌旁组织中的表达率(8/43，18.60%)，差异有统计学意义(χ2=34.980，P＜0.05)；而C-myc在癌组织中的表达率为60.37%(32/53)，明显高于其在癌旁组织中过度表达(13/43，30.23%)，差异具有统计学意义(χ2=8.663，P＜0.05)，见图1～图4。

图1 CHODL在非小细胞肺癌组织中的强阳性表达（×400）；图2 C-myc在非小细胞肺癌组织中的阳性表达（×400）；图3 阴性对照（×200）；图4 癌旁组织（×200）。

2.2 CHODL与C-myc的表达与临床病理参数之间的关系 CHODL在非小细胞肺癌组织中的表达与淋巴结转移有关，差异具有统计学意义(χ2=4.221，P=0.040)，而与年龄、性别、组织分化、TNM分期、肿块大小均无关(P＞0.05)；C-myc在非小细胞肺癌组织中的表达与淋巴结转移(χ2=6.448，P=0.011)、组织学分化(χ2=8.286，P=0.016)、TNM分期(χ2=19.145， P=0.000)有关，而与年龄、性别、肿块大小无关(P＞0.05)，见表1。

2.3 CHODL与C-myc在非小细胞肺癌组织中表达的关系 结果显示，53例癌组织中CHODL与C-myc同时高表达者29例，同时低表达者8例，两者表达呈正相关，且差异具有统计学意义(r=0.346，P=0.012)，见表2。

表1 CHODL与C-myc在非小细胞肺癌组织中的表达与临床病理参数之间的关系(例)

表2 CHODL与C-myc在非小细胞肺癌组织中表达的相关性(例)

3 讨 论

靶向治疗由于其针对性强，肿瘤杀伤作用明显，副作用低，一直为近年来肿瘤治疗研究的热点。CHODL位于21号染色体长臂，为C型凝集素家族中的一员，可以编码一条具有碳水化合物识别区域的跨膜溶解蛋白，参与到糖蛋白的内吞作用，由于主要定位在细胞核周围的区域，因而转录过程的变异可导致其出现一些变异蛋白。C型凝集素家族是一组动物蛋白质，其发挥作用的钙离子依赖性的碳水化合物结合区并不是必须的，从而区别于其他凝集素。之前的研究发现CHODL的生理作用主要包括细胞的识别、细胞之间的通信、细胞与细胞之间粘附、细胞外基质与细胞之间的粘附等[11]，如一些依赖于蛋白凝集素家族的蛋白聚糖，在细胞外基质结构的稳定性维持上，以及ECM与外界细胞交互作用之间具有重要的作用[12]。

研究发现CHODL的结合体在T淋巴细胞中具有不同程度的表达，白细胞与内皮细胞之间的相互作用部分依赖于C型凝集素跨膜结合域的体现的选择作用[13]。凝集素与胚胎的发育和免疫反应密切相关，主要通过与分子之间的识别而发挥作用。一些钙连接蛋白，如钙网蛋白，这些蛋白结合到错误折叠蛋白上后可以阻止错误蛋白从内质网向高尔基体的输送，因而如果发生在肿瘤细胞中可能会有相似的作用，从而阻止致瘤蛋白的产生。Masuda等[14]的研究发现，CHODL在肺癌的发生发展中具有重要的作用，并参与到肿瘤的侵袭与转移。本研究发现CHODL在非小细胞肺癌中明显高于其在癌旁组织中的表达。

C-myc为一种原核基因，人C-myc基因定位于第8条染色体上，由3个外显子和2个内含子组成，其表达产物主要定位于细胞核，为细胞传导的下游基因，作为反式作用因子，可以直接激活转录活性的转录因子样作用，决定细胞从G0/G1向S期转变[15]。C-myc对细胞具有双重作用，既可以刺激细胞凋亡，也可促进细胞增殖。研究发现C-myc蛋白的羧基端含核酸靶序列，氨基酸富含谷氨酰氨和脯氨酸，而这些都为肿瘤转化所必需的氨基酸[16]。研究表明C-myc在人类多种恶性肿瘤中都有表达[17]。本研究亦发现C-myc在人非小细胞肺癌组织中高表达，与之前的研究结果类似。

综上所述，本研究首次发现CHODL在人非小细胞肺癌组织中明显高表达，且其表达与肿瘤淋巴结转移与否密切相关，而C-myc同样在非小细胞肺癌组织中的表达亦明显高于其癌旁组织，且与淋巴结转移，肿瘤分化程度，TNM分期密切相关。两者的相关性分析发现CHODL与C-myc在非小细胞肺癌组织中的表达呈正相关，但两者具体机制还有待我们进一步的探讨，以期CHODL能够成为非小细胞肺癌诊断与治疗的新靶点。

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Expression and clinical significance of chondrolectin and C-myc in human non-small cell lung cancer.WEN

Hao1,LIU Ming-jian2,ZENG Xiang-ning1.
Department of Thoracic Surgery1,Department of Pathology2,County People's Hospital of Zhenan,Zhenan 711500,Shaanxi,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of chondrolectin and C-myc in human non-small cell lung cancer and their clinical implication.MethodsImmunohistochemical study was carried out to examine the expression of chondrolectin and C-myc and its association with clinicopathologic features in human non-small cell lung cancer.ResultsThe positive rate for chondrolectin and C-myc expression in squamous tissues (79.25%and 60.73%)was significantly higher than those in non-tumor tissues(18.60%and 30.23%);the positive expression of chondrolectin was not correlated with the patient's gender,age and histologic differentiation except that lymph node metastasis,the positive expression of C-myc was correlated with the patient's lymph node metastasis,histologic differentiation and TNM stage,but without gender,age and size.In non-small cell lung cancer chondrolectin was positively correlated with C-myc.Conclusion Chondrolectin may be an important molecular marker in human non-small cell lung cancer.

Lung cancer;Chondrolectin;C-myc;Cancer marker

R734.2

A

1003—6350（2014）09—1262—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.09.0490

2013-10-21)

文 浩。E-mail：wenhaohhh@163.com